关键词：丹参、牛磺酸、肝损伤、免疫、小鼠
1 材料
1.1 材料 丹参牛磺酸复合口服液（每100ml丹参35g、牛磺酸1.6g），推荐日服用量20ml/日；SPF级健康小鼠，上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。
1.2主要仪器 解剖器械、灌胃针、UV2600紫外可见分光光度计（2015003）、打孔器、SG-603生物安全柜、多功能酶标仪、二氧化碳培养箱等
1.3用SPSS 10.0软件进行统计处理，统计方法采用方差分析和χ2检验。
2 实验方法
2.1 对小鼠肝损伤保护实验
健康小鼠40只，正常对照组A、CC14急性肝损伤组模型组B、低剂量C（ 3.3ml/kg BW）、高剂量D（6.7ml/kg BW），分别相当于人体推荐剂量的10、20倍。对照组以无菌水代替受试物。按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003版) 进行四氯化碳肝损伤模型肝损伤实验。
2.2对小鼠免疫调节作用的实验
健康小鼠90只，分3批进行试验，按体重随机分成3组，每组10只。对照组、低剂量组（3.3ml/kg BW）、高剂量F（6.7ml/kg BW），相当于人体推荐剂量的10、20倍，对照组以无菌水代替受试物。细胞免疫、单核巨噬细胞功能和NK细胞活性的测定按照《保健食品检验与评价技术规范》(2003 版) ［1］分别进行ConA 诱导脾淋巴细胞转化实验、DNFB诱导小鼠DTH试验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验和NK细胞活性。
3 结果
试验过程中动物饮水、摄食正常，外观、体重无异常。
3.1丹参牛磺酸复合口服液对肝脏 MDA、GSH、TG 含量的影响
表 1 丹参牛磺酸复合口服液对小鼠肝匀浆中 MDA、GSH、TG含量的影响( x±s)
组别 MDA/nmol·mg-1 GSH/mg·g-1 TG/mmol·g-1 空白对照组 0.91±0.43 9.72±2.03 0.021±0.003 模型对照组 2.23±0.54## 7.75±1.31## 0.036±0.009# C(3.3ml/kg BW） 1.86±0.68 8.51±2.13* 0.028±0.005 D(6.7ml/kg BW) 1.22±0.46** 9.19±1.74** 0.021±0.004* 注:#表示与空白对照组比较 P＜0.05;##表示与空白对照组比较 P＜0.01; * 表示与模型对照组比较 P＜0.05; **表示与模型对照组比较 P＜0.01
由表1可见，经口给予小鼠不同剂量的丹参牛磺酸复合口服液后，建立CCL4急性肝损伤模型。模型对照组与空白对照组比较，肝组织中MDA显著升高（P<0.01），GSH显著降低（P<0.01），TG显著升高（P<0.05），表明造模成功。与模型对照组（0ml/kg·BW）比较，高剂量组肝组织中丙二醛含量显著降低（P<0.01），低、高剂量组肝组织中GSH 含量显著升高（P<0.05、P<0.01）高组肝组织中TG含量显著降低（P<0.01）。
3.2 丹参牛磺酸复合口服液对肝组织切片病理学影响
表2 丹参牛磺酸复合口服液对肝组织切片病理学影响（I±SD）
组别 动物数 脂肪变性 （只） 平均分 空白对照 10 8±5 模型对照 10 41±6## C(3.3ml/kg BW） 10 38±9 D(6.7ml/kg BW) 10 26±10* 注:##表示与空白对照组比较 P＜0.01; *表示与模型对照组比较 P＜0.05。
由表2可见，经口给予小鼠不同剂量的丹参牛磺酸复合口服液后，与模型对照组（0g/kg·BW）比较，高剂量组肝组织中脂肪变性平均分显著降低（P<0.05）。
3.3对小鼠胸腺、脾脏器官的影响
由表3结果可见，各剂量组胸腺体比和脾体比与对照组比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)。
3.4丹参牛磺酸复合口服液对小鼠脾淋巴细胞转化和对DNFB诱导小鼠DTH的影响
由表4结果可见，各剂量组加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值与对照组比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)；各剂量组耳壳增重与对照组比较，差异无统计学意义(P﹥0.05)。
表4丹参牛磺酸复合口服液对小鼠脾淋巴细胞转化及对DNFB诱导小鼠DTH的影响( ±SD)
剂量(ml/kg·bw/d) 加ConA孔与不加ConA孔 P 耳壳增重(mg) P 对照组 0.018±0.006 12.7±2.3 3.3 0.019±0.005 0.931 12.8±2.7 1.000 6.7 0.022±0.006 0.433 13.3±2.5 0.724 3.5 丹参牛磺酸复合口服液对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率及吞噬指数影响
由表5结果可见，高剂量组吞噬百分率及吞噬指数高于对照组，差异有统计学意义(P﹤0.05)。
表5 丹参牛磺酸复合口服液对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率
及吞噬指数的影响( ±SD)
剂量(ml/kg·bw/d) 吞噬百分率（%） P 吞噬指数 P 对照组 20.2±2.1 0.24±0.03 3.3 20.7±2.0 0.940 0.24±0.03 0.991 6.7 25.7±3.4 0.021 0.37±0.03 0.045 3.6 丹参牛磺酸复合口服液对对小鼠碳廓清能力和NK细胞活性的影响
由表6结果可见，高剂量组小鼠吞噬指数a高于对照组，差异有统计学意义(P﹤0.05);低、高剂量组NK细胞活性与对照组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。
表6 丹参牛磺酸复合口服液对小鼠NK细胞活性的影响 ( ±SD)
剂量(ml/kg·bw/d) 吞噬指数a P NK细胞活性（%） P 对照组 4.48±0.66 17.2±2.7 3.3 4.82±0.80 0.598 21.8±2.8 0.024 6.7 5.39±0.63 0.022 22.0±5.9 0.013 3 讨论
本研究表明丹参牛磺酸复合口服液能降低小鼠肝组织中丙二醛、TG，升高肝组织中GSH 含量。丹参牛磺酸复合口服液能增加小鼠脾指数、胸腺指数，提高抗体生成细胞数、半数溶血值和NK细胞活性。丹参可减轻氧化应激，使肝组织中的SOD活性升高，从而拮抗Ccl4诱导的大鼠肝损伤同［2］。同时通过钙通道阻滞作用提高血浆中纤维连接蛋白含量，改善肝脏循环和抑制肝细胞脂质过氧化等作用防止肝脏纤维化［3］。牛磺酸是体内一种含量丰富的含硫氨基酸，具有延缓衰老、稳定细胞膜、促进外源性化合物生物代谢等多种生物学功能，并可以保护肝细胞［4］。牛磺酸与免疫体系关系密切，淋巴细胞、单核细胞及中性粒细胞，是参与免疫反应的重要细胞，其中亦含有丰富的牛磺酸，牛磺酸可提高抗HBs的应答能力［5］，从而提高免疫力。动物实验证实各种实验性肝病大多存在着不同程度的肠源性内毒素血症(IETM)，ET可通过各种机制造成肝脏的“继发性损伤”［6］。大量研究也发现IETM发生的同时存在着细胞免疫功能低下，主要是T淋巴细胞亚群的变化［7］。细胞免疫能力和肝损伤的修复具有一定的相关性。本实验的结果表明丹参牛磺酸复合口服同时能提高能提高小鼠的免疫力同时对CCL4肝损伤具有一定的保护作用。具体的作用机制有待进一步确定。
参考文献
[1] 卫生部卫生法制与监督司编.保健食品检验与评价技术规范.2003年版.
[2] 李世芬，胡奇等.丹参三七药对对大鼠酒精损伤后胃及肝脏的保护作用.中国现代医学杂志.2014年10月，第24卷第28期：5-9
[3] 姜雪，史磊.丹参活性成分及药理作用研究进展。药学研究。2017年11月，36（3）：166-169
[4] 姚思宇，赵鹏等.牛磺酸对乙醇性肝损伤的保护作用。毒理学杂志。2006年8月，第20卷第4期：246-247
[5] 曹志然，戎瑞雪等.牛磺酸对实验动物免疫功能及游泳耐力的影响.军医进修学院学报.2007年6月，28（3）：188-189
[6] 张军，刘玉河等.梗阻性黄疸内毒素血症与细胞免疫功能的关系.华人消化杂志.1998年，6(4):305-306
[7] 窦永青，王勤英等.双利肝配伍牛磺酸 精氨酸对四氯化碳急性肝损伤的作用及机制的研究.中国药物与临床.2007年1月，第7卷第1期：20-21
论文作者:曹素芳 刘伟
论文发表刊物:《大众医学》2018年11月
论文发表时间:2019/1/21
标签：牛磺酸论文; 小鼠论文; 丹参论文; 对照组论文; 剂量论文; 口服液论文; 损伤论文; 《大众医学》2018年11月论文;