【摘要】 目的：多结节肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是常见的肝脏恶性肿瘤，本研究通过分析多结节HCC患者肝组织和各结节的克隆起源特点，探讨克隆起源检测的意义。方法：选取海军军医大学东方肝胆外科医院收治的1例5结节HCC患者，提取周边肝组织和5个结节DNA，利用PCR-毛细管电泳法检测10个微卫星位点杂合性缺失情况，判断各结节之间的克隆起源关系。结果：5个结节与周边肝组织在10个位点处均检出杂合性缺失，其中T2与其他4个结节之间检出4个或以上的杂合性缺失位点。结论：多结节HCC各结节间的克隆起源模式可能不同。
【关键词】 肝细胞癌；克隆；多结节；微卫星；杂合性缺失
【中图分类号】R730.4 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）26-0078-01
原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC），是我国常见的肝脏恶性肿瘤，本课题组曾较早开展了多结节性HCC克隆特点研究，提出了单克隆（IM型）和多克隆（MO型）两大起源模式[1-2]。IM型是指肝内残留癌细胞的复燃生长，而MO型本质上为一个新生肝脏肿瘤。本研究采用荧光PCR-毛细管电泳技术检测了周边肝组织及HCC的5个独立结节，分析周边肝组织与肿瘤组织各个结节的克隆起源。
1.材料与方法
1.1 样本信息
选取海军军医大学东方肝胆外科医院收治一例原发性肝癌标本，因体检发现甲胎蛋白386.5ng/ml，CT提示肝左叶占位，行“左肝部分切除术”。
1.2 微卫星位点选择：
根据文献与HCC克隆起源相关的基因，以及肿瘤发生发展相关的抑癌基因，选取了10个微卫星位点进行检测，并采用不同荧光标记对引物进行标记[3]。位点信息为如下：FAM标记的D8S520、D16S514、D8S246、D16S419、D1S507、D17S831、D13S268，HEX标记的D1S243、D17S938、D16S505。
1.3 PCR-CE实验方法
采用PCR-毛细管电泳法检测分析克隆起源，PCR反应参照zhao等的报道[4]，最后在ABI 3500测序仪上进行毛细管电泳。
1.4 结果判断方法
结果判读方法参照zhao等的报道[4]。
2.结果
2.1 病理结果
肝脏标本14×8×5cm，切面见5个灰白色肿物（T1-T5），直径1～2.5cm，病理诊断：5结节均为肝细胞癌，硬化型，Ⅲ级。
2.2 免疫组化结果
5个结节免疫组化染色结果基本相同，HePar-1（-），Arginse（-），CK7（+），GPC-3（+），HBsAg（+）。
2.3 克隆起源检测结果
通过上述方法对HCC的5个结节（T1-T5）进行克隆起源检测，结果为：与正常组织（N）相比，肿瘤组织在10个微卫星位点处存在缺失（图1）；5个结节之间进行比较，结节T2和另外4个结节均检出了3个或以上的等位基因缺失，提示结节T2与其他4个结节为不同克隆来源，结节T1,T3-T4之间出现了≤2个等位基因缺失，提示该4个结节为相同克隆来源。
图1 N与T1在D16S505，D17S831和D17S938杂合性缺失示意图
3.讨论
一般认为多结节HCC的发生主要有3种可能，第一种是肝内种植转移（intrahepatic metastasis，IM型），与原发肿瘤为相同克隆来源，即克隆起源；第二种是不同部位的肝细胞在慢性肝炎或肝硬化背景下，因持续受到HBV/HCV感染刺激，形成新的肿瘤（multicentric occurrence，MO型），与原发肿瘤为不克隆来源，即多克隆起源[3]；第三种为以上两种情况兼有之。
克隆起源模式难以通过临床表现和病理的组织形态学判别，即便是在同一个患者中也可能同时存在IM和MO，通过PCR-毛细管电泳法检测肿瘤样本各结节中的10个微卫星位点的长度，能够揭示肿瘤细胞克隆起源的特征[5]。本例中与正常组织相比，5个肿瘤在10个位点中都有缺失，证明在此微卫星区域很有可能存在和肿瘤发生相关的抑癌基因。因此对于多结节性HCC进行克隆起源检测能够对其生物学特性有更加全面的认识。
【参考文献】
[1]丛文铭，步宏，陈杰，等.原发性肝癌规范化病理诊断指南（2015版）.临床与实验病理学杂志，2015，31(3).
[2]朱玉瑶，顾怡瑾，陆新元，等.二例术后远期复发性肝细胞癌的克隆特点分析[J].中华肿瘤杂志，2014，36(6)：450-2.
[3] Xie DY, Fan HK, Ren ZG,et al.Identifying Clonal Origin of Multifocal Hepatocellular Carcinoma and Its Clinical Implications. Clin Transl Gastroenterol.2019;10(2):e00006.
[4] Zhao Q,Yu WL,Lu XY,et al.Combined hepatocellular and cholangiocarcinoma originating from the same clone:a pathomolecular evidence-based study.Chin J Cancer.2016 Aug 24;35(1):82.
[5] Shimada S,Mogushi K,Akiyama Y,et al.Comprehensive molecular and immunological characterization of hepatocellular carcinoma.EBioMedicine.2019 ;40:457-470.
论文作者:朱玉瑶,陈佳,丛文铭
论文发表刊物:《医药前沿》2019年26期
论文发表时间:2019/11/1
标签：起源论文; 肿瘤论文; 缺失论文; 毛细管论文; 电泳论文; 组织论文; 位点论文; 《医药前沿》2019年26期论文;