于彤彧
（天津医科大学第二医院 天津 300211）
【摘要】 目的：通过对茵兰益肝胶囊中甘草酸及甘草苷含量的测定进而建立对该药质量控制的方法。方法：采用HPLC法对茵兰益肝胶囊中甘草酸及甘草苷的含量进行测定。结果：甘草苷在0.0816～1.36 μg范围内具有良好的线性关系；甘草酸单铵盐在0.1342～2.6848μg范围内具有良好的线性关系。结论：该方法操作简单易行，线性关系良好，有较好的稳定性和重复性。
【关键词】 甘草酸；甘草苷；含量测定；HPLC
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）09-0387-02
该药是即将报批的六类新药，由丹参、党参、甘草、黄芪、郁金、黄精等中药提取加工而成，具有清热利湿，补裨益血，益气解郁的作用。用于慢性肝炎、早期肝硬化、脂肪肝、中毒性肝炎等疾病的治疗。甘草中的甘草酸和甘草苷为两个代表性的指标性成分，通常被做为质量评价的依据[1]。
1.材料
1.1 仪器：安捷伦液相色谱仪1100系列，包括：G1310A 四元液相梯度泵，G1313A 自动进样器，G1314 VWD检测器，CO-201柱温箱，安捷伦色谱工作站；电子分析天平（AB204-N）；超声仪（AS3120）；水浴锅
1.2 试剂：甲醇（分析纯，色谱纯）、乙腈（色谱纯）、乙醇（分析纯）、正丁醇（分析纯），均为天津市康科德科技有限公司生产（规格为500mL）；磷酸（分析纯），为天津市风船化学试剂科技有限公司生产（规格为500mL）；甲酸（分析纯），为天津化学试剂一厂生产（规格为500mL）；去离子水（娃哈哈纯净水）；微孔滤膜（13×0.45，有机系），为上海密粒膜分离技术有限公司生产
1.3 药品：茵兰益肝胶囊（批号：A100587、A100921、A100345）；甘草酸对照品、甘草酸单铵盐对照品，均购自中国药品生物制品检定所；阴性对照品，由实验室根据药方自制
2.方法[1~3]
2.1 色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18 (5?m，250×4.6mm) No.8037753；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液，梯度洗脱,条件为0～8min（20:80），8～25min（20:80～50:50），25～30min（50:50～100:0），30～31min（100:0～20:80），31～36min（20:80）；
流动相流速：1mL?min-1；检测波长：237nm；进样量：20?L；柱温：30℃
2.2 溶液制备
2.2.1对照品溶液制备 精密称取甘草苷对照品3.40mg置25mL容量瓶内，加70%甲醇定容至刻度，摇匀，制成甘草苷对照品储备液（0.136mg?mL-1）；精密称取甘草酸单铵盐对照品8.39mg置25mL容量瓶内，加70%甲醇定容至刻度，摇匀，制成甘草酸单铵盐对照品储备液（0.3356 mg?mL-1）。分别精密吸取甘草苷对照品储备液1.5mL和甘草酸单铵盐对照品储备液1.0mL，置10mL容量瓶内，用70%甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。
2.2.2供试品溶液制备 取茵兰益肝胶囊10粒，收集内容物，混匀，研细，取粉末约1g, 精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25mL，密塞，称重，水浴加热回流30min，放至室温，再称重，并用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取续滤液，即得。
2.3 方法学考察
2.3.1线性考察 精密吸取甘草苷对照品溶液0.3mL、1.0mL、1.5mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL和甘草酸单铵盐对照品溶液0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL，至10mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，摇匀，并按上述色谱条件测定，记录峰面积，计算得到甘草苷的回归方程：Y=1900.2X+2.3693(r=0.9999 ),甘草酸的回归方程：Y=3887.3X+32.236(r=0.9999),表明甘草苷和甘草酸单铵盐均具有良好的线性关系。
2.3.2精密度实验 取茵兰益肝胶囊，按2.2.2项下方法处理一份，连续进样6次，计算甘草苷和甘草酸单铵盐的峰面积的RSD值分别为1.55%和0.51%，说明仪器精密度良好。
2.3.3稳定性实验 将对照品溶液和供试品溶液，分别在0、3、6、9、12、15、18、21、24h分析测定，计算出对照品甘草苷和甘草酸单铵盐的峰面积RSD值分别为0.51%和0.61%，供试品干甘草苷和甘草酸峰面积的RSD值分别为1.68%和0.64%，表明对照品溶液和供试品溶液在室温避光条件下放置24h稳定。
2.3.4重复性实验 按2.2.2项下方法平行处理6份样品，测定，甘草苷和甘草酸含量的RSD值分别为1.82%和1.03%，说明重复性良好。
2.3.5回收率实验 精密称取6份样品，每份约0.5g，分别置6个50mL具塞锥形瓶中，每份中精密加入甘草苷对照品储备液1.8mL和甘草酸单铵盐对照品储备溶液1.5mL，分别精密加入70%甲醇25mL，按2.2.2项下方法制备6份供试品溶液，进样测定，甘草苷和甘草酸加样回收的RSD值分别为1.85%和1.82%，说明加样回收较好。
3.含量测定
按2.2.2项下方法制备供试品溶液，进行测定，计算甘草苷及甘草酸的含量，结果见表3-1。
4.讨论
茵兰益肝胶囊作为即将报批的六类新药，需建立合理的质量控制方法。本实验选择测定该药中主要成分甘草的两个指标成分甘草苷和甘草酸的含量，并通过其测定结果分析该药质量，对该药建立合理的质控方法有指导意义。
【参考文献】
[1]中国药典2010年版．一部[S]．2010：80．
[2]代琪等. HPLC 测定复方红豆杉胶囊中甘草苷和甘草酸的含量[J].重庆中草药研究，2013，（1）；6.
[3]刘香南，等.“一测多评”法测定甘草中6 种有效成分含量[J].中国实验方剂学杂志，2013，19，(24)；56.
论文作者:于彤彧
论文发表刊物:《医药前沿》2016年3月第9期
论文发表时间:2016/5/18
标签：甘草论文; 铵盐论文; 甘草酸论文; 溶液论文; 精密论文; 甲醇论文; 含量论文; 《医药前沿》2016年3月第9期论文;