（黑龙江省食品药品检验检测所 黑龙江 哈尔滨 150088）
【摘要】 目的：建立测定盐酸羟甲唑啉滴鼻液中有关物质的高效液相色谱法。方法：采用Agilent Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250mm,5μm）,以1.36g/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0）为流动相A，以乙腈为流动相B，检测波长220nm,柱温25℃，进样量10μL。结果：盐酸羟甲唑啉杂质A浓度在0.5063μg·mL-1～5.0629μg·mL-1（r=1.000，n=5）范围内线性关系良好，平均回收率为98.7%，RSD为1.8%(n = 9)。结论：本方法专属性强，简便准确，可用于盐酸羟甲唑啉滴鼻液中有关物质的检查。
【关键词】 高效液相色谱法；盐酸羟甲唑啉滴鼻液；有关物质
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）27-0395-02
Determination of Related Substances in Oxymetazoline Hydrochloride Nasal Drops by HPLC
Zhao Xiaodi，YU Jia，Lou Zhihong，Zhang Xiao-ning，Yang Lihong
Heilongjiang Institute for Drug Control，Heilongjiang Harbin 150088,China
【Abstract】 Objective To establish an HPLC method to analysis the related substances in Oxymetazoline Hydrochloride Nasal Drops. Methods An Agilent Eclipse XDB-C18 column（4.6 mm×250 mm,5μm）was used for liquid chromatography. The 1.36 g·L-1 solution of potassium dihydrogen phosphate adjusted to pH3.0 with phosphoric acid was used as the mobile phase A,and acetonitrile was used as the mobile phase B. The detection wavelength was set at 220 nm, and the column temperature was 25℃. Results The concentration of impurity A in the range of 0.5063 μg·mL-1～5.0629 μg·mL-1 showed good liner relation with the peak area (r=1.000，n=5). The average recovery was 98.7%,RSD = 1.8%,(n = 9).Conclusions:The method can be used for the determination of related substances in Oxymetazoline Hydrochloride Nasal Drops which provides the advantage of specificity,simplicity and accuraty.
【Key words】 High Performance Liquid Chromatography（HPLC）；Oxymetazoline Hydrochloride Nasal Drops；Related Substances
盐酸羟甲唑啉为咪唑啉类衍生物，属肾上腺素类药物，特异兴奋α肾上腺素受体，在不同组织可致血管收缩[1]。盐酸羟甲唑啉滴鼻液临床主要用于治疗急慢性鼻炎、鼻窦炎、过敏性鼻炎、肥厚性鼻炎等。现行盐酸羟甲唑啉滴鼻液质量标准中未对有关物质进行控制[2]，亦未见相关文献报道过其有关物质方面的研究。本研究在参考《欧洲药典》7.0版[3]盐酸羟甲唑啉原料药有关物质测定方法和相关文献[4-7]基础上，采用高效液相色谱法检查盐酸羟甲唑啉滴鼻液中的有关物质，经验证，本方法专属性强，简便准确，可用于盐酸羟甲唑啉滴鼻液中有关物质检查。
1.仪器与试药
Agilent 1260型高效液相色谱仪、VWD检测器、自动进样器(安捷伦科技有限公司)；BP211D 电子天平（Sartorius公司）。
盐酸羟甲唑啉对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100253-201102，含量99.8%），盐酸羟甲唑啉杂质A对照品（德国LGCGmbH公司，Lot Number 177.01.08.04，含量98.5%）,盐酸羟甲唑啉滴鼻液样品（厂家提供）；乙腈（色谱纯 Honeywell公司）；磷酸二氢钾、磷酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）；超纯水（自制）。
2.方法与结果
2.1 色谱条件
Agilent Eclipse XDB-C18（4.6mm×250mm,5μm)色谱柱，以1.36g/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)为流动相A，以乙腈为流动相B，按下表1进行梯度洗脱，检测波长为220 nm，流速：1.0mL·min-1 ，柱温25℃，进样量：10μL。
表1 梯度洗脱程序
2.2 溶液制备
取本品作为供试品溶液；精密量取本品适量，加水稀释制成每1mL中含5μg的溶液，作为对照溶液。另取盐酸羟甲唑啉杂质A对照品适量，加水溶解并稀释制成每lmL中约含1μg的溶液，作为杂质A对照品溶液。取盐酸羟甲唑啉对照品和杂质A对照品各约5mg，置同一50mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，精密量取10mL置50mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性试验溶液。
2.3 系统适用性试验
取系统适用性试验溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，盐酸羟甲唑啉色谱峰与杂质A色谱峰的分离度应不低于4.0。
2.4 辅料干扰试验
按处方比例及工艺制备不含盐酸羟甲唑啉的空白辅料溶液，按2.1项色谱条件测定。结果显示，在5.0min以前存在辅料色谱峰，19.265min色谱峰为防腐剂苯扎溴铵的色谱峰，各色谱峰对盐酸羟甲唑啉(6.726min)和杂质A(5.709 min)出峰无干扰，该方法具有较强专属性。见图1～图4。
2.5 专属性试验
分别取本品进行如下处理:（1）酸破坏：取本品2mL，置10ml量瓶中，加1mol·L-1 HCl溶液2ml，室温放置30min后，加1mol·L-1 NaOH溶液2ml，加水稀释至刻度，摇匀。（2）碱破坏：取本品2mL，置10ml量瓶中，加1mol·L-1 NaOH溶液2ml，室温放置30min后，加1mol·L-1 HCl溶液2ml，加水稀释至刻度，摇匀。（3）氧化破坏：取本品2mL，置10ml容瓶中，加30%H2O2溶液2ml，室温放置30min后，加水稀释至刻度，摇匀。（4）高温破坏：取本品置100℃水浴中加热3小时。（5）光照破坏：取本品置3500lx下照射24h。分别取上述5种破坏试验溶液，按2.1项色谱条件进样分析，结果表明本品在酸性条件下较稳定，其他条件下样品检出的杂质峰的个数和杂质的量均有不同程度的增加，各种条件下主峰与破坏产物分离良好，说明方法的专属性较好。
2.6 定量限与检出限
取杂质A对照品溶液，用水稀释，按2.1项色谱条件测定，按信噪比S/N≈10计算，杂质A定量限约为0.51μg·mL-1；按信噪比S/N≈3计算，检测限约为0.25μg·mL-1。
2.7 杂质A标准曲线绘制
精密称取杂质A对照品12.85mg，置100mL量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，精密量取10mL置50mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。分别精密量取①2mL②4mL③6mL④10mL⑤20mL置100mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。按上述2.1色谱条件进样测定，以峰面积（Y）为纵坐标，杂质A浓度（X）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=15.998X-0.1207，r=1.000（n= 5）。结果表明，杂质A在0.5063μg·mL-1～5.0629μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.8 仪器精密度试验
精密吸取同一杂质A对照品溶液10μL，按2.1色谱条件进行分析，连续进样5次，计算杂质A峰面积的RSD为1.1%，表明仪器精密度良好。
2.9 回收率试验
精密量取已知杂质A含量为0.17%的盐酸羟甲唑啉滴鼻液（批号A131101）2mL共9份，分成3组，每组按高、中、低浓度分别精密加入2.8项下②号溶液1.0mL、1.2mL和1.5mL，摇匀。按2.1色谱条件进行分析，计算回收率，数据见表2。
表2 杂质A回收率试验结果
3.讨论
3.1 检测波长的选择
取盐酸羟甲唑啉和杂质A分别在190nm～400nm处进行紫外扫描，二者在220nm处均有较强吸收，且在此波长条件下，检测到的杂质数量最多、响应较大。
3.2 耐用性试验
试验中分别用Waters C18柱［XBridgeTM Shield RP18 柱（4.6mm×250mm,5μm)］、Agilent C18柱［Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250mm,5μm)］和Thermo C18柱［BDS HYPERSIL C18（4.6 mm×250mm,5μm)］对供试品溶液进行测定。测定结果表明，在三种不同品牌色谱柱上，主峰与各杂质峰分离度良好。
【参考文献】
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论文作者:赵晓頔,于佳,娄志红,张肖宁,杨利红
论文发表刊物:《医药前沿》2016年9月第27期
论文发表时间:2016/10/9
标签：盐酸论文; 杂质论文; 溶液论文; 色谱论文; 唑啉论文; 精密论文; 刻度论文; 《医药前沿》2016年9月第27期论文;