辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600
基金项目：辽宁省自然基金项目（201202153），辽宁省教育厅一般项目（L2012350），教育部新教师博士点基金项目（20122133120006）
作者简介：张旭（1978—），女，副教授， 博士，硕士导师，研究方向为中药炮制工艺与原理解析。
[摘要] 目的 研究木香及其炮制品对实验动物腹泻的影响，探讨其抗腹泻作用机制。方法 以蓖麻油和番泻叶造成小鼠腹泻，ig木香生品和炮制品水煎液，测定小鼠腹泻指数，比较木香及其炮制品的抗腹泻作用；测定正常大鼠血清内D-木糖含量和胃液胃蛋白酶活力，探讨抗腹泻作用机制。结果 对番泻叶致泻的小鼠止泻作用强弱顺序为麸煨品＞纸煨品＞生品，对蓖麻油致泻的小鼠止泻作用强弱顺序为麸煨品＞生品＞纸煨品。对番泻叶致泻的小鼠，木香生品组的止泻作用随着浓度的增加而减弱，麸煨品的止泻作用随着浓度的增加而增强。麸煨木香低剂量可明显提高大鼠血清内D-木糖含量，保持胃蛋白酶活力。结论 麸煨木香长于治疗小鼠大肠性腹泻，在临床应用上可替代纸煨品，其作用机制可能与其有效地促进小肠吸收，保持胃蛋白酶活力，从而达到实肠止泻的目的有关。
[关键词]： 木香;麸煨品;腹泻指数;D-木糖;胃蛋白酶
【中图分类号】R458.7【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)08-0006-03
Research on the Anti-Diarrhea Effect and the Mechanism of the Raw and Processed Aucklandiae Radix
ZHANG Xu 1, HOU Ying, FAN Bing-bing, JIA Tian-zhu
（pharmacuetical school,Liaoning University of Traditional Chinese Medicine ,Liaoning Dalian 116600）
[Abstract]：Objective To observe the anti-diarrhea effect and mechanism of Aucklandiae Radix and its processed products in experimental animal. Method Establish the senna and the castor oil induced diarrhea model，the decoctions of the raw and the processed Aucklandiae Radix were given by intragastic admistration, and then estimate the diarrhea index in mice. To explore the anti-diarrhea mechanism by estimating the D-xylose serum level and the pepsin activity of gastric acid in normal rats. Result The diarrhea index results show that the Anti-diarrhea effect of the bran-roasted material is stronger than that of the paper-roasted product and the raw material. Comparing with the anti-diarrhea effect of the different dose materials on senna induced diarrhea mice, the effect of the raw product decreases with the increasing concentration, while the effect of bran-roasted product is opposite. The low dose of bran-roasted Aucklandiae Radix can raise the D-xylose serum level and maintain the pepsin activity in rats significantly. Conclusion The bran-roasted Aucklandiae Radix is good at large intestinal diarrhea of mice and can be used in clinical application instead of paper-roasted product. The mechanism of anti-diarrhea is probably associated with effectively promoting the intestinal absorption, maintaining the pepsin activity, thereby solid large intestine and stop diarrhea.
Key words：Aucklandiae Radix; Bran-roasted Products; Diarrhea index;D-xylose;pepsin
木香为菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.的干燥根，气芳香而辛散温通，擅长调中宣滞、行气止痛，临床上多用于胃肠气滞所致的脘腹胀痛、呕逆少食或用于湿热痢疾而腹痛，里急后重[1]。《本草发挥》[2]上记载 “煨熟可止泻痢，因木香气味俱厚，且熟则无走散之性，惟觉香燥而守，故能实大肠，凡治泄泻恒用之”。目前临床上以生用为主，对其炮制品止泻作用应用较少，未得到足够的重视。2010年版《中国药典》记载木香炮制品为纸煨品，其操作方法较为繁琐，可否用麸煨品来代替？为此，本实验以番泻叶和蓖麻油为致泻剂，建立实验动物腹泻模型，比较木香生品、纸煨品、麸煨品对小鼠腹泻的影响,并通过测定正常大鼠血清中D-木糖含量和胃液胃蛋白酶活力以探讨其抗腹泻作用机制。
1 实验材料
1.1 实验动物
昆明种小鼠，雄性，体重20±2 g；SD大鼠, 雄性，体重200±20 g，由大连医科大学实验动物中心提供,动物许可证号: SCXK2008-0002。
1.2 实验药材、试剂和药品
木香：购自云南西双版纳勐海农科所，由辽宁中医药大学药学院翟延君教授鉴定为菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.的干燥根。番泻叶：大连经济技术开发区保健大药房。盐酸洛哌丁胺胶囊：西安杨森制药有限公司，批号H10910085。蓖麻油：沈阳市试剂三厂。生理盐水：西南药业股份有限公司，批号06070067。胃蛋白酶试剂盒：南京建成生物工程研究所,批号20081217。0.1 %三氯化铁溶液：称取三氯化铁溶于浓盐酸中配制成。1.0 %二羟基甲苯试剂：称取二羟基甲苯溶于0.1%三氯化铁溶液内配制而成，需用前1 h新鲜配制。D-木糖：中国医药集团上海化学试剂公司，批号F20031022。木糖标准液：0.05 mg·mL-1及0.10 mg·mL-1两种。正确称取木糖，溶于0.25 %苯甲酸中，先配制1.00 mg·mL-1浓溶液，然后分别稀释成以上两种浓度木糖溶液备用。
1.3 主要仪器、设备
UV-1800型紫外可见分光光度计：北京瑞利分析仪器公司。TGL-16C型离心机：上海安亭科学仪器厂。
2 实验方法
2.1 木香生品、麸煨品、纸煨品对番泻叶致小鼠腹泻的影响
2.1.1 实验动物分组
取健康雄性小鼠50只，按体重随机分为5组，即模型组、阳性对照组、木香生品水煎剂组、木香纸煨品水煎剂组、木香麸煨品水煎剂组。
2.1.2 供试品制备
麸煨品制备：按照麸煨木香最佳炮制工艺[3]即100 kg木香片加30 kg麦麸，在110～120 ℃下煨制10 min即得，备用。
纸煨品制备：取未干燥的木香饮片，平铺于草纸上，一层草纸一层木香片，间隔平铺数层，上下用木板夹住，置烘箱内，至纸上不留油迹，取出木香，放凉，粉碎，备用。
木香水煎剂制备：生品、麸煨品、纸煨品各20 g，加7倍量水，先浸泡1 h，煎煮30 min，过滤，残渣加3倍水继续煎煮20 min，过滤合并滤液，浓缩至20 mL，得1.00 g·mL-1药液。
番泻叶水煎剂：取20 g番泻叶，加90 ℃200 mL水浸泡10 min，浓缩至20 mL，制成浓度为1.00 g·mL-1番泻叶水煎剂。
盐酸洛哌丁胺混悬液：取2 mg溶于10 mL水，配成0.20 mg·mL-1。
2.1.3 腹泻指数测定
实验前禁食不禁水18小时。模型组灌胃等容量生理盐水；阳性对照组灌胃盐酸洛哌丁胺2.00 mg·kg-1；木香生品水煎剂组、木香纸煨品水煎剂组、木香麸煨品水煎剂组分别灌胃1.00 g·mL-1药液，0.10 mL/10g。给药半小时后以番泻叶混悬液灌胃，0.20 mL/只。将小鼠扣于大鼠代谢笼上的烧杯下，代谢笼里放置102 中速定性滤纸。半小时后开始计时，连续观察5 h，每小时换一次滤纸，观察小鼠的排便情况，按参考文献[4]记录以下指标：
a）稀便率=稀便数/总便数
b）稀便级：表示稀便的程度。以稀便污染滤纸形成污迹面积的大小定级。分为4级，标准如下：
通过以上两个指标计算其腹泻指数，其公式如下：
腹泻指数=稀便率×稀便级
2.2 木香生品、麸煨品、纸煨品对蓖麻油致小鼠腹泻的影响
2.2.1 实验动物分组
同2.1.1分组
2.2.2 供试品制备
同2.1.2
2.2.3 腹泻指数测定
实验前禁食不禁水18小时。模型组灌胃等容量生理盐水；阳性对照组灌胃盐酸洛哌丁胺2.00 mg·kg-1；木香生品水煎剂组、木香纸煨品水煎剂组、木香麸煨品水煎剂组分别灌胃1.00 g·mL-1药液，0.10 mL/10g。给药半小时后以蓖麻油灌胃，0.20 mL/只。将小鼠扣于大鼠代谢笼上的烧杯下，代谢笼里放置102 中速定性滤纸。半小时后开始计时，连续观察5 h，每小时换一次滤纸，记录指标同2.1.3。
2.3 木香生品、麸煨品不同剂量对番泻叶致小鼠腹泻的影响
2.3.1 实验动物分组
取健康雄性小鼠80只，按体重随机分为8组，即模型组、阳性对照组、木香生品高、中、低剂量组、木香麸煨品高、中、低剂量组。
2.3.2 供试品制备
麸煨品、番泻叶水煎剂和盐酸洛哌丁胺混悬液制备：同2.1.2。
木香水煎剂制备：生品、麸煨品各50 g，加7倍量水，先浸泡1 h，煎煮30 min，过滤，残渣加3倍水继续煎煮20 min，过滤合并滤液，浓缩至50 mL，得1.00 g·mL-1药液。再将生品和麸煨品分别稀释成0.50 g·mL-1、0.25 g·mL-1两个浓度溶液，备用。
2.3.3 腹泻指数测定
测定方法同2.1.3。
2.4 木香生品、麸煨品对正常大鼠血清内D-木糖含量的影响[5]
将70只大鼠按体重随机分成7组：正常组、木香生品低、中、高三个剂量组、木香麸煨品低、中、高三个剂量组，每组10 只。木香生品、麸煨品灌胃给药量分别为7.00 g·kg-1·d-1、3.50 g·kg-1·d-1、1.75 g·kg-1·d-1，正常组给予生理盐水灌胃7.00 m g·kg-1·d-1。连续给药1周。实验第7天，灌服3～5 % D-木糖溶液0.3 g·kg-1，1 h后取血，制备血清。在50 mL三角烧瓶内放大鼠血清0.3 mL，加蒸馏水2.4 mL，再加0.3 mol·L-1硫酸0.15 mL，再加10 %钨酸钠0.15 mL，均随加随摇。离心沉淀除去蛋白质，得无蛋白滤液。取试管，第一管为空白管，放蒸馏水2.0 mL，第2、3管分别放低浓度（0.05 mg·mL-1）和高浓度（0.1 mg·mL-1）木糖标准液，其余管放无蛋白滤液2mL。在以上试管内均各加1 %二羟基甲苯试剂2 mL，混匀。置沸水中1 h，冷却后各管加蒸馏水稀释至25mL，混匀。用630 nm测光密度进行比色。校正空白管光密度到“0”点，读取各管光密度值。按下面公式先计算平均Kc值，再将测定管光密度值代入血清内木糖含量测定公式计算其含量。
2.5木香生品、麸煨品对正常大鼠胃液胃蛋白酶活性的影响
2.5.1 胃液采集
大鼠禁食18小时，自由饮水,乙醚麻醉后，腹部正中切开, 用丝线结扎大鼠幽门，同时经十二指肠给药1次，完毕后缝合腹部，禁水禁食，5 h后处死动物。立即结扎贲门，取胃，收集胃液，将胃液收集在离心管中，用3500 rpm离心10 min后，吸取上清分装备用。
2.5.2 胃蛋白酶活性测定
胃蛋白酶可水解蛋白产生含酚的氨基酸，而酚试剂可被含酚的氨基酸还原成蓝色物质，通过比色可测定胃蛋白酶活力。测定前将待测样本平衡至室温，按胃蛋白酶试剂盒说明书进行操作。在660 nm，1 cm光径，用蒸馏水调零，比色。
胃液中胃蛋白酶活力的计算：
2.6 数理统计
数据结果以均数±标准差（）表示，用SPSS 10.0统计软件进行数据处理,采用t检验,P<0.05有统计学意义。
3 实验结果
3.1 木香生品、麸煨品、纸煨品对番泻叶致小鼠腹泻的影响
表1腹泻指数结果显示，对番泻叶致泻的小鼠止泻作用强弱顺序为麸煨品＞纸煨品＞生品，且麸煨品组和纸煨品组的腹泻指数与模型组和生品组相比有差异显著（P<0.05）。
3.3 木香生品、麸煨品不同剂量对番泻叶致小鼠腹泻的影响
表3腹泻指数结果显示，阳性药组、木香生品低剂量、麸煨品中剂量、高剂量止泻效果良好，与模型组比较有显著差异。麸煨品高剂量具有良好的抗腹泻作用，说明木香麸煨后能增强其实肠止泻作用。同时发现木香生品的止泻作用随着浓度的增加逐渐减弱，而麸煨品的止泻作用则随着浓度的增加而增强，提示木香生品和麸煨品在止泻作用上都存在着量效关系，还有待于进一步探讨木香生用理气煨熟止泻的量效关系。
4 讨论
木香煨熟可止泻痢。本实验证实麸煨品、纸煨品止泻作用强于生品，且麸煨品止泻作用最强。由于麸煨工艺操作简便，原料产量大，价格低廉，因此在临床应用上可用麸煨品替代纸煨品。番泻叶为大肠性致泻模型，蓖麻油为小肠性致泻模型，用两种不同的泻下模型有利于了解木香止泻的作用部位。比较麸煨品对两种腹泻模型的影响，发现麸煨品对番泻叶致泻的小鼠腹泻治疗效果更佳。由此可推断，木香麸煨品长于治疗小鼠大肠性腹泻，这与木香实大肠止泄痢说法一致。
木糖吸收试验是较公认的反映消化吸收功能的指标。口服后，在规定时间内，测定血清及尿中D-木糖含量，可了解小肠吸收情况。胃蛋白酶是一种肽链内切酶，食物中的蛋白质消化始于胃蛋白酶的水解作用，其分泌量反映了胃对食物的消化功能。实验结果提示麸煨品抗腹泻作用机制可能与其有效地促进小肠吸收，保持胃蛋白酶活力以利于食物的消化，从而达到实肠止泻的目的有关。
参考文献
[1] 王小英.木香对大鼠实验性急性胃粘膜损伤的影响[J].中医研究,2004,17(2):21.
[2] 明·徐彦纯.《本草发挥》[M].上海：大成书局《薛氏医案》石印本辑录,1922.
[3] 姜潆津子，张 旭，贾天柱.正交试验优选麸煨木香的炮制工艺[J].中国药房，2010,21（43）：4071.
[4] 周干南，胡芝华，汪亚先,等.小鼠腹泻模型的制备与腹泻指数的应用[J].中草药，1994,25（4）:195.
[5] 陈 奇.药理实验方法[M].北京：科学出版社,1999:156.
论文作者:张旭 侯 影 范冰冰 贾天柱
论文发表刊物:《中国医院药学杂志》2016年8月
论文发表时间:2016/10/21
标签：木香论文; 小鼠论文; 胃蛋白酶论文; 作用论文; 蓖麻油论文; 大鼠论文; 番泻叶论文; 《中国医院药学杂志》2016年8月论文;