汪正宇, 高学纯, 王明丽, 卢晓林, 卜海富[1]2002年在《不同代数软骨细胞及其在支架上的生物学特性》文中认为目的 观察不同代数软骨细胞及其在支架上的生物学特性 ,为软骨组织工程提供理想的种子细胞。方法 将 2周龄的新西兰大白兔软骨细胞置盖玻片上进行原代和传代培养 ,同时 ,把相应代数的软骨细胞种植于明胶海绵上 ,应用倒置显微镜和电镜观察不同代数细胞形态学变化和增殖能力 ,以及不同代数软骨细胞种植于支架后的生长和黏附情况 ,应用HE染色鉴别及免疫组化观察Ⅱ型胶原的分泌情况。结果 (1)软骨细胞在体外单层培养 ,传 5代后细胞形态由多角形变成梭形 ,逐渐丧失表型。 (2 )第 4代软骨细胞在单层培养时 ,增殖能力最强 ,分泌功能旺盛。 (3)传代细胞贴壁时间短于原代。 (4)第 4代软骨细胞种植于支架上形成软骨细胞 -支架复合体所需的时间最短 ,软骨细胞于海绵支架上的黏附最紧密。结论 软骨细胞在体外培养第 4代左右可以作为组织工程的最佳种子细胞 ,其形成的软骨细胞 -支架复合体的质量最佳、时间最短
汪正宇[2]2002年在《体外培养的不同代数的软骨细胞及其在明胶海绵支架上的生物学特性》文中进行了进一步梳理目的 (1)观察体外培养的不同代数软骨细胞的生物学特性；(2)观察不同代数软骨细胞在明胶海绵上的生物学特性，同时观察明胶海绵作为支架的可行性。为组织工程提供理想的种子细胞和实用价廉的支架；(3)观察软骨细胞在不同培养器皿上的生长特性。探索改良软骨细胞的培养方法。方法 将2周龄的新西兰大白兔软骨细胞用酶消化法分离后，制成一定的浓度悬浮液种植于不同的培养皿上，包括盖玻片、培养板，和涂有鼠尾胶的玻片上进行原代和传代培养；同时，把相应代数的软骨细胞种植于明胶海绵上，应用倒置显微镜和电镜观察不同代数细胞形态学变化、增殖能力，以及不同代数软骨细胞种植于支架后的生长和黏附情况，并绘出各代软骨细胞体外培养时的生长曲线；详细记录各代软骨细胞的贴壁率、存活率以及软骨细胞和明胶海绵形成软骨支架复合体的时间；数据用SPSS软件处理。免疫组化观察Ⅱ型胶原的分泌情况，并结合HE染色，间接评估细胞的生长情况。取冻存后第4天、第8天、第12天的原代软骨细胞给予复苏，观察其存活率和形态。结果 (1)第4代软骨细胞在单层培养时，贴壁率最高，增殖能力最强，分泌功能旺盛，并且保持了软骨细胞特有的表型。(2)第4代软骨细胞种植于支架上形成软骨细胞-支架复合体所需的时间最短，软骨细胞于海绵支架的贴附最紧密。(3)软骨细胞在体外单层培养，传至5代后细胞形态由多角形变成梭形，逐渐丧失表型，出现去分化现象。(4)传代软骨细胞贴壁时间短于原代。(5)涂有鼠尾胶的玻片上的软骨细胞贴壁率最高。(6)冻存后的第4天、第8天、第12天复苏的软骨细胞均保持了特有的表型。最佳复苏时间为第8天。结论 (1)在体外培养的第4代软骨细胞是组织工程的最佳种子细胞，其形成的软骨细胞-支架复合体的质量最佳、时间最短。有望研发成商品化的临床急需的软骨细胞移植安徽医科大学硕士学位论文片。（二）明胶海绵可以作为体外软骨细胞叁维培养的较理想支架。（3）体外单层培养时，培养方法以涂有鼠尾胶的玻片培养贴壁率最高。（4）原代软骨细胞冻存后的12天内，复苏的细胞均具有良好活性。
何彩霞[3]2011年在《新型非病毒基因转染体系的构建及其在骨髓间充质干细胞基因重组中的应用》文中提出目的：为提高非病毒载体转染细胞后的基因表达水平并延长表达时间,并为骨髓间充质干细胞(MSC)生长创造更好的环境,以期用于软骨损伤的体内再生治疗。方法：1、合成普鲁兰糖-精胺,与DNA孵育制备普鲁兰糖-精胺/DNA复合物,考察该复合物的粒径与电位。2、考察基因复合物在不同细胞上的转染效果,利用阴离子化明胶构建反向转染体系,比较反向转染方法与常规转染方法的差异3、在体外选择PET无纺纤维与胶原海绵作为支架,结合反向转染构建了反向叁维转染体系,在MSC上考察报告基因转染效果与转染编码TGFβ-1的DNA后诱导MSC向软骨方向分化的能力。4、以可降解的壳聚糖温敏凝胶与明胶海绵作为叁维支架,携载以普鲁兰糖-精胺转染TGFβ-1基因的MSC,考察其软骨修复的能力。结果：普鲁兰糖-精胺/DNA复合物可以成功转染MSC。在血清存在情况下,反向转染方法相比常规方法可以产生更高的基因表达。阴离子化明胶的带电性与反向转染体系的转染效率密切相关,所带负电荷的多少可以影响到基因复合物的释放过程,以及血清蛋白在表面上的吸附量。不同的转染方法可能影响到细胞对基因复合物的摄取途径,摄取的改变与载体类别和细胞类型都有关系。培养在叁维支架上的MSC转染后相比二维环境下可以保持更长期的基因表达,在PET无纺纤维上的基因表达水平也更高。以壳聚糖温敏凝胶为支架携载转染pTGFβ-1的MSC治疗组与未处理损伤组修复效果相似；以含有TGFβ-1基因的明胶海绵或经过TGFβ-1基因重组的MSC进行修复,具有一定的软骨修复效果。结论：血清的加入对反向转染体系的基因转染效果不产生明显影响,克服了常规转染时血清对转染效率的负面影响。将反向转染与叁维支架结合后更有利于细胞的生长,使MSC在体外保持长期的基因表达。以明胶海绵携载转染pTGFβ-1后的MSC体内移植后可促进大鼠膝关节软骨损伤修复。
参考文献：
[1]. 不同代数软骨细胞及其在支架上的生物学特性[J]. 汪正宇, 高学纯, 王明丽, 卢晓林, 卜海富. 临床骨科杂志. 2002
[2]. 体外培养的不同代数的软骨细胞及其在明胶海绵支架上的生物学特性[D]. 汪正宇. 安徽医科大学. 2002
[3]. 新型非病毒基因转染体系的构建及其在骨髓间充质干细胞基因重组中的应用[D]. 何彩霞. 浙江大学. 2011