山东省威海市立医院南院区检验科 264200
摘要：目的：分析近四年来产ESBLs大肠埃希氏菌临床分离株的耐药性变迁，指导临床对抗菌药物合理的应用。方法：常规方法进行菌株分离，用ATB半自动微生物分析仪进行菌株鉴定，K-B法做药敏试验，ESBLs采用双纸片确认试验检测，对近四年来我院大肠埃希氏菌的耐药性进行总结分析。结果：近四年来我院临床标本中共分离到大肠埃希氏菌198例。其中产ESBLs大肠埃希氏菌株95例约占47.9%，有逐年上升趋势。产ESBLs大肠埃希氏菌对青霉素和三代头孢菌素耐药率最高，对亚胺培南均为敏感。结论：随着大肠埃希氏菌产ESBLs耐药菌株的逐年上升，临床治疗应根据药物敏感试验结果及耐药性的检测正确合理的应用抗菌药物。
关键词：大肠埃希氏菌；超广谱β内酰胺酶；耐药性；分析
大肠埃希菌是临床分离最常见的致病菌，近年来随着抗菌药物的广泛应用，临床上多重耐药的产ESBLS大肠艾希菌不断增多。ESBLS是由质粒介导，通过接合、转化、转导等形成耐药基因，能够水解青霉素类、头孢菌素类及单环类抗生素的β—内酰胺酶，但其活性能被某些β—内酰胺酶抑制剂所抑制①。为了指导临床更合理的应用抗生素，有必要对大肠埃希氏菌进行长期、动态的监测分析。
结果报告如下：
材料与方法
一、材料
（一）菌株来源
我院2010年1月—2014年12月从临床，痰、脓液、尿、血等标本中分离。同一患者同一部位多次分离到的菌株未重复计入。
（二）仪器与试剂
ATB半自动微生物分析仪，ID 32GN鉴定卡，为法国生物梅里埃公司产品。药敏用K—B法。培养基为M—H琼脂培养基。
（三）药敏纸片及方法
按2008年NCCLS M100-S10推荐的酶抑制剂增强试验纸片扩散法测定ESBLS指南进行。将头孢他定和头孢他定加棒酸，头孢噻肟和头孢噻肟加棒酸。（所用抗菌纸片为OXOID公司产品）。两组药敏纸片分别贴在同一个MH琼脂平板上，若任何一组含棒酸的药敏纸片与相应不含棒酸的药敏纸片抑菌环直径差值>=5MM，确定为产ESBLS菌株。
二、方法
㈠菌株分离鉴定及药敏
标本采集、分离培养严格按照《全国临床检验操作规程》第二版进行，获得纯培养后，经革兰染色，氧化酶试验等初筛，再ATB分析仪进行菌株鉴定和药敏分析，严格按仪器操作规程进行操作。质控菌株为大肠埃希菌ATCC2599ZZ
㈡超广谱β内酰胺酶（EsBLs）测定
采用美国国家临床实验室标准委员会（NCCLS）推荐的筛选和确认试验
㈢调查方法
对我院近四年来大肠埃希氏菌的耐药进展进行总结分析
三、结果
（一）菌株检出情况：
近四年来我院感染标本中共分离出大肠埃希氏菌198例，其中95株产ESBLs，阳性率47.9%，呈逐年增长趋势。
（二）标本检出情况
尿50份，痰52份，脓液23份，穿刺液19份，咽拭子24份，血10份，其他20份
（三）产ESBLs大肠埃希氏菌对抗菌药物的耐药性
产ESBLs菌株对抗菌药物耐药率明显高于非产酶菌株，对青霉素、三代头孢菌素高度耐药，对亚胺培南、头孢哌酮-舒巴坦耐药率最小，用头孢他啶和头孢他啶加棒酸检测ESBLs发生率为11.4%，而用头孢噻肟和头孢噻肟加棒酸检测ESBLs发生率为36.5%，可能与国内大肠埃希氏的基因型和抗菌药物的应用有关。
讨论：
ESBLs大多来源于TEM-1，TEM-2，SHV-1的基因突变，由1-4个氨基酸替换而形成的新酶蛋白，它是细菌质粒上编码ESBLs的耐药基因表达，能灭活含氧亚氨基侧链的第三代头孢菌素和单环β内酰胺类抗菌药物。② ESBLs主要由肠杆菌科细菌产生，以肺炎克雷伯和大肠埃希菌为常见，产ESBLs菌株不仅对第三代头孢菌素和氨曲南耐药，而且对氨基糖苷类、喹诺酮类、磺胺类呈交叉耐药。正确使用抗菌药物，有助于控制其播散与爆发流行。
近年来检出的大肠埃希菌，产ESBLs酶数量有明显增长。其对15种抗菌药物的耐药性均显著高于非产ESBLs，③本调查资料表明：95株产ESBLs大肠埃希氏菌对15种常见药物的耐药率在50%以上的有8种，耐药率大于70%的占5种，分别为AMP、CIP、SXT、KZ、CXM、CTX。对青霉素类抗生素AMP的耐药率最高达95.9%，但对AMC的耐药率仅为45.8%，说明大肠埃希氏菌对青霉素的耐药性很大程度上是因为产生了ESBLs所致。大肠埃希氏菌对IPM和MEM最敏感，未发现耐IPM和MEM的大肠埃希氏菌FOX.AMK较敏感，而CTX的耐药率为69.2%，可能与国内临床常用CTX所致。大肠埃希氏菌对第四代头孢菌素（FEP）和氨基糖苷类（AK）抗菌药物的耐药率分别为26.7%和13.1%。头菌霉素类的（FOX）的 耐药率也 逐年有所增高为15.7%，细菌对头孢西丁的耐药性可能是细菌细胞膜通透性下降和产AMPC酶所致，产ESBLs的大肠埃希菌分离株，临床上可能对青霉素类、头孢菌素类或氨曲南治疗无效，亚胺培南和广谱头孢菌素最常用。所有抗菌药物都存在体外\体内的不一致性（包括亚胺培南）。即使体外对部分药物敏感，体内也有可能耐药，细菌室应开展对ESBLs的检测。对院内感染的大肠埃希菌治疗起指导性作用，以便临床正确的选用抗菌药物，减少盲目性。
调查资料表明，随着新抗生素的不断开发及临床的广泛应用，大肠埃希菌的耐药菌株将会继续增加。④ 为了使临床更好的了解细菌的耐药性变迁及抗生药物的正确使用，细菌检验的水平也要不断提高，并深入临床紧密联系，并且要标准规范的操作，才能为临床提供可靠的数据。
参考文献：
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[5]徐晓燕 邹朝萍 产超广谱β内酰胺酶细菌的耐药性分析【J】 医学检验与临床2006，4：92，89
论文作者:孙宇光,纪元
论文发表刊物:《健康世界》2015年3期供稿
论文发表时间:2015/10/28
标签：大肠论文; 菌株论文; 耐药性论文; 头孢论文; 头孢菌素论文; 药物论文; 细菌论文; 《健康世界》2015年3期供稿论文;