周珅1杨建玲2王耀华3
1保定市第三医院药剂科河北保定071000;
2保定市儿童医院药剂科河北保定071000;
3河北大学附属医院药剂科河北保定071000
通讯作者：王耀华,女,1978、11,河北保定,沈阳药科,研究生，主管药师， 河北大学附属医院
【摘要】
目的：探讨应用三磷酸腺苷生物荧光抗癌药物敏感性测验（ATP一TCA）技术指导膀胱癌进行化疗。方法:采用ATP对19例病人进行肿瘤药敏试验,根据实验结果进行个体化膀胱灌注治疗。并与同期26例使用比柔比星进行膀胱灌注化疗的病人作为对照组,观察两组病人术后肿瘤的复发情况。结果:⑴药敏组和对照组术后肿瘤的复发率差异具有统计学意义⑵药敏组中出现多重耐药相关性具有统计学意义。结论:采用ATP一TCA进行体外药物敏感性实验后采取个体化灌注化疗能够减少TCCB的复发。
【关键词】膀胱移行细胞癌;AfP一TCA法;多重耐药
【中图分类号】R3226+2
【文献标识码】B【文章编号】16748999(2013)12026002
膀胱癌是泌尿系统中最常见的肿瘤，在我国膀胱癌在泌尿系统肿瘤中占首位,且近年有上升趋势，膀胱癌中约90%为移行细胞癌［1］。膀胱癌易复发,常多中心发生,癌周常伴上皮异生,与膀胱癌术后复发、进展有关［2］。ATP一TCA法采用荧光素一荧光酶系统测定ATP浓度,能增强化疗敏感性和特异性,其结果重复性、稳定性较其他方法佳,易标准化。
1材料与方法
11标本的收集:选择本院泌尿外科收治经病理证实为TCCB并保留膀胱的病人19例，男14例,女5例;年龄27~83岁,平均年龄5747岁。病例分级:I级15例,Ⅱ级3例,Ⅲ级3例;病理分期:Tl期13例,T2期5例,T3期l例。
12主要仪器设备:C02培养箱(进口)，倒置显微镜(进口)，高速离心机(进口)，冰箱(进口)，荧光显微镜(进口)，培养所需的相关产品(培养基、一次性培养皿等)(进口)，培养基(国产)，96孔培养板(国产)，10ml无菌移液管(国产)，无菌试剂池(国产)，50ml无菌锥形塑料离心管(国产)，多道加样器(Zooul)(国产)，血细胞计数板(国产)，细胞培养箱(国产)，荧光发光检测仪(国产)，150一200目灭菌细胞筛(国产)，无菌平皿(国产)。
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13主要试剂:ATP一TCA实验试剂(北京金紫晶生物医药技术有限公司生产)，组织消化酶，ATP提取液，荧光酶一荧光素系统，ATP生成抑制剂，荧光酶工作液，红细胞裂解液，ATP标准，0O15MPBSPH72，标本浸泡液，RPMI1640培养液(不含血清)，无菌去离子水，台盼兰溶液。
14实验方法
141肿瘤组织的收集和处理:临床上诊断为膀胱癌的患者,在行手术治疗时(包括开放手术及TUR一BT)留取较完整的新鲜肿瘤组织,放入消毒的生理盐水中送实验中心进行药敏实验.
142ATP一TCA法体外药物敏感性实验步骤:ATP一TCA体外肿瘤药物敏感性实验的主要步骤为①实体肿瘤单细胞悬液制备:将手术取下的较纯净新鲜瘤组织进行清洁后立即浸入RPM11640溶液中,在最短时间内(3小时内)送抵实验室，用PBS清洗其表面3次后,将标本置于标本浸泡液中浸泡15分钟,除去标本浸泡液,剥离肿瘤标本表面的结缔组织、纤维和脂肪,用无菌剪刀将标本剪碎成lmm3的碎块,然后将其转移至含组织消化液的离心管中。将离心管倾斜置于37℃孵育箱中孵育15一3小时,每隔15一30分钟振摇一次,使其充分消化。随后将消化好的混合液通过细胞筛.②肿瘤细胞接种于多孔板,设置不加药对照,在不同药物浓度(各药物的浓度依据其在人体中血药浓度峰值进行配制)作用下培养5一7d,药物分别为:丝裂霉素(浙江海正药业股份有限公司 国药准字H33020786 111117 2mg/支)、吡柔比星(深圳万乐药业有限公司 国药准字 H10930105 1210C6 10mg/支)、羟基喜树碱(湖北华源世纪药业 国药准字H20044553 120504 2ml:5mg)、甲氨喋吟(江苏恒瑞医药股份有限公司 国药准字 H32026443 11070412 01g/支)、顺铂(齐鲁制药有限公司 国药准字H20023460 2110302DB 10mg/支)、氟尿嘧啶（天津金耀氨基酸有限公司 国药准字 H12020959 2012141 10ml:250mg）。③配制荧光酶一荧光素系统工作液:将12ml荧光酶工作液加入到荧光酶一荧光素系统中,充分溶解混合,室温避光放置10分钟，用多道加样器自A一G,H(换枪头)行顺序将ATP提取液加入96孔培养板,每孔加入50ul,室温静置5分钟,等待测定。完成ATP提取以后,用多道加样器自96孔培养板A一G,H(换枪头)顺序依次吸出50ul上清液,对应加入到荧光测定板中。在荧光测定板中每孔加入50ul发光工作液,在微量振荡器上振荡10秒钟,立刻用荧光扫描仪测定,结果传输计算机。④软件分析药物各浓度抑制率,绘制抑制曲线,计算药物1C50和IC90,评估药物作用。
143药物评价标准
敏感:IC50<25%PPC及IC90<100%PPC
中度敏感:IC50<25%PPC及IC90>100%PPC
轻度敏感:IC50>25%PPC及IC90<100%PPC
耐药:ICSO>25%PPC及IC90>100%PPC
IC90:抑制90%肿瘤生长时的血浆峰值浓度百分比
IC50:抑制半数肿瘤生长时的血浆峰值浓度百分比
PPC:一定临床用药剂量对应的血浆峰值浓度
2统计分析方法
采用SPSS130进行处理，计量资料间的比较用t检验,计数资料间的比较用x2检验、两样本计数资料用Spearman非参数等级相关分析。
3结果
药敏组19例患者此次研究结果中显示;⑴在用于药敏实验的6种化疗药物中,吡柔比星在19例标本中有8(4210%)例是敏感的,在6种药物中其敏感性最高的,其次是丝裂霉素(2631%)。⑵19例标本中,多重耐药(对两种以上抗肿瘤药物耐药)的有14例(7368)%,其中出现对所有进行试验的药物均耐药的有3(1579%)例,其中一例术后3月内复发。
4讨论
药敏组和对照组的复发率差异有统计学意义,通过ATP一TCA法进行体外药物敏感性实验对TCCB患者进行个体化治疗,能够明显的减少患者的复发率,ATP一TCA为临床治疗TCCB提供有效的用药指导。在ATP一TCA法进行的药物敏感性实验中,多重耐药的出现与bel一xl的阳性表达关系密切,患者药物敏感性实验出现多重耐药,bcl一xl可作为预测TCCB出现耐药的指标。
参考文献
［1］周容祥,程继义.泌尿男生殖系肿瘤.人民卫生出版社.2001,246
［2］林蓉,李旭,陈威.同一膀胱癌的三个耐药细胞株和BIU一87膀胱癌细胞株的化疗药物敏感性研究.西安医科大学学报.2000,21:39一41
论文作者:周珅1杨建玲2王耀华3
论文发表刊物:《中医学报》2013年12月第28卷供稿
论文发表时间:2014-3-26
标签：药物论文; 荧光论文; 敏感性论文; 肿瘤论文; 膀胱癌论文; 标本论文; 浓度论文; 《中医学报》2013年12月第28卷供稿论文;