【摘要】 目的：建立高效液相色谱法测定天麻药材中天麻苷及天麻苷元含量。方法：采用色谱柱为Spursil C18-EP（250mmX4.6mm），以甲醇-0.1%磷酸水（5:95）为流动相，检测波长为220nm，流速1mL/min，柱温为40℃。结果：采用该色谱，能将天麻苷和天麻苷元进行有效分离，天麻苷和天麻苷元呈良好线性，准确性和重复性均良好。结论：利用高效液相色谱法测定天麻药材中天麻苷及天麻苷元含量，结果较为准确、可靠，是测量天麻药材质量的好办法。
【关键词】高效液相色谱法；天麻药材；天麻苷；天麻苷元
【中图分类号】R28 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2016）27-0307-02
天麻是兰科植物天麻的干燥根茎，又名为赤箭、明天麻、木浦、定风草根等，天麻属于名贵中药，与琼珍灵芝合用能有效治疗头痛失眠[1]。其根茎可治疗肢体麻木、头晕目眩、小儿惊风等。服用天麻后可能导致的不良反应有：头晕、胸闷、恶心、皮肤瘙痒等，有部分还会出现全身浮肿以及脱发[2]。天麻的有效成分为天麻苷以及天麻苷元，常见的测量方法有薄层扫描法、紫外分光光度法、高效液相色谱法[3]。本文针对高效液相色谱法对天麻药材中的天麻苷以及天麻苷元的测定进行分析，现在汇报如下。
1.仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1260高效液相色谱仪，由安捷伦科技有限公司生产。Spursil C18-EP色谱柱，美国迪马公司生产。AT系列溶剂过滤器、AS3120型超声清洗仪，成都华丰科技有限公司生产。MS105/0.01mg电子天平，德国赛多利斯公司生产。CP225D型十万分之一电子天平，徐州安迪太医学仪器设备有限公司生产。202-2型电热恒温干燥箱，厦门优迈科有限公司生产。
1.2 试药
天麻素，中国食药鉴定研究所。天麻苷元对照品，纯度为99%；甲醇，色谱纯，天津大茂化学试剂厂。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆磷酸，分析纯，天津四友试剂公司。天麻新品均经中医鉴定为兰科植物天麻的干燥根茎。
2.方法
2.1 色谱条件
用色谱柱为Spursil C18-EP（250mm×4.6mm），以甲醇-0.1%磷酸水（5:95）为流动相，检测波长为220nm，流速1mL/min，柱温为40℃。进样量为10μl，该条件下天麻苷与天麻苷元分离较好。
2.2 对照品溶液制备
精密称取80℃减压干燥1h的天麻苷和天麻苷元对照品9.95mg和2.74mg，流动相为25ml容量，混匀过0.22μm滤膜，取续滤液。
2.3 供试品溶液制备
取适量的天麻药材，制成粉末，精密称取2g粉末，置入圆低烧瓶中，加入50ml的70%甲醇溶液，水浴加热回流4h，待冷却至室温再次称重，在用70%的甲醇溶液补充失去的重量，在过滤，取5ml续滤液，放入蒸发皿中浓缩到近干，将残渣加入流动相，稀释至10ml，经0.45μm滤膜过滤，用作供试品溶液。
3.结果与讨论
3.1 检测波长的选择
精密量取天麻苷和天麻苷元对照品，分别通过甲醇制作成适量浓度的对照品溶液，将甲醇作为空白，在200～400nm进行扫描，扫描结果显示，天麻苷和天麻苷元均在220nm和278nm有2个吸收峰，连个吸收峰比较，220nm较强，所以选择220nm作为检测的波长[4]。
3.2 线性实验
量取天麻苷和天麻苷元对照品溶液各10ml，均匀混合，分别量取5.0ml、2.0ml、1.0ml、0.5ml、0.2ml的混合液置入10ml的容量瓶中，加流动相稀释至10ml，分别量取10μl溶液，注入到高效液相色谱仪，对峰面积进行记录并作为纵坐标，把溶液浓度作为横坐标，建立直角坐标，可以得出天麻苷线性方程y=3.6x107X+122715 r=0.998，线性的范围为0.02～1.99mg，天麻苷元线性方程y=7.1x107X-70748 r=0.999，线性的范围为0.0055～0.5480mg，在这种线性范围内，天麻苷与天麻苷元关系稳定。
3.3 精密度测试
取天麻苷和天麻苷元混合对照溶液，按色谱条件要求进行天麻苷和天麻苷元的含量测定，重复测试5次，测试出天麻苷和天麻苷元的含量均为0.66%和0.59%。说明测量方法准确度非常高，可靠性好。
3.4 重复性测试
精密称取天麻粉末2g，共称取6次，分别按照供试品的制备方法进行制备，得到6份溶液，在将6份溶液分别取10μl溶液，同样注入到高效液相色谱仪，同线性实验方法一致，通过线性方程计算出天麻苷和天麻苷元的含量。根据结果显示，此方法对天麻药材中的天麻苷和天麻苷元的含量测试具有重复性[5]。
3.5 稳定性测试
量取同样的供试品溶液，分别在48h内不同的时间对天麻苷和天麻苷元的含量进行测量，不同时间测出的结果均为2.30%和1.45%，说明供试品溶液在48h内能保持稳定性。
3.6 回收率测试
精密称取天麻粉末2g，共称取6次，分别按照供试品的制备方法进行制备，得到6份溶液，根据天麻药材中天麻苷和天麻苷元的含量，加入等量的天麻苷及天麻苷元对照样品，精密称取10μl溶液，注入到高效液相色谱仪，并进行回收率计算，结果显示天麻苷和天麻苷元的回收率为99.96%和99.97%，说明天麻药材的测试具有回收率很好。
3.7 样品测定
根据本文方法，取不同等级的天麻样品进行测试，结果显示，四川出产天麻药材的含量最低，只有0.10%，贵州出产天麻药材的含量为0.14%，云南出产天麻药材的含量最高，为0.16%。
【参考文献】
[1]陈俊荣，王万岭.建立天麻药材中天麻苷及天麻苷元的有效测定方法探讨[J].中医临床研究，2012，04(8):117-118.
[2]刘知远，陈福星.HPLC法测定乌饭树叶活性成分槲皮素的含量[J].中国药师，2012，15(10):1507-1508.
[3]刘伟忠，陈清霞，莫玉泉等.反相高效液相色潽法同时测定人血浆齐拉西酮与阿立哌唑浓度[J].医药导报，2011，30(8):1000-1003.
[4]李西林，米健芳，马晓悦等.HPLC法对不同产地天麻药材的质量分析[J].中国实验方剂学杂志，2010，16(8):96-97.
[5]任守利，刘塔斯，林丽美等.HPLC测定不同商品规格天麻中天麻苷与天麻苷元的含量[J].中国实验方剂学杂志，2011，17(15):55-58.
论文作者:刘馥云
论文发表刊物:《医药前沿》2016年9月第27期
论文发表时间:2016/10/9
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