摘要：2-羟基-3-萘甲酸-2-氯苯胺广泛应用在有机发光二极管（OLED）、药品、材料等行业中间体中，需有准确可靠，操作方便、成本低的检测方法对其含量进行检测。本文从液液萃取、固相萃取对样品进行净化，从HPLC条件优化着手，用二极管阵列检测器、液相质谱（LC-MS）等多种方法对专属性进行确证，并从线性范围、准确度、精密度，检出限、定量限等指标对方法进行确认，开发出符合应用要求的HPLC检测方法。
关键词：有机发光二极管；高效液相色谱法；固相萃取；液相质谱
引言：2-羟基-3-萘甲酸-2-氯苯胺，化学式为：C17H12ClNO2，在OLED材料与药品行业作为重要的原料而应用广泛。由于OLED对原料与产品的纯度要求非常高[1]，其合成粗品与后面的纯化过程含量检测对于质量控制至关重要，而HPLC检测在OLED行业优势明显。为保证HPLC方法检测结果科学，CNAS-CL01要求，检测方法在实际使用前必须进行验证[2]。
1.实验仪器与试剂
超纯水；标准物质；色谱纯乙腈、甲醇、TFA；分析纯级别二氯甲烷；柱层析硅胶（100~200目）岛津LCMS-2020，DUIS（ESI、APCI）源；固相萃取装置；Agilent1260 HPLC，带DAD检测器；可精确至0.0001g分析天平；超声波清洗仪；往复式摇床；其他常用玻璃器皿。
2.前处理优化
2.1 称取2-羟基-3-萘甲酸-2-氯苯胺粗品50mg于50ml离心管中，加入25ml二氯甲烷溶解后再加入25ml纯水，摇床震摇5min后离心5.0min分层，弃去水相层，重复以上操作，直到水相接近中性。
2.2 将上述水洗后的样品溶液全部过自制硅胶小柱，并用二氯甲烷50ml少量多次淋洗与100ml容量瓶中，二氯甲烷定容至刻度摇匀，过0.45µm有机滤膜装瓶备测。
3.色谱条件优化
3.1检测波长选择
目标化合物波长202nm、236nm、292nm、339nm分别有紫外光谱吸收峰，考虑到低波长干扰大，选择339nm作为检测波长。
3.2色谱柱选择
3.2.1 Agilent XDB-C18 4.6×100mm，3.5μm 结果：柱压高。
3.2.2 Waters T3，C18 250mm×4.6mm，5.0μm（最终选择柱子）。
3.2.3 phenomenex XB-C18 4.6×100mm，2.6μm 结果：柱压高。
3.3流动相调整，流动相 A：乙腈（甲醇） B：水（0.1%三氟乙酸）
3.3.1甲醇-水（0.1%TFA）=7-3，结果：基线波动较大
3.3.2 乙腈-水（0.1%TFA）=7-3，结果：主峰保留时间过长
3.3.3梯度洗脱调整：0-3min，50%乙腈，3-15min：乙腈：50%-90% 结果：分离不理想
3.3.4梯度洗脱调整：0-3min，50%乙腈，3-15min：乙腈：50%-80%结果：杂质分离理想（最终流动相）
3.4缓冲剂使用（水相加入0.1%三氟乙酸明显改善峰型）
图1 色谱图对比
3.5柱温的选择
温度的变化可以引起待测物在流动相和固定相间分配系数的变化[3]，对25℃、30℃、35℃、40℃四个柱温分别进行验证，发现对分离效果与保留时间的影响不显著，为了保护仪器与色谱柱，选择柱温为30℃。
4.方法确认
4.1专属性
4.1.1方法空白实验
检测过程中同时进行方法空白实验，结果显示，方法空白无干扰。
4.1.用2种色谱柱与色谱条件定性，样品主峰与标准品保留时间基本一样
4.1.1 Waters T3，C18 250×4.6mm，5.0μm 乙腈-水（0.1%TFA）=7-3，标与样保留时间分别为：12.56、12.62min。
4.1.2 Kinetex XB-C18 4.6×100mm，2.6μm 甲醇-水（0.1%TFA）=7-3，标与样保留时间分别为：5.23、5.17min。
4.1.3用DAD对标物与样品主峰进行光谱扫描，相似性很大。
4.1.4质谱定性，M/Z与理论值一致，并且样品主峰与标准品M/Z基本一样。
图3 质谱图对比
4.2准确度（本底值36.15%，3水平3平行加标实验）
4.2.1加标浓度10%，三平行：91.42、92.37、90.66%，平均回收率91.48 %
4.2.2加标浓度20%，三平行：93.22、90.17、92.59，平均回收率91.99 %
4.2.3加标浓度30%，三平行：95.35、91.79、92.42，平均回收率93.19 %
4.3精密度
6平行结果为：35.72%、36.39%、35.31%、37.28%、37.62%、34.55%，RSD=3.26%＜5.0%
4.4检出限与定量限
分别以方法空白的3倍信噪比作为检出限，10倍信噪比作为定量限，得到检出限（S/N=3）为0.01%，定量限（S/N=10）为0.02%。
4.4线性与范围
配制1000、500、100、50、10、5mg/L的系列标准溶液上机检测，拟合标准曲线，得到相关系数r=0.9997，表明在此浓度范围内浓度与峰面积呈现良好的线性关系。
结束语
本次对2-羟基-3-萘甲酸-2-氯苯胺合成粗品的高效液相色谱检测方法开发与验证，样品经过净化处理后上HPLC检测，通过色谱柱选择，流动相调整等探索出比较好的色谱条件，再用LC-MS等手段排除假阳性干扰，到最终对方法如准确度、精密度等指标的确认，得到符合应用的要求的HPLC方法，可作为实验室监控2-羟基-3-萘甲酸-2-氯苯胺粗品含量使用。
参考文献：
[1]韩朝刚.OLED材料中间体的纯化方法研究[J].应用化工2011，40（12）：2170-2171+2175.
[2]CNAS-CL01：2018《检测和校准实验室能力认可准则》[M].北京：中国计量出版社，2018.
[3]王和兴，黎源倩，雍莉，谷素英，杨小琪.固相萃取-高效液相色谱法同时测定大豆和大米中的磺酰脲类和二苯醚类除草剂残留[J].色谱，2007，vol.25no.4：536-540.
作者简介：徐炫宗（1984-），男，工学学士学位，工程师，研究方向：化学品、药品、食品质量与安全，联系邮箱：371812687@qq.com。
邓浩楠（James Deng），男，伦敦大学学院，化学系，研究方向：材料，分析化学。
论文作者:徐炫宗,邓浩楠
论文发表刊物:《基层建设》2018年第24期
论文发表时间:2018/9/18
标签：色谱论文; 氯苯论文; 方法论文; 羟基论文; 甲酸论文; 样品论文; 甲烷论文; 《基层建设》2018年第24期论文;