梅品超[1]2000年在《人胚海马酵母双杂交cDNA文库的构建和FMR1、PS1、PS2相互作用蛋白的研究》文中研究指明神经系统疾病分子机制的研究是神经科学、分子生物学和遗传学研究的重要内容。本文研究了与神经系统疾病相关的三个致病基因FMR1、PS1和PS2的相互作用蛋白，为FMR1、PS1和PS2的功能研究提供新的线索，丰富对它们的认识。 一 与FMRP相互作用蛋白的筛选 FMRP是脆性X综合症致病基因FMR1编码的蛋白质，具有RNA结合的活性，可能作为穿梭蛋白在细胞核和细胞质之间运载RNA。对于它的功能尚不清楚。我们选用以5月龄人胚海马为材料构建的酵母双杂交cDNA文库，筛选与FMRP相互作用蛋白。 构建的DNA结合结构域载体pGBT9的酵母双杂交cDNA文库的独立克隆数约为1×10~6，插入片段长度约1.0kb，有效克隆百分比约60％；DNA激活结构域载体pGAD10的酵母双杂交cDNA文库的独立克隆数约为2.5×10~6，插入片段长度约1.5kb，有效克隆百分比约90％。 以14外显子突变的全长FMRP作为诱饵，运用酵母双杂交体系筛选人胚海马酵母双杂交cDNA文库，发现了一个与之结合的蛋白NDK／NM23 2H。根据相互作用区域定位实验推测FMRP与NDK／NM23 2H可能以三种形式结合：1．FMRP全蛋白；2．FMRP第14、15外显子；3．FMRP isoform 1、isoform7的羧基端。NDK／NM23 2H是c-myc基因的反式作用因子，调节c-myc基因的转录表达，还催化细胞内除ATP以外的其它NTP的生成。FMRP和NDK／NM23 2H共同的组织学细胞学定位提示FMRP可能通过与NDK／NM23 2H的结合，间接参与基因的表达调控，亦可能影响NDK／NM23 2H的酶活性。
陈雨亭, B, Bardoni, 余珉, 朱宁[2]1999年在《FMRP与TDG蛋白的相互作用》文中研究表明脆性X智力低下蛋白FMRP表达的缺乏可以导致最常见的遗传性智力低下疾病———脆性X综合征 .用酵母双杂交体系筛选与FMRP相互作用的蛋白质 ,以期通过相互作用的蛋白质研究与FMRP相关的生化途径 .从小鼠胚胎cDNA文库中得到一个与FMRP特异相互作用蛋白的cDNA (Genbank号af1 0 2 875 ) .该cDNA编码的蛋白与人的G/T错配DNA胸腺嘧啶糖苷酶 (hTDG )高度同源 .通过多种FMRP选择剪接异构体或缺失体与一系列TDG缺失体间相互作用的研究 ,确定了FMRP与TDG的相互作用发生在FMRP第 1 3外显子 (第 397～ 42 5氨基酸残基 )和TDG第 1 2 2～ 34 6氨基酸残基区域内 .上述结果有助于深入研究FMRP涉及的生化途径 .
李斌元, 何淑雅, 王桂良, 马云, 孙春莉[3]2005年在《FXR2酵母双杂交饵载体的构建及酵母菌转化》文中指出目的构建FXR2酵母双杂交系统的“饵”质粒,并转化酵母菌,为筛选FXR2P互作蛋白作基础。方法提取pMD18-T-FXR2,酶切后将FXR2基因连接到MATCHMAKERLexATwo-HybridSystem中的plexA质粒上,得到“诱饵”(Bait)-plexA-FXR2,导入大肠杆菌扩增,筛选阳性克隆并提取重组Bait质粒,再转入酵母菌EGY48(p8op-lacZ)。结果通过遗传学方法筛选得到构建成功的plexA-FXR2;通过营养缺陷筛选,证明Bait重组质粒转入酵母菌中。结论成功构建Bait质粒并使酵母菌转化。
刘中原, 姜波, 吕佳欣, 李新苹, 高彩球[4]2019年在《刚毛柽柳Th2CysPrx基因的互作蛋白及其表达模式分析》文中提出【目的】使用酵母双杂交系统研究刚毛柽柳中获得的2CysPrx(硫氧还蛋白过氧化物酶)基因(命名为Th2CysPrx)及编码蛋白的功能。【方法】通过酵母双杂交系统对该基因编码蛋白的互作蛋白进行筛选,进一步利用qRT-PCR技术分析NaCl和PEG_(6000 )胁迫下刚毛柽柳叶组织和根部组织中Th2CysPrx基因与其互作蛋白基因的表达模式。【结果】酵母双杂交系统筛选获得了4个可能与Th2CysPrx互作的蛋白,分别为丙氨酸-乙醛酸转氨酶2(alanine-glyoxylate aminotransferase 2,ThAGT2)、苹果酸脱氢酶(malate dehydrogenase,ThMDH)、黄酮醇合酶(flavonol synthase,ThFLS)和扩展蛋白(expansin,ThEXP)。基因表达分析结果显示:盐胁迫下,柽柳叶和根中,Th2CysPrx和ThAGT2基因的表达模式基本一致;而干旱胁迫下,Th2CysPrx和ThAGT2基因在叶和根中具有相同的表达模式。【结论】在盐和干旱胁迫下,ThAGT2基因与Th2CysPrx表达模式均趋于一致,表明Th2CysPrx基因均可能通过与ThAGT2基因的互作共同参与抗逆过程,为进一步研究Th2CysPrx基因的抗逆机制,以及与其他抗逆基因的关系提供了依据。
张雪琼, 徐宏喜, 刘义飞, 胡志刚, 刘霞[5]2019年在《本草基因组学的学科建设现状与展望》文中指出本草基因组学是中药学与基因组学的交叉学科,是涵盖药用生物多组学研究和中药与人体相互多组学研究的综合性学科。在药用模式生物、中药合成生物学、中药分子鉴定和药用植物分子育种、药物体内过程组学、中药道地性和药性研究等领域得到了广泛应用,取得了一批标志性成果。随着《中华人民共和国中医药法》《中医药发展战略规划纲要(2016—2030年)》等重要文件的发布,中医药产业进入了全新的、高水平的发展机遇期,复合创新型研究人才的培养是中医药产业发展及医药专业高校教学改革面临的关键问题,该学科的建立对于中医药现代化发展尤为重要,已有多所高等院校开设《本草基因组学》课程,初步形成了特色鲜明的本草基因组学人才培养体系。该文从本草基因组学研究进展、教学开展情况、教材编写背景、主要内容及关键技术、学科特色、学科建设展望方面进行阐述,为本草基因组学的学科建设、人才培养和科学研究提供理论依据和方法学支撑。
参考文献：
[1]. 人胚海马酵母双杂交cDNA文库的构建和FMR1、PS1、PS2相互作用蛋白的研究[D]. 梅品超. 中国协和医科大学. 2000
[2]. FMRP与TDG蛋白的相互作用[J]. 陈雨亭, B, Bardoni, 余珉, 朱宁. 科学通报. 1999
[3]. FXR2酵母双杂交饵载体的构建及酵母菌转化[J]. 李斌元, 何淑雅, 王桂良, 马云, 孙春莉. 南华大学学报(医学版). 2005
[4]. 刚毛柽柳Th2CysPrx基因的互作蛋白及其表达模式分析[J]. 刘中原, 姜波, 吕佳欣, 李新苹, 高彩球. 南京林业大学学报(自然科学版). 2019
[5]. 本草基因组学的学科建设现状与展望[J]. 张雪琼, 徐宏喜, 刘义飞, 胡志刚, 刘霞. 中国实验方剂学杂志. 2019