王晓丹 孙萍
（青岛大学附属烟台毓璜顶医院 264000）
【摘要】 人类表皮生长因子受体-2(HER-2/neu)是乳腺癌的重要指标，准确检测乳腺癌的HER-2状态不仅涉及患者是否适合靶向治疗，并且对内分泌治疗、化疗方案的选择及预后评估起指导作用。采用免疫组织化学(IHC)法和原位杂交(ISH)法相结合的策略进行HER-2检测。ISH包括荧光ISH(FISH)和亮视野ISH(BISH)。本文将对这些技术的优势和存在的不足进行综述。
【关键词】 人类表皮生长因子受体-2 ；HER-2/neu检测；乳腺癌
【中图分类号】 R2 【文献标号】 A 【文章编号】 2095-7165(2015)14-0160-01
目前针对乳腺癌HER-2状态检测的技术越来越多，大致分为：1)HER-2蛋白水平的检测，如免疫组织化学(IHC)；2)HER-2基因DNA水平的检测，如荧光原位杂交(FISH)、亮视野原位杂交(BISH)等；3)HER-2转录水平的检测，如RNA原位杂交(RNA-ISH)等[1]。以上技术是基于乳腺癌组织标本，近年来因效性与动态性需要，外周血检测也日益发展，如HER-2 ECD以及CTC HER-2检测。本文将对相关技术的特点进行介绍，并对其局限性及前景进行综述。
1 乳腺癌HER-2检测的现状
目前国内外乳腺癌HER-2检测最常用的方法为IHC和FISH。IHC因操作简便，价格低廉，对材料要求不高，已成为乳腺癌患者临床检测HER-2扩增初筛最常使用的方法[2]。FIH技术运用标记过的DNA探针检测HER-2，相比于IHC，更易于定量检测，更不容易受到组织样本和观察者主观因素的影响，具有较高的准确性、灵敏度和特异性，是美国食品药品监督管理局批准的检测Her-2基因扩增的“金标准”。
2 乳腺癌HER-2检测的进展
2.1 BISH BISH是近十几年来出现的HER-2基因检测的新技术，主要包括显色原位杂交技术(CISH)、银增强原位杂交(SISH)等方法。2013年10月ASCO/CAP发布了乳腺癌HER-2检测指南，将BISH列为乳腺癌HER-2检测的新技术。
2.1.1 CISH 2000年Tanner首次报道了采用CISH法检测HER2基因扩增的可行性，研究显示CISH与FISH具有极强的一致性，是一种可替代FISH对HER2基因扩增进行检测的切实可行的方法，可弥补IHC检测结果的不稳定性。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆随后大量研究均证实了CISH 与FISH的检测结果具有高度的一致性(85％～100％)，且其在各实验室之间重复性良好，具有广泛的实际使用价值，适合在无FISH检测条件的实验室使用。
2.1.2 SISH SISH主要是利用酶促反应原理促进银离子沉积并凝固到HER-2基因的靶位点而产生精确的显色信号，对显色信号分析后获得HER-2基因状态的方法。除了具备 CISH的优点，SISH较CISH准确度更高、耗时更少。与FISH相比较，操作步骤简单易掌握，可实现快速全程自动化检测，符合临床快速诊断的要求。并且评分标准完全可以参照ASCO/CAP的评分标准。SISH中目前运用最广泛的是双色银染ISH(DISH)，双探针SISH引入CEP17探针作内对照，已被FDA批准用于HER-2检测。据相关文献报道，乳腺癌中SISH检测HER-2基因状态与FISH的符合率达94%～98.9%[14-15]。因此SISH技术用于乳腺癌HER-2检测具有可行性和实际使用价值。
2.2 RNA-ISH RNA-ISH是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是与DNA-ISH类似，通过使用标记的探针与被检组织中HER-2基因的mRNA片段进行杂交反应，然后进行显色或激发光照射，在普通光学显微镜或荧光显微镜下对mRNA信号进行定量，继而获得被检组织HER-2基因表达情况。RNA-ISH具有较高的灵敏度，避免了应用双链DNA探针在杂交反应中存在的两条链之间的复性和第二条链的竞争性杂交问题；并且cRNA-RNA之间形成的杂交体要比DNADNA、cDNA-RNA杂交体性能稳定，因此特异性更强。但是作为一种新技术，RNA-ISH也有如检测标本mRNA可能降解、操作过程中可能受到RNA酶的污染、判读结果时缺乏组织形态学资料等不足。有研究人员发现[3]RNA-ISH与FISH和IHC的一致性分别为96.5%和95.2%。所以RNA-ISH也可能是检测HER-2状态的一种比较可靠方法。
2.3 外周血标本检测 通过采集病人外周血进行HER-2的状态判断的方法，由于创伤小，方便操作，一直以来广受关注，目前技术手段相对成熟的包括HER-2 ECD检测以及CTC HER-2检测两种。
2.3.1 HER-2 ECD检测 在金属蛋白酶的作用之下，HER-2蛋白胞外端(ECD)分子质量为95ku的区域将会断裂并释放到血液循环系统中，进而使得外周血HER-2的检测成为可能。根据不同的文献报道，早期乳腺癌病人HER-2ECD的阳性率在3.1%~ 34.0%之间，而在转移性乳腺癌病人中，HER-2 ECD的阳性率在23%~62%之间，远远高于组织学HER-2的阳性率。目前临床上对HER-2ECD的关注主要集中在HER-2状态辅助判断、病人预后判断、靶向治疗的疗效预测和评价等几个方面。
2.3.2 CTC HER-2检测 CTC指的是从肿瘤组织中脱离并进入血液循环系统的肿瘤细胞，这种细胞的产生是导致病人远处转移发生的必要前提。据相关研究报告，对于接受化疗和靶向治疗的 HER2 阳性 MBC 患者，无论 HR+ 或 HR-，CTC 计数没有预后意义，但 CTC HER2 是否阳性与预后显著相关。并且 CTC HER2阳性、HR- 患者更能从化疗和靶向治疗中获益。2014年ASCO提出CTCs 可作为 HER2 阳性乳腺癌患者预后指标，常规CTC HER-2检测可作为乳腺癌分子靶向治疗疗效的一个参考指标。
3 结语
综上所述，准确检测乳腺癌患者HER-2的状态是乳腺癌患者预后评估和制定有效治疗方案的先决条件，对乳腺癌的诊疗具有重要的指导作用。
参考文献
[1] 王富文,应学翔,夏晓天,等.乳腺癌17号染色体多体对HER2检测的影响及其临床病理学意义[J]. 肿瘤, 2010, 30(1):36-41.
[2] 杨 莹,魏兵,步宏.乳腺癌HER-2检测的现状及存在的问题[J].临床与实验病理学杂志,2010,26(5):602-605.]
[3] 杨飞,杨文涛,步宏.乳腺癌HER2检测中的新问题[J].中华病理学杂志,2012,41(5):289-292.
论文作者:王晓丹 孙萍
论文发表刊物:《医师在线》2015年7月第14期供稿
论文发表时间:2015/10/9
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