（大理州第一人民医院检验科 云南 大理 671000）
【摘要】 目的：通过检测955例疑似强直性脊柱炎（AS）患者人类白细胞抗原B27（HLA-B27）抗原阳性率，了解云南大理白族地区AS与HLA-B27抗原的相关性，并初步探讨其临床意义。方法：采用流式细胞术检测患者外周血T淋巴细胞膜上的HLA-B27抗原.结果：955例患者中241例阳性,＜50岁青年为主，占所有阳性的93.8%;HLA-B27抗原阳性率25.2%；男女患者HLA-B27抗原阳性率分别为33.8%和14.0%（P<0.05）有明显差异，男女比例为2.4:1；AS组的HLA-B27阳性检出率91.7%.结论：本地区AS患者好发于青年男性，与HLA-B27 抗原有着很强的相关性。采用流式细胞技术检测临床疑似AS患者T淋巴细HLA-B27表达强度有助于诊断和鉴别诊断AS。
【关键词】 强直性脊柱炎；HLA-B27；流式细胞仪
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）19-0345-02
研究证实HLA-B27不是单一抗原，而是由多种等位基因所控制的亚型构成，不仅有性别年龄差异，且存在人种和地区差异，并且同一亚型在不同地区与AS的易感性也可能不同，因此环境和种族因素的作用也不容忽视。云南省大理白族地区还没有相关的研究报道。本研究采用流式细胞术检测955例我院疑似AS患者T淋巴细胞HLA-B27抗原表达情况，了解当地不同性别和年龄AS患者和其他疾病患者中HLA-B27抗原表达情况有助于临床早期诊断和预防，同时减少误诊和漏诊率。
1.资料与方法
1.1一般资料
955例疑似AS患者为2011年1月～2013年12月在云南省大理白族自治州人民医院三代纯白族就诊患者，其中男542例，女413例，年龄4～80岁，根据临床症状和CT检查结果把955例患者分组，AS组：有典型的临床症状和CT检查支持；腰腿背痛非AS组：有典型的临床症状但CT检查结果不支持；其他：临床症状不典型，CT检查结果也不支持。
1.2 仪器与试剂
美国Beckman-Coulter公司EPICS XL4型流式细胞仪进行检测，荧光抗体CD45-Pc5、HLA-B27-FITC/B7-PE、IgG2a-FITC/IgG1-PE和溶液A（溶血剂)、B（终止剂)、C（固定剂）等试剂均为美国Beckman-Coulter公司产品。
1.3 方法
各组清晨空腹采集静脉血2ML,EDTA-K2抗凝，首先向同型对照管和测定管各加入CD45-Pc5荧光抗体10uL，再向同型对照管加入IgG2a-FITC/IgG1-PE荧光抗体10uL和全血标本50uL，测定管加入HLA-B27-FITC/B7-PE荧光抗体10uL和全血标本50uL，混匀，避光孵育30min，依次向各试管加入溶液A625uL，混匀5～10s待，避光待完全溶血再向各试管加入溶液B265uL，混匀5～10s，然后向各试管加入溶液C265uL，再次混匀5～10s[1]。上流式细胞仪进行检测记录CD45-Pc5和HLA-B27双阳性细胞所占总淋巴细胞的百分比及表达强度（MnX）。
1.4 结果判断和统计学处理
用CD45-pc5和侧向散射光（SS）做双参数图，收集4000个淋巴细胞，并分析淋巴细胞表面的CD45、H L A-B27和H L A-B7的表达情况（见下图）。CD45阳性和HLA-B27双阳性细胞数达到90%以上，同时H L A-B27的平均荧光强度（X-M e a n）达到8.0以上时判为阳性结果，否则为阴性。采用SPSS 19.0统计软件包进行分析。HLA-B27阳性率采用百分率表示，阳性率比较采用χ2检验，以P<0.05为有统计学意义。
2.结果
2.1 955例中，男542例，阳性183例，阳性率33.8%；女413例，阳性58例，阳性率14.0%，经χ2检验P=0.000，＜0.05，有统计学意义，男性的HLA-B27 抗原阳性率明显高于女性的阳性率。
2.2 955例中，≤16岁人群55例，阳性20例，阳性率36.4%；16～50岁人群769例，阳性206例，阳性率26.8%；≥ 50 岁人群131例，阳性241例，阳性率25.2%，≤16岁人群和16～50岁人群阳性率经χ2检验P=0.0782，＞0.05，无统计学意义，说明≤16岁人群HLA-B27 抗原阳性率和16～50岁人群无明显区别。≤16岁人群和16～50岁人群分别与≥50岁人群阳性率经χ2检验P=0.008和P=0.005,均＜0.05，有统计学意义，说明本地区HLA-B27 抗原阳性率主要集中于＜50岁青年。
2.3 AS组、腰腿背痛非AS组和其他组阳性率比较，经χ2检验P＜0.05，有统计学意义，说明各组间阳性率均有明显差异（结果见表1）；用特异性和假阳性率（1-特异性）绘制ROC曲线，对于阈值为60％，AUC大于0.5，其敏感度９1.7％、特异度87.6％（图1）。
表3 AS组、腰腿背痛非AS组和其他组阳性率比较
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图1 HLA-B27诊断AS的ＲＯＣ 曲线
3.讨论
Brewerton 等于1973年首次发现人类白细胞抗原B27（humanleukocyteantigen-B27，HLA-B27）与强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）之间存在密切关联，由于AS 临床症状与许多疾病相似而难以确诊，因此HLA-B27的检测已成为临床诊断和鉴别诊断AS 的重要指标[2]。近年来随着流式细胞仪（flow cytometer，FCM）在临床上应用的日益广泛，FCM以其强大、精确细胞分析能力，被认为是当前分析HLA-B27 的最好方法之一[3]。群体研究表明，AS患者在不同人群和种族中都与HLA-B27存在相关性，且AS的群体发病率与人群的HLA-B27 阳性率呈正相关，中国人群的HLA-B27阳性率约为8%，AS发病率为0.3%，男女比例2～6︰1[4]。我们用贝克曼库尔特流式细胞仪检测临床就诊955例患者的HLA-B27表达，并对结果进行分析后发现，大理白族地区白族居民AS好发人群为＜50岁的青年，而且男性明显高于女性，男女比例为2.4:1，这不仅符合中国群体研究结果,还与很多文献报道相一致[5-7],符合流行病学调查结果,在临床各类有症状就诊患者中HLA—B27表达阳性率为25.2％。AS的HLA—B27阳性率最高，为91.7％，其阳性表达率远高于腰腿背痛患者（27.8%）和其他患者(12.4%),与国内外文献报道的AS患者HLA-B27阳性率大于90%，而健康人阳性率在5%左右相一致[8-9],亦证实HLA—B27在AS等疾病的早期诊断和病情判断中有着重要的价值,腰腿背痛患者阳性表达率也高于其他患者，说明HLA-B27表达与AS以外的疾病也有一定的相关性，有待进一步研究。由于AS主要侵害青壮年人群，这对本地区劳动力资源的危害很大。因此，对本地区疑似AS 患者进行HLA-B27检测可为临床诊断、鉴别诊断和针对性的治疗提供强有力的依据，且对AS的预防亦有积极的意义。
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论文作者:何秋阳,马顺高,沙艳萍
论文发表刊物:《医药前沿》2016年7月第19期
论文发表时间:2016/7/27
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