承德医学院附属医院067000
摘要目的：观察胸腺素β4治疗对深Ⅱ度烫伤大鼠血管内皮生长因子表达及愈合的影响。方法：将92只实验用雄性SD大鼠建立全层皮肤深Ⅱ度烫伤模型，随机分为对照组和Tβ4治疗组。分别于烫伤3、7、10、14d计算皮肤愈合率，观察血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果：治疗第3、7、14d时间，Tβ4组烫伤愈合率均明显高于对照组，且中浓度Tβ4组、高浓度Tβ4组明显高于低浓度Tβ4组（P<0.05）；免疫组化结果显示Tβ4组各时间点VEGF表达均高于对照组，且中高浓度Tβ4组VEGF表达明显高于低浓度组。结论：转化生长因子-β1（TGF-β1）能促进大鼠深Ⅱ度烫伤创面的愈合，胸腺素β4增加TGF-β1的表达。
关键词 深Ⅱ烫伤；胸腺素β4；转化生长因子-β1；血管内皮生长因子
【中图分类号】R644 【文献标识码】A
深Ⅱ度烧伤时损伤皮肤真皮网状层，创面局部肿胀，表皮及真皮浅层形成焦痂，多种类型的细胞、结构蛋白、炎性因子及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）等参与创面的修复[1]。胸腺素β4（Thymosin β4, Tβ4）是由43个氨基酸组成的高度保守的多肽，具有多种生物学功能，能调节G-肌动蛋白偶联蛋白，促进血管生成及皮肤创伤的愈合。本文探讨胸腺素β4治疗对深Ⅱ度烫伤大鼠血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。
1材料和方法
1.1研究试剂
Tβ4由北京诺思兰德生物技术股份有限公司提供；选用Santa Cruz公司生产的鼠抗VEGF抗体，天津灏洋生物科技有限公司提供鼠抗 ELISA试剂盒和SP，严格按试剂盒说明书进行操作。
1.2烫伤建模及创面处理
选取成年健康雄性SD大鼠92只，体质量约230-250g。经7d适应性喂养，烫伤前均向腹腔内注射10%水合氯醛（0.3ml/100g）麻醉，在所有大鼠两侧脊肋角距脊柱0．5cm处脱毛处理，用直径4cm试管及100℃的砝码烫12s，在每只大鼠脊柱两侧各制备1个直径4 mm的全层皮肤缺损模型。
将造模成功的大鼠随机分为对照组和Tβ4实验组，对照组给予磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗，Tβ4实验组又分为三个亚组，分别给予不同浓度的Tβ4处理伤口，低剂量组（L-Tβ4）0.5ug/50ul，中剂量组（M-Tβ4）5ug/50ul，高剂量组（H-Tβ4）15ug/50ul.所有大鼠创面均用无菌纱布包扎，隔天处理伤口一次。
1.3研究指标
1.3.1 创口愈合率
分别于烫伤后3、7、10、14d照相测量创面未愈合面积，根据取材时伤口面积来计算伤口愈合率，计算公式=（原始烫伤面积-取材各时间点残余创面面积/原始烫伤面积）×100%。
1.3.2 血管内皮生长因子（VEGF）
分别在烫伤3、7、10、14d取每组大鼠各6只，照相后腔内注射10%水合氯醛麻醉大鼠，无菌下在创面边缘切取面积约2cm×1cm的全层皮肤组织，并处死大鼠。一侧创面皮肤组织制备石蜡切片，另一侧创面皮肤组织一70℃保存后测定ELISA。
1.4 统计学分析
采用SPSS17.0软件包录入数据并进行分析，烫伤愈合率、VEGF表达水平等计量资料用（±s）表示，采用t检验，P＜0.05表示有统计学差异。
2结果
2.1烫伤愈合率比较
采用MoticMed6 软件计算伤口面积，治疗第3、7、10、14d时，Tβ4组烫伤愈合率均明显高于对照组，且M-Tβ4组、H-Tβ4组明显高于L-Tβ4组（P<0.05），见表1。
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2.2 血管内皮生长因子（VEGF）免疫组化结果
治疗后3d，创面肉芽组织上缘中对照组可见灶状阳性细小血管，L-Tβ4组阳性血管均匀分布，M-Tβ4组见灶状、带状阳性血管，H—Tβ4组可见阳性粗大血管；治疗后7d，对照组见细小血管，L-Tβ4组见阳性细小血管，M-Tβ4组见条索状阳性粗大血管，H—Tβ4组见圆形阳性大血管。治疗后14d，表皮下的肉芽组织中对照组见条索状阳性血管，L-Tβ4组见少量灶状阳性细小血管，M-TB4组见阳性细小血管，H—Tβ4组见较多灶状分布的条索状细小血管。
3讨论
深Ⅱ度烫伤创面的修复一直是临床烧伤科面临的难题之一，一般采用三度四分法划分为Ⅰ度、浅Ⅱ度、深Ⅱ度、Ⅲ度烧伤。深Ⅱ度烧伤时损伤真皮网状层，其愈合有赖于残存的上皮小岛，牵涉到细胞的增殖、分化、迁移、上皮化及基质的合成与沉积等过程，且不同类型细胞、结构蛋白和生长因子参与其中。
VEGF是机体中最重要的促血管生成因子，VEGF能特异性刺激内皮细胞的有丝分裂，诱导内皮细胞增殖，增加血管通透性，并促进血管的新生[2]。严重烧伤患者机体启动一系列的炎症进程，中性粒细胞等趋化因子表达增加，大量炎性介质被激活，增加了伤口疾病VEGF的降解[3]，直接影响了皮肤损伤的愈合。有研究显示，Tβ4能促进人脐静脉内皮细胞迁移和小血管形成，上调VEGF的表达，从而促进血管生成[3]。VEGF阳性主要分布在肉芽组织中的内皮细胞。胸腺素β4（Tβ4）是G-肌动蛋白偶联蛋白，能阻断F-肌动蛋白活性，调节多种细胞因子的表达，刺激内皮细胞迁移，促进肉芽组织中血管的生成，进而促进皮肤创伤的愈合。
本研究中，Tβ4组治疗各时间点烫伤愈合率、VEGF表达均高于对照组，且中浓度Tβ4组、高浓度Tβ4组各时间点烫伤愈合率、VEFG表达均明显高于低剂量组，由此可见，胸腺素β4治疗能增加深Ⅱ度烫伤大鼠转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达，有利于创面的修复。
参考文献
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[2]Galiano RD，Tepper OM，Pelo CR,et a1．Topical vascular endothelial growth factor accelerates diabetic wound healing through increased angiogenesis and by mobilizing and recruiting bone marrow-derived cells[J]．Am J Pathol，2004，164：1935—1947．
[3]乔海兵，聂李亚，马素永，等.重组胸腺素β4对大鼠心肌梗死微血管及血管内皮生长因子表达的影响[J].解剖学杂志，2010,33(5):591-594
[4]李艳，王冠，于虎，等．重组胸腺素β4通过调节血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子促进皮肤创伤愈合[J]．中国组织工程研究与临床康复,2008，12(50)：9857—9861．
论文作者:李树松 吴晓明 马滢,戴文英 孙喜平,赵晓玉
论文发表刊物:《解放军预防医学杂志》2015年第7期供稿
论文发表时间:2016/1/27
标签：血管论文; 烫伤论文; 内皮论文; 创面论文; 胸腺论文; 阳性论文; 大鼠论文; 《解放军预防医学杂志》2015年第7期供稿论文;