金敏[1]2002年在《不同雌激素对雌性大鼠海马和脑皮质区域ERs和APP的调节机制研究》文中研究表明背景 阿尔茨海默病(AD)是最常见的一种老年痴呆症，约占所有老年痴呆的80％以上，老年妇女人群中AD的发病率是同龄男性的2-3倍。AD最主要的症状是认知功能受损。大量流行病学和临床资料提示健康的绝经后妇女接受雌激素替代治疗(ERT)能预防AD的发病，同时，ERT还能显着改善AD患者的认知能力，有效治疗绝经后妇女的抑郁、烦躁、失眠等神经症状。但是还有部分学者通过临床的回顾性研究却发现，无论是否使用ERT，绝经后妇女的认知、空间定位等能力无明显差别，故认为ERT并不能改善绝经后妇女的认知功能。因此，雌激素(E)对绝经后妇女的认知功能是否有保护作用及其作用机制是目前国内外研究的热点。 ERT产生不同的疗效提示，雌激素替代对绝经后妇女认知功能的改善与否直接与雌激素剂型、用药方案等密切相关。倍美力(孕马血清中提纯的一种动物源性雌激素)是临床上最常用的激素替代药物，以往有关ERT的临床和实验室用药大多采用以倍美力为代表的结合性雌激素。随着新型的雌激素制剂的问世，诸如雌二醇制剂或植物源性雌激素等，使可供ERT的雌激素制剂有较多的选择，产生了不同的ERT后的临床效应。补佳乐是从天然植物中提取的单一戊酸雌二醇制剂，逐渐在临床广泛使用。本实验采用两种不同剂型、不同来源的雌激素，以探讨不同雌激素对大脑认知区域—海马和脑皮质的作用机制。 雌激素受体(ER)是E在体内发挥作用的最主要途径，也是研究E作用机制的重要锲入点。近年来，随着新的ER亚型—ERβ的发现，引发了新的一轮有关ER对E在全身作用 浙江大学硕士学位论文的介导机制的研究热潮。为了与新亚型区分，经典的 ER k命名为 ER a。己知 ER o和 ER 6都能和配体结合起转录激活作用，但是它们的分子结构、与E的亲和力、在全身各靶组织中的分布表达都存在差异，因此两种受体介导产生的【受体后效应可能不同。己有报道海马和脑皮质组织中有 ER a和 BR 6的分布。绝经后妇女接受 ERT后，外源性雌激素药物对两种受体在海马和脑皮质中表达的调节改变有可能直接影响ERT对认知的作用效果，但是目前尚无相关报道。 己知淀粉样蛋白前体蛋白（APP）及其代谢产物一p淀粉样蛋白（A p）在大脑中的异常沉积是AD的主要病因之一。虽然APP在中枢神经系统（CNS）中的整个代谢过程还未阐明，但是体外实验证实APP是一种能引起神经细胞坏死和凋亡的神经毒性蛋白。离体研究发现，E可以加速神经细胞中nP的降解，使之产生可溶性产物以减少不可溶的A 6生成，从而抑制 APP和 A 6在 CNS中的沉积：E还能抑制神经细胞的调亡：抵御 A 6的神经毒性作用。上述研究提示：E对APP表达代谢的调节作用和抗神经毒性作用，可能是ERT保护绝经后妇女认知功能，防治AD的机理之一。但是目前有关E对APP调节作用的研究多局限于离体水平，在体研究尚无报道。 认知与老年妇女的健康和生活质量密切相关。作为一种防治AD的潜在有效手段，ERT对绝经后妇女认知功能是否有保护作用意义重大，其作用机制急需进一步深入研究，但是，迄今为止，有关不同E对海马和脑皮质ERS和APP的调节机制研究未见报道。第一部分 E对脑皮质和海马区域 ER a和 ER p表达的调节 目的：核酸和蛋白水平检测去势后 ER a和 ERp在雌性 SD大鼠脑皮质和海马组织的表达，并观察两种不同的雌激素药物对 ER a和 ER6表达的调节。方法：实验对象为成年雌性 SD大鼠，20只大鼠分为4组：对照组，去势组（OVX组），去势＋倍美力组（倍美力组），去势＋补佳乐组（补佳乐组）。对照组未经于预直接取标本。其余3组去势48天后，实验组分别给予倍美力和补佳乐，连续灌胃12天，OVX组同时给予生理盐水作为对照。取海马和脑皮质组织，RT－PCR法和免疫组化法分别测定 ER O、ER 0。RNA和蛋白的表达，并进行半定量分析。结果：l、与对照组相比，OVX组脑皮质和海马中 ER Q、ER p。RNA和蛋白表达量均显着降低（P＜0．05，P＜o．o二）。2、倍美力组：与ow组相比，脑皮质和海马中ma。血A表达量下降 （P＜0．05）；海马中ER o蛋白表达量低于OVX组（P＜0．of），而脑皮质中Ek a蛋白表达量 2 浙江大学硕士学位论文 与OVX组相比无统计学差异（P＞0．05）。海马中ER 6蛋白表达量高于OVX组（P＜0．of）， 而海马和脑皮质中ER p ’ItnA以及脑皮质中ER p蛋白 量与OVX组相比无统计学差异 （P＞0．05）。3、补佳乐组：和 OVX组相比，脑皮质和海马中 ER 6．RNA和蛋白表达量均显 着升高（P＜0．of，P＜0．001）。海马中ER a eA表达量高于OVX组（P＜0．05），而脑皮质 中 ER Q．RNA和两种组织中蛋白的表达量与 OVX组相比均无统计学差异（P＞0．05）。 第二部分E对p淀粉样蛋白前体蛋白表达的影?
方迎艳[2]2018年在《青年去势大鼠脑损伤的蛋白组基础及大黄素的脑保护机制》文中研究表明背景:雌激素是体内重要的甾体类激素,主要由卵巢产生,与脑功能存在密切联系。大量研究证明雌激素在保护中枢神经系统结构和功能方面发挥重要作用,比如:通过清除自由基和抗氧化应激作用、降低兴奋性氨基酸毒性和保护线粒体免受损伤等从而减少神经元凋亡;促进神经细胞突起的生长和突触结构的形成等,雌激素缺乏将导致脑功能损伤。更年期女性机体以雌激素缺乏为主要特征,更易患认知功能障碍和更严重的临床痴呆,如血管性痴呆(Vascular dementia,VD)和阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)。经双侧卵巢切除术的青年女性患认知障碍或痴呆、帕金森氏病(Parkinson’s disease,PD)的风险性明显增加。啮齿类动物卵巢切除术(Ovariectomy,OVX),又称去势,是一种被广泛用作研究人类更年期或卵巢功能丧失的疾病建模方法。OVX实验动物以雌激素缺乏为主要特征,出现显着的认知功能减退。更年期不同脑区神经细胞的影响是否一致、分别具有什么特点等问题,尚无系统研究。同时,如何改善更年期脑损伤引起的认知障碍,是一个医学难题。由于雌激素的靶器官多、雌激素作用机制仍不十分清楚等,使雌激素和雌激素替代等疗法在临床应用受限。中国传统医学为解决这一难题提供了研究思路。大黄,是中国传统医学中经方“大承气汤”、“小承气汤”、“调胃承气汤”等的君药,上述经方能通过“通腑气”而显着改善临床认知及精神障碍。大黄素是大黄主要的单体,研究其是否具有改善OVX动物认知障碍的作用,以及相应的作用环节,对相关方剂的推广应用具有重要价值。目的:1.分析青年OVX大鼠不同脑区抑郁和痴呆相关的蛋白组基础。2.研究大黄素对青年OVX大鼠脑功能(抑郁、学习记忆和摄食等行为)的影响,并从“脑-肠轴”角度解析其中的机制。方法:1.模型复制及处理12周龄青年雌性SD大鼠(体重230~280g)分为2组:假手术(SHAM,n=18)组和双侧卵巢切除术(OVX,n=18)组。为了观察大黄素治疗青年OVX大鼠的效果,将12周龄雌性SD大鼠分成4组:SHAM组(n=16)、OVX组(n=16)、OVX+大黄素组(Emodin组,n=16)和OVX+17β-雌二醇组(Estradiol组,n=16)。2.行为学检测每周进行旷场实验(Open field test,OFT)检测大鼠自发活动,术后第7周检测糖水偏好实验(Sucrose preference test,SPT)、强迫游泳实验(forced swimming test,FST)、OFT评价大鼠的行为学状态,术后第8周Mirros水迷宫实验(Mirror water maze test,MWMT)检测大鼠的认知能力。3.蛋白组学分析MWMT检测结束取SHAM组和OVX组大鼠4个脑区的组织:前额叶皮层(Prefrontal cortex,PFC)、海马(Hippocampus,HIP)、下丘脑(Hypothalamus,HYP)和杏仁核(Amygdala,AMY),利用基于i TRAQ标记,Orbitrap Q-Exactive质谱仪通过串联质谱(LC-MS/MS)偶联的液相色谱分析,Max Quant(v.1.4.1.2)搜索分析LC-MS/MS数据得到差异表达蛋白,Uniprot_rat数据库搜索,鉴定分析差异表达蛋白的生物学信息;Uni Prot-GOA数据库(Http://www.ebi.ac.uk/GOA/)搜索差异表达蛋白的基因本论(Gene Ontology,GO)注释。4.肠道收缩和舒张功能检测采用Powerlab生理学数据采集分析系统测定离体SD大鼠和OVX大鼠十二指肠、回肠和结肠始段的肠道收缩功能,并分别观察17-β雌二醇和大黄素对肠道收缩功能的影响。5.ELISA及电化学ELISA ELISA检测血浆17β-雌二醇水平;超敏多因子电化学发光分析测定血浆活性形式的胰高血糖素样肽1(Glucagon-like peptide 1,GLP-1)[GLP-1(7-36)酰胺和GLP-1(7-37)]水平。6.Micro-CT扫描小动物活体Micro-CT成像技术测定大鼠腹部脂肪。7.尼氏染色及Golgi染色术后8周处死大鼠,尼氏染色检测神经元数量,Golgi染色检测神经元树突棘密度和蘑菇形树突棘比例。8.免疫印迹和免疫组化分析免疫印迹检测大鼠脑组织ERα、ERβ、GLP-1R、自噬和凋亡相关蛋白、内质网(Endoplasmic reticulum,ER)应激相关蛋白、突触相关蛋白及骨架蛋白、基质相互作用分子2(Stromal Interaction Molecule,STIM2)、经典瞬时受体电位1(Transient receptor potential canonical,TRPC1)、钙调蛋白激酶Ⅱα(Calcium/calmodulin dependent protein kinaseⅡα,Ca MKⅡα)等水平;免疫组化检测大鼠脑组织小胶质细胞和星形胶质细胞水平,以及ERα、GLP-1R及阿黑皮素原(Proopiomelanocortin,POMC)的水平。结果:1.OVX大鼠出现抑郁行为和认知障碍在旷场实验中:从术后第4周,与SHAM大鼠比较,OVX大鼠上肢上抬次数、移动时间、移动距离和穿越格子明显降低。OVX大鼠糖水消耗百分比明显低于SHAM大鼠。强迫游泳实验:OVX大鼠在5分钟内的不动时间明显长于SHAM大鼠。以上结果表明OVX大鼠出现抑郁行为。Mirros水迷宫实验:在学习阶段,OVX大鼠比SHAM大鼠找到平台的时间明显延长。在记忆测试阶段,大鼠首次穿越平台环形区域的时间OVX组比SHAM组明显延长,OVX组60s内穿越平台环形区域的次数比SHAM组明显减少,以上结果提示OVX大鼠认知障碍。2.OVX大鼠脑内神经元丢失及相应的蛋白组基础设定i TRAQ比值(OVX/SHAM)>1.3并且p<0.05为上调,<0.77并且p<0.05为下调。与SAHM大鼠相比,我们鉴定到的OVX大鼠差异表达蛋白在PFC有20个(5个上调和15个下调),在HIP有41个(30个上调和11个下调),在HYP有17个(11个上调和6个下调)和在AMY有79个(43个上调和36个下调)。OVX大鼠前额叶皮层下调的蛋白主要与信号转导和突触可塑性有关,上调的蛋白主要轴突髓鞘有关;OVX大鼠海马下调的蛋白与Ras信号转导、神经元发育、突触可塑性和Ca2+介导的信号转导有关,上调的蛋白主要与氧化应激、内质网相关的泛素依赖性蛋白分解代谢过程、自噬、细胞凋亡和细胞死亡等相关。OVX大鼠下丘脑下调的蛋白主要与Ca2+介导的信号转导、树突棘形态发育、神经发育、突触可塑性、Ras/ERK1/ERK2和MAPK等有关,上调的蛋白主要与长时程突触性抑制、和氧化应激反应有关;OVX大鼠杏仁核下调的蛋白主要与突触传递和神经递质转运,神经发育和信号转导有关,上调的蛋白主要与轴突髓鞘、氧化应激反应、自噬、细胞凋亡和细胞死亡等有关。OVX大鼠四个脑区的差异表达蛋白主要来自于神经元和小胶质细胞。免疫组织化学结果显示,与SHAM大鼠比较,OVX大鼠小胶质细胞(Iba1识别)在HIP和AMY分别明显增加29.49%和23.15%;星形胶质细胞(GFAP识别)在PFC、HYP和AMY分别明显增加12.35%、19.79%和21.82%。在OVX大鼠的PFC、HIP、HYP和AMY四个脑区都出现神经元丢失,这可能是细胞凋亡的结果,腺苷酸激酶2(Adenylate kinase 2,AK2)、Bax、切割的caspase-3和caspase-3以及磷酸化p53的增加,Huntingtin相互作用蛋白K(Huntingtin interacting protein K,HYPK)、己糖激酶(Hexokinase,HK)和磷酸化的Bcl-2降低。在海马和杏仁核中观察到ER应激激活(GRP78、切割的caspase-12、磷酸化的PERK、IRE-1和ATF6增加)和线粒体功能障碍(细胞色素c增加及SFXN1和NDFA11的降低)。某些自噬相关标志物/调节物的变化表明OVX大鼠脑内自噬失调,包括:在PFC和HIP中ATG7水平增加,在PFC和AMY中GABARAPL2水平增加,在HIP中ORP1增加和SCAMP5水平降低,在HIP和AMY中HSPA1A水平降低,在PFC和AMY中的HYPK水平降低,在HIP和AMY中,LC3II/I,ATG5和Beclin1水平明显增加。3.OVX大鼠突触损伤及相应的蛋白组基础检测到OVX大鼠突触损伤,特别是谷氨酸突触功能障碍。与SHAM大鼠比较,OVX大鼠HIP中,SH3结构域的ArfGAP,ANK重复序列和含有PH结构域的蛋白质1(Arf-GAP with SH3 domain,ANK repeat and PH domain-containing protein 1,ASAP1)和Septin-8(SEPT8)上调、脑酸溶蛋白1(Brain acid-soluble protein 1,BASP1)下调。钙依赖性分泌激活因子1(Calcium-dependent secretion activator 1,CAPS1)在OVX大鼠PFC、HIP和AMY下调。在HIP和AMY中,OVX大鼠的突触后密度蛋白95(Postsynaptic density protein95,PSD95,突触后标记),突触蛋白1(Synapsin1,突触前标记)都显着降低,在AMY中突触结合蛋白(Synaptotagmin,Syt,在神经递质释放中突触前的钙感受器)降低。可能涉及Ca2+相关信号的失调、Ras/Raf1/丝裂原活化蛋白激酶激酶(Mitogen activated protein kinase kinase,MEK)/细胞外信号调节蛋白激酶(Extracellular signalregulated protein kinase,ERK)(Ras/Raf1/MEK/ERK)和磷酸肌醇-3-激酶(Phosphoinositide-3-kinase)/AKT(PI3K/AKT)信号通路。4.OVX大鼠骨架蛋白损伤及相应的蛋白组基础在OVX大鼠的脑内观察到细胞骨架异常,微管相关蛋白(Microtubule-associated protein,MAP)在HIP下调,在HYP和AMY上调;微管蛋白α-1A链(Tubulinα-1A chain,Tuba1a)在HIP上调,在HYP和AMY下调;生长因子受体结合蛋白2(Growth factor receptor-bound protein 2,Grb2)是在OVX大鼠的HIP下调;HSPA1A在OVX大鼠的HYP和AMY中明显降低;伴随着糖原合酶激酶3β(Glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)活化的tau高度磷酸化。5.OVX大鼠杏仁核特异的差异蛋白AMY在调节情绪行为中发挥重要作用。在OVX大鼠的AMY中,GABA1-B2明显减少而GAT明显增加;囊泡膜谷氨酸转运体1(Vesicular glutamate transporter 1,Vglu T1)和p-NR2B(Y1472)明显降低;Fyn(这是一种重要的激酶,可提高含N2B的NMDARs的活性)下调;SHANK3(SH3,and multiple ankyrin repeat domains 3,一种富含兴奋性突触密度的突触后支架蛋白)下调,表明OVX大鼠AMY中兴奋和抑制之间失衡。在AMY中Calretinin增加和Calbindin减少,提示OVX后GABA能传递的调节。6.大黄素改善青年OVX大鼠抑郁行为和认知障碍术后第7周,大鼠糖水消耗百分比,OVX组为60.62%明显低于SHAM组(77.25%);Emodin组(75.28%)和Estradiol组(72.46%)明显高于OVX组。旷场实验:移动总距离OVX组为2087.30cm,明显低于SHAM组(3027.60cm);Emodin组(2637.00cm)和Estradiol组(2912.50cm)明显高于OVX组。5min内穿越的格子数,OVX组为56.94明显低于SHAM组(82.19);Emodin组(76.44)和Estradiol组(91.75)明显高于OVX组。强迫游泳实验:大鼠在水中5min不动时间,OVX组为158.25s较SHAM组(86.49s)明显延长;Emodin组(55.28s)和Estradiol组(69.44s)比OVX组明显缩短。以上结果表明,大黄素或雌激素均可改善OVX大鼠的抑郁行为。Morris水迷宫检测:在学习阶段,大鼠第一次找到平台的时间,OVX组比SHAM组明显延长;Emodin组和Estradiol组比OVX组明显缩短;在记忆检测阶段,大鼠首次穿越原平台环形区的时间,OVX组比SHAM组明显延长,Emodin组和Estradiol组比OVX组明显缩短。60s内穿越原平台的环形区的次数,OVX组比SHAM组明显减少,Emodin组和Estradiol组比OVX组明显增多。以上结果提示:大黄素或雌激素明显改善OVX大鼠认知障碍。大黄素增加OVX大鼠脑区神经元数量、神经元树突棘数量及相关蛋白水平。尼氏染色结果显示:大鼠海马CA1区、CA3区、下丘脑、杏仁核和前额叶皮层神经元数量,OVX组比SHAM组分别明显减少10.23%、12.03%、9.49%、5.53%和8.70%;与OVX组相比,Emodin组分别明显增加14.13%、26.17%、9.53%、10.64%和10.26%;Estradiol组分别增加17.12%、17.58%、12.84%、10.94%和9.42%。以上结果表明,大黄素或雌激素都可以改善OVX大鼠海马、下丘脑、杏仁核和前额叶皮层神经元数量的减少。Golgi染色结果显示:大鼠前额叶皮层、海马、下丘脑和杏仁核神经元树突棘的密度OVX组比SHAM组分别明显减少25.76%、53.06%、45.10%和31.75%。与OVX组比较,Emodin组分别增加40.82%、91.31%、75.00%和55.81%;Estradiol组分别明显增加53.06%、108.70%、89.28%和6.51%。大鼠前额叶皮层、海马、下丘脑和杏仁核神经元蘑菇形树突棘所占比例,OVX组比SHAM组分别明显降低37%、56%、42%和43%;与OVX组比较,Emodin组分别增加61%、104%、80%和78%,Estradiol组分别增加65%、106%、63%和68%。以上结果表明:大黄素或雌激素明显增加OVX大鼠树突棘的密度和蘑菇形树突棘的数量。为了进一步研究大黄素或雌激素改善OVX大鼠抑郁行为和认知能力以及树突棘丢失的机制,通过免疫印迹实验发现大黄素或雌激素可以明显上调OVX大鼠海马突触相关蛋白Synapsin1、PSD95、p-NR2B和p-Glu R1水平,同时上调Ca2+介导的信号通路相关蛋白STIM2、p-Ca MKⅡα和TRPC1水平。另外也观察到OVX大鼠ERK通路的抑制被大黄素或雌激素改善。7.大黄素改善OVX大鼠体重大黄素降低OVX大鼠的摄食量和体重。术后第2周大鼠摄食量和术后2周累积摄食总量OVX组、Emodin组和Estradiol组都比SHAM组明显增加。术后第3周开始给药治疗一直持续6周,术后第8周大鼠摄食量和8周累积摄食总量OVX组分别比SHAM组明显增加,Emodin组和Estradiol组比OVX组明显降低。术后第14天,大鼠体重OVX组、Emodin组和Estradiol组比SHAM组明显增加;术后第56天大鼠体重Emodin组和Estradiol组比OVX组明显降低。术后第8周,大鼠腹围OVX组比SHAM组明显升高,Emodin组和Estradiol组较OVX组明显降低。Micro-CT结果显示:腹部脂肪体积与目标区域总体积(Object volume/total volume)之比,SHAM组、OVX组、Emodin组和Estraddiol组分别为15.77%、30.50%、14.97%、16.19%;OVX组比SHAM组明显增加;与OVX组比较,Emodin组和Estradiol组明显降低。以上结果提示,OVX大鼠腹部脂肪比SHAM组明显增加,大黄素或雌激素明显减少OVX大鼠腹部脂肪。免疫组织化学结果显示:大鼠下丘脑POMC(由ACTH识别)水平,OVX组比SHAM组明显降低49%;与OVX组相比,Emodin组和Estradiol组分别明显增加82%和79%。以上结果表明:OVX大鼠POMC水平降低,下丘脑抑制食欲的活性降低,促进大鼠摄食,雌激素和大黄素均可增加POMC水平,抑制食欲。8.大黄素对OVX大鼠雌激素、GLP-1及受体的影响术后第8周大鼠PFC、HIP、HYP和AMY四个脑区ERα表达情况,免疫组织化学结果显示:海马CA1,CA3,DG区、下丘脑、杏仁核和前额叶皮层ERα水平,OVX组和Emodin组比SHAM组和Estradiol组均明显下调。大鼠血浆17β-雌二醇浓度,OVX组和Emodin组均比SHAM组和Estradiol组显着降低。以上结果表明OVX大鼠大鼠血浆雌激素水平和4个脑区的ERα水平均明显降低,给予雌激素治疗后明显改善,但大黄素治疗后没有改善。超敏多因子电化学发光分析检测大鼠血浆活性GLP-1[GLP-1(7-36)酰胺和GLP-1(7-37)]水平,结果显示:血浆活性GLP-1浓度,OVX组比SHAM组明显降低;与OVX组比较,Emodin组和Estradiol组明显增高,表明大黄素或雌激素可以逆转OVX大鼠血浆活性GLP-1水平。免疫印迹实验观察到OVX组大鼠海马GLP-1R水平比SHAM组分别明显减少,Emodin组和Estradiol组较OVX组明显增加;免疫组织化学实验观察到:OVX组海马CA3区GLP-1R水平比SHAM组降低23%;与OVX组相比,Emodin组和Estradiol组海马CA3区GLP-1R水平分别明显增加43%和48%。免疫印迹和免疫组织化学实验观察到,在下丘脑、杏仁核和前额叶皮层中,GLP-1R水平OVX组比SHAM组明显降低;与OVX组比较,Emodin组和Estradiol组分别明显增加。以上结果表明:OVX大鼠前额叶皮层、海马CA3、下丘脑和杏仁核GLP-1R下调,大黄素或雌激素可以逆转GLP-1R的下调。9.大黄素对OVX大鼠肠道功能的影响离体灌流测定肠道收缩和舒张功能,在Kreb’s灌流液中分别给予5μM和10μM 17β-雌二醇,给药前后肠道收缩幅度比较,可观察到雌激素降低NC组大鼠肠道收缩幅度,并呈现剂量依赖性,同时从肠近端到远端,抑制收缩的程度逐渐增强,同时OVX大鼠肠道对雌激素抑制作用的敏感性明显降低。在Kreb’s灌流液中分别给予1μM、5μM、10μM、20μM和50μM大黄素,可观察到大黄素降低NC组大鼠肠道收缩幅度,并呈现剂量依赖性,同时抑制收缩幅度从肠近端到远端逐渐增强。与NC组大鼠比较,大黄素对OVX大鼠回肠和结肠抑制作用明显增强。免疫印迹结果显示:与SHAM组比较,OVX组大鼠回肠和结肠始端ERβ水平明显降低41.97%和51.71%;TRPC1水平明显降低54.38%和74.72%。结论:在本研究中,我们通过OVX复制了雌激素缺乏的手术绝经大鼠模型,术后7周OVX大鼠出现抑郁和痴呆行为。在OVX大鼠的HIP和AMY中小胶质细胞数量及在PFC、HYP和AMY中星形胶质细胞数量都明显增多,PFC、HIP、HYP和AMY均出现神经元丢失。通过质谱和蛋白质印迹分析,支持内质网应激和线粒体功能障碍触发细胞凋亡涉及OVX诱导的神经元丢失。OVX大鼠也出现突触损伤、细胞骨架异常和髓鞘损伤以及少突胶质细胞功能障碍。在AMY中兴奋性和抑制性神经递质失调可能是导致OVX诱导的抑郁行为的原因。总之,我们的研究提出了OVX后不同脑区抑郁和痴呆相关的变异性,这有助于了解绝经期相关脑损伤的病理生理机制,并寻找潜在的早期干预靶点。大黄素明显改善OVX大鼠抑郁行为、认知障碍和体重。大黄素上调OVX大鼠血浆GLP-1水平,上调OVX大鼠4个脑区GLP-1R水平,经GLP-1-GLP-1R途径上调OVX大鼠海马STIM2-TRPC1-Ca MKIIα通路,改善OVX海马神经元和树突棘数量的减少以及突触损伤。大黄素治疗明显增加OVX大鼠下丘脑POMC水平,抑制摄食,减少腹部脂肪,改善OVX大鼠体重增加。大黄素抑制OVX大鼠肠道收缩,可能促进肠道分泌GLP-1增多。
郭蓉[3]2007年在《雌激素对大鼠海马β淀粉样蛋白清除作用的研究分析》文中指出前言阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)主要表现为进行性记忆和语言能力丧失及识别能力障碍，病理解剖发现有脑萎缩、神经元纤维改变和老年斑。此后有大量研究显示神经炎斑中有Aβ(含β折叠结构的淀粉样蛋白)聚集是AD的重要病理特征。在众多的与AD的产生和发展有关的因素中雌激素是很重要的一项。基础研究发现雌激素可以增加大脑皮层血液供应，降低β—淀粉样物质的沉积，增加基底前脑胆碱乙酰基转移酶的水平。我们利用给去卵巢(OVX)大鼠海马内注射Aβ来观察海马内神经元的变化。在这里作者将Aβ_(1-42)注入去卵巢(OVX)大鼠和未去卵巢大鼠海马后连续2次测定OVX和非OVX大鼠海马中Aβ_(1-42)阳性神经元的数量，观察雌激素对Aβ是否有清除作用从而进一步说明雌激素在AD中的作用。资料与方法250-275G健康雌性SD大鼠40只，分为4组：A组OVX大鼠10只，海马区注射Aβ_(1-42)5ul；B组OVX大鼠10只，海马区注射等容积生理盐水；C组非OVX大鼠10只，海马区注射Aβ_(1-42)5ul；D组对照组10只，非OVX大鼠海马区注射等容积生理盐水。1、标本用放免法测定血清雌激素各组试验动物在去卵巢45天时、60天时分别取材，第一批各组取5只，第二批各组取5只。用3％戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔麻醉，经升主动脉插管，取心脏血2ml分离血清置冰箱保存待测(标本用放免法测定血清雌激素)。2、免疫组织化学定量分析取脑置于4％多聚甲醛固定液中固定，30％蔗糖浸泡至下沉，在注射点附近连续冠状冰冻切片，抗Aβ免疫组织化学染色，切片置于40倍光镜下观察，细胞无色或淡黄色为阴性，红棕色为阳性。参照Paxinos鼠脑图谱，观察海马区内Aβ阳性神经元的数量并照相，然后进行光密度测定。所有数据采用SPSS11.0统计软件进行分析，数据以均值±标准差表示，统计分析用t检验。实验结果1、雌激素水平A组、B组OVX大鼠血清E_2水平显着低于C组、D组非OVX组(P<0.05)。2、免疫组织化学结果A组45天、60天无明显差异(P>0.05)，B组45天、60天无明显差异(P>0.05)，C组45天、60天有显着差异(P<0.05)，D组45天、60天无明显差异(P>0.05)；A组45天与B、C、D组有显着差异(P<0.05)，A组60天与B、C、D组有显着差异(P<0.05)；B组45天与C组无明显差异(P>0.05)、与D组有明显差异(P<0.05)，B组60天与C组有明显差异(P<0.05)，与D组有明显差异(P<0.05)；C组45天与D组有明显差异(P<0.05)，C组60天与D组无明显差异(P>0.05)。结论雌激素水平下降可以使Aβ在海马区沉积增加，雌激素对大鼠海马区过量的Aβ有清除作用，这为临床上应用雌激素预防和治疗阿尔茨海默病提供了依据。
参考文献：
[1]. 不同雌激素对雌性大鼠海马和脑皮质区域ERs和APP的调节机制研究[D]. 金敏. 浙江大学. 2002
[2]. 青年去势大鼠脑损伤的蛋白组基础及大黄素的脑保护机制[D]. 方迎艳. 华中科技大学. 2018
[3]. 雌激素对大鼠海马β淀粉样蛋白清除作用的研究分析[D]. 郭蓉. 中国医科大学. 2007
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