【摘要】 目的 应用结核分枝杆菌(MTB)/利福平(RIF)耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF）对肺外结核患者的非呼吸系统标本中的MTB及其RIF耐药性进行检测，探讨该方法在肺外结核病诊断中的应用价值，为临床上的应用提供参考。方法 鸡西市传染病医院感染结核二科2017年12月至2018年12月的肺外结核病临床诊断患者171例 采集所有非呼吸系统标本，脓液、穿刺液和尿便标本50份，脑脊液及胸腹水标本121份，脓液、穿刺液和尿便进行涂片镜检、结核菌固体培养，对培养阳性的标本进行传统药敏检测，脑脊液及胸腹水只给予常规生化检测，所有标本进行Xpert MTB/RIF 检测,分析该方法与传统涂片、固体培养在不同标本检测结核菌的阳性率，及在浆膜腔积液、脑脊液中的病原检出率。结果 与传统涂片镜检和固体培养对比, Xpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌的敏感度显著高于涂片镜检和固体培养，并且该技术检测结核菌及利福平耐药结果报告时间(2 h)比固体培养大大缩短(6～8周)，在穿刺液、脓液、粪便及尿液中Xpert MTB/RIF检测具有明显优势。结论 Xpert MTB/RIF检测穿刺液、脓液、粪便及尿液中的MTB灵敏度、特异度均较高，而对于浆膜腔积液及脑脊液并不具优势，但其快速、可检测RIF耐药的优点能为临床肺外结核的诊疗提供帮助。
【关键词】 肺外结核；结核分枝杆菌／利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Xpert MTB/RIF）；
结核病是威胁人类健康的疾病之一，据世界卫生组织估计，2016年全球约167万例死于结核病，其中肺外结核占10％～42％，由于肺外结核临床症状不典型、临床标本不易获得且含菌量较少，使诊断较为困难。近年来，结核分枝杆菌(MTB)/利福平(RIF)耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF）作为核酸检测的一种，已有大量临床研究。该技术自应用以来已逐步证实了其对肺结核的诊断价值，显示出了较高的敏感性和特异性。本研究应用结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（Xpert MTB/RIF）对171例肺外结核患者的非呼吸系统标本进行结核分枝杆菌及其利福平耐药性检测，探讨该方法对肺外结核病的诊断价值，为临床上的应用提供参考。
临床资料
1、一般资料：
鸡西市传染病医院感染结核二科2017年12月至2018年12月诊治的肺外结核病临床诊断患者171例 ，其中脓液、穿刺液和尿便标本50份，脑脊液及胸腹水标本121份（男性106例，女性65例），患者年龄18-88岁，平均年龄 46.3岁。
2、肺外结核纳入标准：
171例病例均具备②和①③④⑤其中之一，①症状、体征：全身结核病中毒症状和（或）相应组织器官的症状和体征；② 相应部位影像学检查有典型结核表现；③结核菌素试验或结核感染T细胞检测阳性；④活动性结核病接触史；⑤抗结核抗体检查等其它辅助诊断方法。
3、结核菌涂片及培养
一次性吸管吸取少许无菌标本采集管中的标本涂于载玻片上进行荧光染色，置于光学显微镜下观察计数，以每50个视野抗酸杆菌≥3条为阳性，同时进行固体培养，对于阳性菌株进行药敏试验。
4、Xpert MTB/RIF检测
将各种样本与标配处理液常规按1:2比例混合（若标本较浓稠则≥1:3；脑脊液或相对清亮的浆膜腔积液不处理直接检测）震荡，室温静置15分钟，吸取2ml处理样品到反应盒，置于GeneXpert检测系统进行全自动检测，约2小时在检测软件窗口直接读取结果。
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4、研究方法：
采集我院2017年12月至2018年12月的肺外结核病临床诊断患者的非呼吸系统标本171例，留取结核性胸膜炎、结核性腹膜炎、结核性脑膜炎病例的121份胸腹水、脑脊液标本，进行Xpert MTB/RIF 检测，统计标本中结核菌阳性率及利福平耐药情况，对临床诊断为颈部和腋下淋巴结结核、皮肤胸壁结核、骨关节结核、泌尿系结核、肠道结核50份病例的穿刺液、脓汁和尿便标本，在传统涂片和固体培养的基础上，进行Xpert MTB/RIF 检测，对积累的资料整理和数据统计，分析比较该方法在不同标本检测结核菌的阳性率。以临床诊断为标准，探讨Xpert MTB/RIF在肺外结核诊断中的应用价值，为临床上的应用提供参考。
结果
1、50例脓液、穿刺液和尿便标本涂片镜检结核菌的阳性率为22%（11/50），固体培养方法的阳性率为40%(20/50)，Xpert MTB/RIF 检测技术的阳性率为52%（26/50）；121例胸腹水、脑脊液标本Xpert MTB/RIF检测结核菌的阳性率为33.9%（41/121），其中胸水的阳性率为32.4%(35/108),腹水的阳性率为37.5%(3/8), 脑脊液的阳性率为60%；(3/5)，Xpert MTB/RIF 检测肺外结核结核菌的阳性率为39.2%。
2、以固体培养方法为标准，Xpert MTB/RIF与培养对比, Xpert MTB/RIF检测结核菌的敏感度为91.3%（21/21+3）,特异度为96.3%(26/1+26), Xpert MTB/RIF检测与培养方法一致率为94%（21+26/50）。将固体培养方法检测的20例阳性标本，经传统药敏方法检测利福平耐药率为10%(2/20), Xpert MTB/RIF检测利福平耐药率为15%（3/20），Xpert MTB/RIF 检测胸水耐药率22.9%(8/35)， 腹水耐药率33.3%(1/3)，检测肺外结核利福平总耐药率9.92%。
3、Xpert MTB/RIF 弥补了胸腹水、脑脊液结核菌检测的缺失，与传统涂片镜检和固体培养对比, Xpert MTB/RIF技术检测结核分枝杆菌的敏感度显著高于涂片镜检和固体培养，并且Xpert MTB/RIF技术检测结核菌及利福平耐药结果报告时间(2 h)比固体培养大大缩短(6～8周)。
讨论
结核病实验室诊断是发现结核病患者的重要途径，涂片简便、快速，但其检测灵敏度低，阳性检出率<15％；结核菌培养虽然与涂片相比，其检测灵敏度较高，但周期过长、阳性检出率较低（约10％～35％）。上述传统方法由于检测灵敏度低或耗时长等常不能满足临床快速诊断和及时治疗的需要。Xpert MTB/RIF是结核病诊断领域的新技术，其在肺外结核诊断中的价值尚缺乏统一认识，国外已有研究中纳入的样本量普遍偏小，且部分研究未给出详细的针对不同器官肺外结核的数据[1]。与传统培养、涂片相比，Xpert MTB/RIF较高的敏感性及其在传统方法阳性结果中较好的一致性，对临床上肺外结核的快速诊断具有较高的应用价值【2】。Xpert MTB/RIF填补了我市医疗机构对浆膜腔积液和脑脊液进行结核菌病原学诊断的空白，弥补了肺外结核病原学诊断的缺失，对泌尿系、肠道、骨关节结核等诊断方面具有较高的应用价值。综上所述，Xpert MTB/RIF对部分肺外结核具有较高的诊断价值，但临床上仍需开展大样本量及详细区分不同器官肺外结核的研究来进一步证实Xpert MTB/RIF 对肺外结核的诊断价值[3]。
参考文献
[1]贾留群，龙虹羽，胡倩婧，等. Xpert MTB/RIF试验对肺外结核诊断价值的Meta分析[J]．中华临床医学杂志，2013，（6）：2587-2591.
[2] 原梅. Xpert MTB/RIF检测非呼吸系统标本中结核分枝杆菌及其利福平耐药性研究[D].温州医科大学.2016.
[3] 张爱梅，卢水华，等. 结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测在肺外结核中的诊断价值[J]. 中华传染病杂志，2016，34（3）：174-179.
论文作者:高福仁 刘明刚 李青 张琪 王君 王辉艺
论文发表刊物:《中国医学人文》2019年第07期
论文发表时间:2019/8/20
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