（1安徽医科大学基础医学院 安徽 合肥 230032）
（2安徽医科大学第二临床医学院 安徽 合肥 230601）
【摘要】目的：改良人胰腺癌细胞系PANC-1细胞的体外培养方法，简化细胞培养步骤。方法：在人胰腺癌细胞系PANC-1细胞培养过程中，复苏及传代时，避免使用离心机离心这一步骤。结果：通过和传统细胞培养方法对比，这种改良的方法，培养PANC-1细胞，污染的机会少，特别适用于新手。
【关键词】PANC-1细胞；细胞培养；胰腺癌
【中图分类号】R736.7 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）11-0060-02
人胰腺癌细胞系中，源自胰腺癌导管细胞的PANC-1细胞被广泛应用于科学研究中。本课题组以前PANC-1细胞培养采用的是传统细胞培养方法[1]，培养细胞所用的培养液为90%DMEM/HIGH Glucose (Dulbecco’s modified Eagle’s medium) 加上10% 胎牛血清（BI-FBS）和1%双抗（青霉素和链霉素混合液）[2]；根据实验中具体操作步骤，对PANC-1细胞的培养方法进行改良。改良后的方法，简化了步骤，减少污染机率。
1.资料与方法
1.1 细胞株
人胰腺癌细胞系PANC-1细胞；购自中国科学院细胞库（上海）。
1.2 主要试剂
DMEM/HIGH Glucose(1X）培养基（Hyclone，美国）。
1.3 主要仪器
5%CO2培养箱（Thermo美国），医用净化工作台（苏州）。
2.改良的PANC-1细胞培养方法
2.1 PANC-1细胞的复苏
1）准备器械和试剂，常规消毒和复苏细胞；在标记好的培养皿加入适量的培养液；
2）将细胞悬液吸出直接加入培养皿，充分震荡混匀；
3）镜下观察细胞密度及分布后，置于37℃5%CO2培养箱内孵育，24小时后换液。
2.2 PANC-1细胞的传代
1）准备器械和试剂，常规消毒；
2）镜下观察细胞生长状态和汇合度，一般于汇合度80%左右进行传代；
3）常规洗涤、胰酶消化细胞；
4）利用消化的间隙，在新培养皿中加入培养液，作好标记；
5）镜下观察细胞脱落和离散；
6）将原培养皿内细胞悬液，平均分配于新培养皿中；震荡混匀后放37℃，5%CO2培养箱孵育。
3.结果
从2016年8月-2017年9月，本课题组共复苏PANC-1细胞11次，传代19次，见图。
图 传统方法和改良方法对比图
细胞传统复苏到传代和改良复苏到传代平均用时差异显著（P＜0.05）；传统细胞传代周期和改良细胞传代周期间差异不显著。
4.讨论
本课题组人胰腺癌细胞系PANC-1细胞的培养传统方法主要参考贾连群，雷萍主编的现代基础医学理论与技术进展中细胞培养基本技术[1]和赛默飞世尔科技（ThermoFisher Scientific）贴壁细胞培养技术[3]。
细胞冻存液由90%胎牛血清（BI-FBS）和10%二甲亚砜(dimethyl sulPhoxide，DMSO)配制[4]。DMSO作为常用的低温冷冻保护剂，部分学者认为对大多数细胞无毒性[5]。改良细胞复苏方法中，是把处于冻存液中的细胞悬浮液直接加入到培养皿中，没有离心去除DMSO。
改良方法优点：（1）细胞传代过程中不使用离心机，减少细胞损失和细胞污染的机会；（2）简化细胞传代步骤，特别适用于新进人员；（3）可以比较快速增殖细胞。
改良方法缺点：细胞传代过程中，细胞悬液的分配过程中液量可能会有偏差。解决方法，正常加胰酶消化，加等量的培养液中和并吹打均匀，细胞悬液分配前，要注意一下具体的液量，尽量分配。
综上所述，基于传统细胞培养基础上的改良方法，可以用于人胰腺癌细胞系PANC-1细胞的培养，也为其它细胞培养方法的改良提供参考。
【参考文献】
[1]贾连群，雷萍.现代基础医学理论与技术进展[M].北京：中国医药科技出版社，2015.
[2] Maiyon Park,Danielle Upton,MelodieBlackmon,et al．Anacardic acid inhibits pancreatic cancer cell growth,and potentiates chemotherapeutic effect by Chmp1A-ATM-p53 signaling pathway[J].BMC Complementary and Alternative Medicine (2018) 18:71.
[3] Chen S F，Xia J，Lv Y P，etal．N,N'-di-( m-methylphenyi) -3，6-dimethyl-1，4-dihydro-1，2，4，5-tetrazine-1，4-dicarboam ide ( ZGDHu-1) suppresses the proliferation of PANC-1 pancreatic cancer cells via apoptosis and G2 /M cell cycle arrest［J］．Oncol Ｒep，2015，33( 4) : 1915
[4] Shivakumar SB,Bharti D,Subbarao RB et al.DMSO-and Serum-Free Cryopreservation of Wharton's Jelly Tissue Isolated From Human Umbilical Cord.Journal of cellular biochemistry 2016； 117:2397-2412.
[5]赵艳芝,金浩,李玉明.二甲基亚砜对不同器官细胞caspase影响的研究进展[J].医学综述，2018；24（3）.
基金项目：国家级大学生创新创业训练计划项目（201810366011）；安徽医科大学临床医学专业“早期接触科研”训练计划项目（2017-ZQKY-24）
论文作者:孙如玉1,何志成2,江静1,蒋燕1,胡秀娟1,王振
论文发表刊物:《医药前沿》2019年11期
论文发表时间:2019/6/12
标签：细胞论文; 方法论文; 细胞系论文; 培养皿论文; 细胞培养论文; 胰腺癌论文; 培养液论文; 《医药前沿》2019年11期论文;