金丹[1]2002年在《逆转录病毒介导hBMP-7基因转染兔骨髓基质干细胞体内外成骨实验研究》文中提出目的 (1)构建人骨形态发生蛋白7(hBMP-7)逆转录病毒载体并制备重组病毒液，检测经逆转录病毒介导hBMP基因转染的兔骨髓基质干细胞(BMSc)中外源hBMP-7 mRNA和蛋白的表达。(2)探讨hBMP-7基因转染对BMSc增殖和向成骨细胞分化的调节作用。(3)对重组病毒液和经基因转染的BMSc与左旋聚丙交酯(Poly-L-lactide，PLLA)生物材料复合后修复兔桡骨1.5cm缺损的能力进行评价，从而探讨基因转移技术在骨组织工程中应用的可行性，并建立利用经hBMP基因转染的BMSc构建组织工程化骨组织的方法。 方法 (1)采用粘-粘端连接法构建hBMP-7逆转录病毒载体(PLNCX_2-hBMP_7)，利用脂质体介导的基因转移技术转染包装细胞PT67，经G418筛选后，制备含hBMP-7目的基因的重组逆转录病毒液，病毒液感染兔骨髓基质干细胞，使用原位杂交、RT-PCR以及免疫组织化学的方法检测hBMP-7在BMSc中的表达。(2)采用MTT法、流式细胞仪对比分析经转染与未经转染BMSc的增殖情况，NPP法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)合成情况，~3H脯氨酸掺入方法检测胶原合成情况，放射免疫方法测定细胞骨钙素(BGP)、层粘连蛋白合成情况。(3)制备新西兰大白兔桡骨1.5cm缺损实验模型，病毒液修复实验分为4组：PLNCX_2-BMP_7+PLLA修复组：PLNCX_2+PLLA修复组；单纯PLLA生物材料修复组；空白组，未加任何填充材料，于术后采用大体观察、X线观察、组织学观察方法对骨缺损修复情况进行对比检测。(4)将制备的病毒液转染BMSc，利用经转染的BMSc修复兔桡骨1.5cm骨缺损。修复实验也分为4组：经转染细胞+PLLA修复组；未经转染细胞+PLLA修复组；单纯PLLA生物材料修复组；空白组，未加任何填充材料。采用大体观察、X线观察、组织学观察、免疫组织化学等方法对骨缺损修复情况进行对比检测。 结果 (1)构建的hBMP-7逆转录病毒载体中外源基因方向、序列均正确、无碱基缺失及突变现象。原位杂交、RT-PCR以及免疫组织化学检测显示经I，TreunXZ－BMP病毒液感染的BMS。中有较强的阳性结果出现，而PLNCX。空载体转染的BMS。以及未转染的BMSC中极少见阳性表达结果。G）经 PLNCXZoMP病毒介导的基因转染的兔 BMSC增殖能力无明显改变，同时其合成胶原、ALP、BGP、层粘连蛋白的能力能够得到显着提高，与PLNCXZ病毒液转染、未经转染的BMS。相比有显着性差异。D）PLNCXZEMP重组病毒液与 PLLA生物材料复合修复组可见在缺损处有骨性连接形成，组织学观察见有大量新生骨组织形成，而PLNCX。病毒液＋PLLA修复组、单纯材料修复组和未修复组均未见骨性连接形成，仅在部分骨缺损两断段形成少量骨组织。（4）大体观察、X线、组织学检测分析结果初步证实经转染的BMSc修复骨缺损的成骨速度和成骨量均优于未转染BMSc修复组，单纯PLLA生物材料修复组和空白组中均未见骨缺损得到修复。 结 论（1）采用逆转录病毒介导的方法可以将 hBMP．7转染至BMSC中，并有外源hBMP7的表达。＊）PLNCX。HMP7基因转染能够促进体外培养的BMS。向成骨细胞转化，并对其增殖能力没有显着影响。 3）采用 PLNCXZEMP重组病毒液与生物材料复合的方法能够修复兔侥骨 1．scm缺损。（4）PLNCX。－BMP基因转染能够提高 BMSc形成组织工程化骨组织和修复骨缺损的能力。（5）采用基因转染的方法能够提高BMS。体内外成骨能力，可用于以BMSC为种子细胞的组织工程化骨组织的构建和进一步应用。
佚名[2]2002年在《《解放军医学杂志》2002年第27卷主题词索引》文中提出(按汉语拼音字母顺序排列 )Ａ阿耳茨海默病 老年人轻度认知损伤临床诊断的初步研究 (王炜等 )2 7(6) :52 9阿霉素 还原型辅酶Ⅰ (ＮＡＤＨ)拮抗阿霉素心肌线粒体毒性的机制(徐萌等 ) 2 7(3) :1 97 阿霉素异体脱钙骨基质骨粒骨水泥
刘永亮[3]2008年在《MSCs载BMP7基因表达对缺氧再给氧肾小管上皮细胞保护作用的研究》文中研究表明背景缺血再灌注损伤(ischemical reperfusion injury, IRI)导致的缺血性急性肾功能衰竭( ischemic acute renal failure, IARF)是肾移植中影响移植肾早期功能恢复的主要因素之一。肾移植和某些疾病的发展及治疗会不同程度的影响肾脏血流,当血流再灌注后经多因素介导,通过多种途径造成肾小管、肾小球等组织结构损伤,损害肾功能,因此,作为逆转或修复损伤的治疗手段,干细胞移植和基因治疗已应用于缺血再灌注损伤防治的基础及临床研究中。干细胞治疗是代表组织再生和修复革新性的治疗技术。骨髓来源的间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells, BMD-MSCs)遗传背景稳定,免疫原性低,移植体内可调节免疫功能,适合同种异体移植,凭借以下优势为多种肾脏疾病的治疗带来了新的希望:一、较强的可塑性,具有高度自我更新和多向分化潜能,能跨系统或胚层分化为多种细胞,是一种可以广泛应用的组织工程细胞;二、靶向迁移特性,可感受局部微环境信号变化,迁移、定居于肿瘤、炎症、损伤等区域,是一种理想的载体细胞;叁、取材方便,易于体外分离、纯化、扩增,并能保持细胞表型和多系分化潜能不变,在体内、外适宜的信号刺激与诱导下可分化为研究所需的细胞。缺血再灌注致急性肾功能衰竭,损伤较重,大量肾小管上皮细胞凋亡或坏死,肾小管结构消失,组织纤维化,而可以逆转这一过程的骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)具有治疗效果。BMP7是维持胚胎期肾脏正常发育的重要因子,可通过抑制上皮细胞向间质细胞转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT),促进间质细胞向上皮细胞转化(mesenchymal-to-epithelial transition,MET)等机制,对肾脏损伤有保护作用。在多种肾脏疾病模型中BMP7表达减少或缺如,经静脉给予BMP7可起治疗作用。目的作为hBMP7基因修饰MSCs移植防治肾脏缺血再灌注损伤课题的前期研究,模拟体内缺血再灌注损伤,建立人肾近曲小管上皮细胞缺氧再给氧模型,观测给予重组腺病毒介导hBMP7基因转染后的MSCs培养液对细胞缺氧再给氧损伤是否有保护作用。方法第一部分:取兔骨髓,经密度梯度离心联合贴壁法分离、培养原代MSCs,经倒置相差显微镜、透射电镜观察,绘制生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,观测所获细胞的生物学特性。通过体外诱导分化对所获细胞是否具有多向分化潜能进行鉴定。第二部分:将构建的穿梭质粒pDC316-hBMP7,经脂质体介导与骨架质粒pBHGloxΔE1,3Cre共转染HEK293细胞,通过同源重组获得重组腺病毒载体Ad-hBMP7。对Ad-hBMP7进行鉴定。测定病毒滴度、最适感染复数和相应转染率后,通过RT-PCR检测hBMP7mRNA水平表达,通过Western blotting、免疫细胞化学染色、ELISA检测hBMP7蛋白在细胞内和培养液中的表达。第叁部分:将体外培养的人肾近曲小管上皮细胞分为四组:A组,正常培养组;B组:缺氧再给氧组;C组:缺氧,再给氧+转染hBMP7基因的MSCs培养液处理组;D组:缺氧,再给氧+未转染hBMP7基因的MSCs培养液处理组。MTT比色法、流式细胞仪测定细胞损伤及修复情况。黄嘌呤氧化酶法测定总SOD活力,硫代巴比妥酸法测定MDA含量,反映各组细胞抗氧化能力及脂质过氧化程度的变化。通过免疫细胞化学染色检测各组细胞Bcl-2的表达变化。结果1.倒置相差显微镜观察所获细胞为梭形成纤维细胞样细胞,长满瓶底时呈漩涡状、辐射状排列。原代培养需要10～12d,传代培养需要7～8d。培养至3代以上细胞形态均一,生长状态良好,适合体内移植和体外使用。透射电镜观察第3代细胞合成代谢旺盛。生长曲线显示传代细胞具有相似的生长特点。流式细胞仪分析细胞周期显示大多数细胞处于静止期与DNA合成前期,只有少数细胞处于活跃的增殖期。第3代细胞经诱导培养液体外培养不同时间后,通过鉴定已向成脂肪细胞或成骨细胞分化。2.重组腺病毒载体Ad-hBMP7构建后,经鉴定该载体携带hBMP7基因,感染细胞后表达hBMP7,并可向培养液中分泌该蛋白。经扩增和纯化,测定感染性滴度为7.94×1010IU/ml。最适感染复数为100,转染率可达90%以上。转染兔MSCs后24h,即可检测到hBMP7mRNA表达,细胞内和培养液中hBMP7表达阳性。3.缺氧再给氧不同时间,MTT比色法检测显示B、C、D组活细胞减少;与B组相比,C、D组活细胞增多,细胞相对死亡率降低,而C组比D组活细胞更多,细胞相对死亡率更低。缺氧再给氧4h,FCM检测C、D组比B组凋亡或坏死细胞百分率降低,而C组比D组更低。C、D组总SOD活力较B组升高,而C组比D组更高;C、D组MDA含量较B组降低,而C组比D组更低。缺氧再给氧后,细胞Bcl-2蛋白表达阳性,Bcl-2蛋白表达量C、D组较B组高,而C组比D组更高。结论1.密度梯度离心联合贴壁法可在体外大量扩增,纯化兔骨髓间充质干细胞。所获细胞具有高度自我更新和多向分化潜能等干细胞生物学特性。2.成功构建重组腺病毒载体Ad-hBMP7,病毒滴度较高,可高效转染兔MSCs。转染后细胞内表达的hBMP7可向培养液中分泌。3. MSCs培养液对缺氧再给氧损伤的人肾近曲小管上皮细胞有保护作用,可能与MSCs分泌某些保护性物质有关;而载hBMP7基因的MSCs培养液对缺氧再给氧损伤的人肾近曲小管上皮细胞的保护作用更为明显,除MSCs分泌某些保护性物质外,hBMP7具有明显的保护作用,可能是通过提高细胞抗氧化能力,减轻细胞脂质过氧化损伤,促进细胞增殖,抑制细胞坏死或凋亡等途径来实现的。
方针强[4]2008年在《hBMP-7基因修饰的骨髓间充质干细胞移植保护肾缺血再灌注损伤的实验研究》文中研究指明背景:肾脏的缺血再灌注损伤(IRI)导致急性肾功能衰竭(ARF)的发生率很高,治疗措施也有限,死亡率大约为30%～50%,因此防治肾脏IRI具有重要的意义,各国研究者都在寻求解决办法。针对IRI的研究很多,其中关于骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对IRI肾脏的保护作用的研究是近年研究的热点。BM-MSCs移植可促进肾脏IRI的修复并改善肾功能,但是,移植的BM-MSCs数量有限,而且能到达损伤肾脏并发挥作用的BM-MSCs更少,因此, BM-MSCs的治疗作用受限。为了提高BM-MSCs的治疗作用,很多科学家采用基因治疗和细胞移植相结合的方法来进行研究,取得了一定的效果。骨形态发生蛋白-7(BMP-7)具有调控细胞增殖作用,对肾脏的发育和功能维持起着重要作用。研究表明,缺血再灌注后,肾脏BMP-7蛋白的表达明显减少,可能参与肾脏IRI的发病过程;应用外源性BMP-7基因治疗和蛋白治疗能促进肾功能的恢复,但缺乏靶向性,治疗效果有限。因此,本课题首次通过腺病毒载体将人BMP-7(hBMP-7)基因导入BM-MSCs,然后将基因修饰的BM-MSCs移植入动物体内,观测其对肾脏IRI的保护效用,并探讨其作用机制。据所查文献,目前尚未见国内外研究报道。目的:基于单纯BM-MSCs移植治疗或BMP-7基因治疗的不足,本课题拟采用BMP-7基因治疗和BM-MSCs移植治疗结合的方法,通过腺病毒介导hBMP-7基因转染BM-MSCs,观察基因修饰的BM-MSCs移植能否发挥更好的保护肾脏IRI的作用。方法:第一部分:Ad-hBMP-7的构建与鉴定酶切含hBMP-7基因的pBluescript sk(+)-hBMP-7质粒,构建穿梭质粒pDC316-hBMP-7,扩增、提纯后与骨架质粒pBHGloxΔE1,3Cre、脂质体共转染HEK293细胞,通过同源重组获得重组体Ad-hBMP-7,扩增、纯化后获得Ad-hBMP-7病毒液;对构建的质粒和腺病毒进行酶切、测序、ELISA和免疫组化鉴定。第二部分:Ad-hBMP-7体外转染兔BM-MSCs以及表达产物hBMP-7的测定采用密度梯度离心法和贴壁法相结合的方法分离培养兔BM-MSCs,将Ad-hBMP-7转染体外培养的BM-MSCs,通过形态学和MTT法观察转染后BM-MSCs的生长情况,RT-PCR、免疫组化、Western Blot和ELISA检测目的基因hBMP-7在体外转染的BM-MSCs中的表达。第叁部分:hBMP-7基因修饰的BM-MSCs移植对兔肾脏IRI的保护作用1.经兔胫骨抽取骨髓,分离培养BM-MSCs,移植前以MOI为100的腺病毒转染,并以Hoechst33342标记;2.建立兔肾脏冷缺血再灌注损伤模型:阻断血流后利用切除肾的残端对对侧肾进行冷盐水灌注后低温保存;3.所有实验兔随机分为6组:Ⅰ组为假手术组;Ⅱ组为IRI对照组;Ⅲ组:缺血再灌注后进行Ad-EGFP腺病毒转染的BM-MSCs移植;Ⅳ组:缺血再灌注后体内注射Ad-hBMP-7治疗;Ⅴ组:缺血再灌注后Ad-EGFP腺病毒转染的BM-MSCs移植联合Ad-hBMP-7体内注射治疗;Ⅵ组:缺血再灌注后进行Ad-hBMP-7腺病毒转染的BM-MSCs移植。4.各组分别在缺血再灌注后第3天、第7天和第14天进行相应指标的检测。RT-PCR、ELISA和Western Blot法检测目的基因hBMP-7在兔肾脏的表达;RT-PCR和ELISA法检测兔肾脏内源性BMP-7和TGF-β1的表达;比色法测定肾脏SOD活性和MDA含量;荧光显微镜下观察肾脏Hoechst33342阳性细胞以及Hoechst33342和CK18双阳性细胞数量以了解移植的BM-MSCs在肾脏的分布及其向肾小管上皮细胞的转化情况;免疫组化染色检测肾脏Bax和Bcl-2的含量并计算两者比值;进行PCNA免疫组化染色了解肾脏细胞增殖状态;TUNEL检测肾脏细胞凋亡情况;光镜和透射电镜下观察肾脏组织的组织学结构变化;测定肾脏功能(肌酐、尿素)。结果:1.酶切与测序证明成功构建了穿梭质粒pDC316- hBMP-7,将其与骨架质粒pBHGloxΔE1,3Cre、脂质体共转染HEK293细胞,通过同源重组获得重组体Ad-hBMP-7,扩增、纯化后获得Ad-hBMP-7病毒液,经PCR、ELISA和免疫组化鉴定,结果表明Ad-hBMP-7的构建正确;经TCID_(50)法测定制备的Ad-hBMP-7病毒液滴度为7.94×10~(10)IU/ml,可进行体内外转染实验。2.采用密度梯度离心法和贴壁法相结合的方法成功分离培养BM-MSCs,确定Ad-hBMP-7体外转染BM-MSCs的最佳MOI值为100,转染效率达90.52%。Ad-hBMP-7转染的BM-MSCs与未转染的BM-MSCs相比,细胞形态未见明显改变,生长未见明显促进或抑制,说明构建的腺病毒转染是安全的。Ad-hBMP-7转染BM-MSCs后,ELISA法检测显示其上清液中有hBMP-7蛋白的分泌,细胞免疫组化和Western Blot检测显示细胞内有hBMP-7蛋白的表达,RT-PCR检测显示细胞内有hBMP-7 mRNA的表达;未转染组均为阴性。RT-PCR法、Western Blot法和ELISA法检测到hBMP-7的表达,在第3天达到高峰,并在此较高水平维持到第7天左右,然后开始缓慢下降,持续时间超过2周,满足体内实验的要求。3.①Hoechst33342标记BM-MSCs的方法可靠;成功建立肾脏冷缺血再灌注损伤模型,手术兔存活良好。②Ⅵ组通过RT-PCR、ELISA和western检测到hBMP-7 mRNA和蛋白在肾脏的表达,并明显高于Ⅳ组和Ⅴ组(P<0.05)。③荧光显微镜下心脏、肝脏、脾脏和肺脏均未见Hoechst33342阳性细胞;肾脏组织可见Hoechst33342阳性细胞,主要分布在肾脏的肾皮-髓质交界区的肾脏皮质内区和肾脏髓质外区的肾小管组织;VI组肾脏组织内Hoechst33342阳性细胞数在移植后各时间点均高于III组和V组(P<0.05)。Hoechst33342和CK18双阳性细胞代表移植的外源性BM-MSCs分化的肾小管上皮细胞,VI组肾脏组织内Hoechst33342和CK18双阳性细胞数在移植后各时间点均高于V组,差异有显着性(P<0.05)。④与Ⅰ组比较,Ⅱ组肾脏BMP-7 mRNA和蛋白明显降低,TGF-β1 mRNA和蛋白明显升高(P<0.05); VI组肾脏BMP-7 mRNA和蛋白高于其它缺血再灌注组,TGF-β1 mRNA和蛋白低于其它缺血再灌注组(P<0.05)。与其它缺血再灌注组比较,VI组肾小管上皮细胞增殖指数(PI)、Bcl-2含量、Bcl-2/Bax比值最高,肾小管上皮细胞凋亡指数(AI)、Bax含量最低(P<0.05)。⑤缺血再灌注各组比较,VI组SOD活性最高,MDA含量最低(P<0.05)。⑥缺血再灌注各组比较,VI组肾脏组织学改变最轻,肌酐和尿素最低(P<0.05)。结论:1.成功构建含hBMP-7基因的重组腺病毒Ad-hBMP-7,能体外高效转染BM-MSCs而且不影响其生长增殖,可获得目的蛋白hBMP-7的有效表达;2.成功建立肾脏冷缺血再灌注损伤模型,更符合临床移植肾的损伤实际情况,并简化了操作,减轻了对血管的损伤。3. Ad-hBMP-7基因修饰的BM-MSCs能优先向损伤肾脏迁移,明显提高肾脏局部hBMP-7的表达,从而弥补肾脏内源性BMP-7表达降低的不足,发挥靶向性基因治疗作用;4.与单纯BM-MSCs移植或Ad-hBMP-7基因治疗或BM-MSCs移植和Ad- hBMP-7基因联合治疗相比,Ad-hBMP-7基因修饰的BM-MSCs移植能更明显地减轻肾脏损伤的程度,促进损伤肾脏的修复,改善肾脏功能。Ad-hBMP-7基因修饰的BM-MSCs移植能更好地保护肾脏IRI与BM-MSCs和肾脏局部高表达的hBMP-7协同发挥以下作用有关:明显降低脂质过氧化反应程度,增强机体清除自由基的能力;明显促进内源性BMP-7蛋白表达的恢复,降低TGF-β1的表达;明显上调Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白的表达,增加Bcl-2/Bax比值,从而促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,促进肾脏内源性修复;明显提高肾脏BM-MSCs的数量,并促进其转化,直接参与肾脏修复。
崔洁[5]2011年在《人肝细胞生长因子基因修饰人骨髓间充质干细胞的实验研究》文中研究指明背景和目的:肝纤维化(hepatic fibrosis)是慢性肝病发展为肝硬化的重要中间环节,目前认为,这个阶段的肝脏病变是可逆的,但若没有及时有效治疗,则最终发展为不可逆转的肝硬化、甚至肝癌。细胞移植成为治疗肝纤维化的新策略。骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells,BMSCs)具有自我更新能力,在合适的微环境里可多系横向分化,可以被诱导分化为肝细胞修复损伤肝组织。肝细胞生长因子( Hepatocyte growth factor, HGF)是一种具有较强的抗纤维化和抗凋亡活性的多功能因子,参与机体多种器官组织的生长、再生和重塑等过程。HGF可以调控BMSCs向肝细胞分化,促进肝细胞增殖。关于HGF基因修饰BMSCs是否促进诱导其向肝样细胞分化,目前国内外尚未见报道。本实验构建了HGF基因的真核表达载体,利用HGF基因转染BMSCs对其进行基因修饰。研究HGF表达或增强其表达后对诱导BMSCs向肝样细胞分化的影响,为进一步研究HGF基因及BMSCs治疗肝纤维化及以后的临床应用奠定基础。方法:⑴Percoll密度梯度离心法联合贴壁法从成人骨髓血中分离BMSCs,第4代细胞经流式细胞仪检测表面抗原CD29、CD44、CD105及CD45表达率;成脂、成骨诱导分化鉴定多向分化能力。⑵通过PCR从Pblast2-hHGF质粒扩增hHGF基因片段,利用基因重组技术,构建编码hHGF基因的真核表达载体pEGFP-N1-hHGF。双酶切及测序鉴定重组载体。⑶利用电穿孔转染技术,将重组质粒pEGFP-N1-hHGF转染人BMSCs。荧光显微镜观察转染的情况及转染率。RT-PCR及Western Blot检测hHGF基因的表达。MTT检测转染后细胞增殖活力。⑷用酒精性肝硬化患者血清诱导hHGF修饰过的BMSCs,Western Blot检测细胞内甲胎蛋白(AFP)及白蛋白(ALB)的表达。结果:⑴第4代BMSCs高表达CD29、CD105、CD44,不表达CD45。成脂诱导2周,油红O染色显示诱导细胞内红染的脂滴。成骨诱导2周,茜素红染色见橘红色的钙盐沉积。⑵PCR获得了hHGF基因片段(约2184bp),测序结果与Gene bank上已知序列行BLAST分析,同源性达100%。重组质粒经酶切及测序鉴定构建正确。⑶转染48h后pEGFP-N1/hHGF转染组及pEGFP-N1转染组转染效率分别为38.2±2.1%和42.2±3.5%。RT-PCR及Western Blot检测到有hHGF的表达。MTT结果提示转染hHGF基因使细胞增殖活力增强。⑷诱导后,BMSCs形态随着诱导时间的延长,变成纺锤形、不规则圆形或多角形细胞,数量逐渐变多,与肝细胞形态相似。Western Blot结果表明诱导14d后经hHGF基因修饰后的BMSCs中AFP、ALB表达明显高于对照组。结论:成功分离人骨髓间充质干细胞及构建了含hHGF基因的重组载体pEGFP-N1-hHGF,重组载体能够导入BMSCs并高表达,经酒精性肝硬化血清诱导可明显促进其向肝样细胞分化。
王永刚[6]2006年在《感觉神经及运动神经束构建神经化组织工程骨修复兔股骨缺损的实验研究》文中提出组织工程学是应用工程学原理和技术方法对创伤或病损的组织、器官进行修复与重建，是一种全新的治疗思路，超越了以往组织与器官修复重建的思维模式和技术手段，为组织与器官的修复重建带来了一场理论和技术方法上的革命，具有广阔的临床应用前景。创伤、感染、肿瘤等原因引起的骨缺损及骨不连是骨科临床经常遇到的问题，如何进一步提高骨缺损的治疗效果仍是引人关注的问题，临床上常用自体骨或同种异体骨移植，由于存在骨来源有限或免疫排斥反应等，使其应用受到限制，临床效果不尽如意。利用组织工程学技术解决这一问题是近十多年骨科领域研究的热点。 如何提高大块组织工程骨的成骨速度与成骨质量是当前的研究热点。再血管化是最初和最基本的环节，有决定性的影响。如果不能建立有效血循环，组织工程材料的制作只能被限制在薄、小的程度。关于组织工程骨的再血管化技术方法仍处在探索之中。已经证实，促进血管再生、加快血管化过程可以提高组织工程骨的成骨速度与成骨质量。 神经系统对于骨组织的生长发育创伤修复具有调节和营养作用。现在认为，这种作用是肽能神经通过包括神经肽在内的多种多肽类生物活性物质的多种生物效能来实现的。神经肽的作用方式很复杂，作用机理尚不完全清楚，可能是影响骨内的血管发生，控制血管舒缩，调节骨内血流量，进而影响骨代谢，对
参考文献：
[1]. 逆转录病毒介导hBMP-7基因转染兔骨髓基质干细胞体内外成骨实验研究[D]. 金丹. 第一军医大学. 2002
[2]. 《解放军医学杂志》2002年第27卷主题词索引[J]. 佚名. 解放军医学杂志. 2002
[3]. MSCs载BMP7基因表达对缺氧再给氧肾小管上皮细胞保护作用的研究[D]. 刘永亮. 第叁军医大学. 2008
[4]. hBMP-7基因修饰的骨髓间充质干细胞移植保护肾缺血再灌注损伤的实验研究[D]. 方针强. 第叁军医大学. 2008
[5]. 人肝细胞生长因子基因修饰人骨髓间充质干细胞的实验研究[D]. 崔洁. 重庆医科大学. 2011
[6]. 感觉神经及运动神经束构建神经化组织工程骨修复兔股骨缺损的实验研究[D]. 王永刚. 第一军医大学. 2006
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