（1湖南省中医药研究院附属医院 4I0006；2湖南省湘雅附三）
摘要：目的 探讨高脂血症小鼠应用虎杖提取物白藜芦醇及其甲基化衍生物抗氧化和降血脂作用。方法 随机将36只小鼠均分为6组，正常组小鼠饲料正常，其余组每只每日予以高脂饲料6g，共8周。自试验第5周始，取5%CMC-Na 10mg·kg-1每日单剂量对模型组和正常组小鼠灌胃；Simvastatin组给予辛伐他汀10mg·kg-1；resveratrol组给予白藜芦醇30mg·kg-1；TMS组给予TMS 30mg·kg-1；DMS组给予DMS 30mg·kg-1。药物溶解均用0.5% CMC-Na 10mg·kg-1。结果 白藜芦醇及其所含甲基化衍生物可促高脂血症小鼠血清中LDL-C、TC、TG降低，HDL-C升高；增强SOD酶活性。结论 白藜芦醇及其衍生物均可使高脂血症小鼠病发动脉硬化的几率降低，且甲基化衍生物防范效果更为显著，可能与半衰期延长、生物利用度增加相关。
关键词：白藜芦醇；甲基化衍生物；高脂血症小鼠；降血脂；抗氧化
白藜芦醇具雌激素样活性、抗心血管疾病、保护肝细胞、抗菌、保护神经细胞、抗肿瘤等多种药理作用，属一种雌激素类似物，为自蓼科植物虎杖根茎酵解获得的植物抗毒素。近年有报道指出，白藜芦醇及其成分中所含有的甲基化衍生物有较强的抗血管生成和血管靶向性作用，其在抗动脉粥样硬化中的作用为现阶段临床研究的重点［1-2］。本次研究对高脂血症小鼠中白藜芦醇及其甲基衍生物抗氧化、降血脂作用展开探讨，旨在推动对此药物的应用，现回顾结果如下。
1 材料与方法
1.1 仪器、材料 由美国Molecular Devices公司对Spectra Max M5型酶标仪提供，由美国Rapidbio公司对ox-LDL-c试剂盒提供；由碧云天生物科技研究所对NO浓度测定试剂盒提供；由成都达硕生物科技有限公司对SPF级体重25-35g的小鼠提供，共36只。
1.2 方法
1.2.1 制备白藜芦根及其衍生物
称取经粉碎处理的虎杖干燥根茎1.0g，加入植物精提复合酶SPE-007A3g、pH4.5盐酸缓冲液10L，在45°C条件下，予以24h发酵，取80%乙醇渗漉12L，浓缩减压至无醇味状态，经吸附树脂作吸附处理，乙醇洗脱后，行色谱醇化，用比例为15：1的二氯甲烷－甲醇再度洗脱，获得呈浅粉色状态的粉末，采取活性炭干预的方式进行脱色，白藜芦醇的含量经HPLC测量>98%。将白藜芦醇4.56g于适量丙酮中溶入，取硫酸二甲酯1.35g、无水碳酸钾4.15g加入，在通风橱中放置，安排回流1h，再取硫酸二甲酯1.49g加入，继续行回流处理，使其反应3h。反应的具体情况用TLC板进行检测。完全冷却后，取蒸镏水20ml加入反应液，采用乙酸乙酯进行2次萃取操作，将有机层予以合并，用饱和食盐水加以洗涤，干燥后，实施减压浓缩处理。用硅胶柱将浓缩液有效分离，采用20：1的石油醚－乙酸乙酯洗脱，获得衍生物3，5，4ˊ-三甲基白藜芦醇（TMS），为41%收率；采用10：1的石油醚－乙酸乙酯洗脱，获得3，4ˊ-二甲基白藜芦醇（DMS），为33%收率。
1.2.2 造模
随机将36只小鼠均分为6组，正常组小鼠饲料正常，其余组每只每日予以高脂饲料6g，共8周。自试验第5周始，取5%CMC-Na 10mg·kg-1每日单剂量对模型组和正常组小鼠灌胃；Simvastatin组给予辛伐他汀10mg·kg-1；resveratrol组给予白藜芦醇30mg·kg-1；TMS组给予TMS 30mg·kg-1；DMS组给予DMS 30mg·kg-1。药物溶解均用0.5% CMC-Na 10mg·kg-1。
1.2.3 测定血清生化指标
实验第8周后，各组不禁水禁食12h，最后给药一次，2h后眼球摘除取血，放置于37°C条件下的恒温培养箱中30min，取出，在室温下安排2h放置，后离心10min，获得血清，保存在4°C以下。测定总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、甘油三酯（TG）、过氧化物歧化酶（SOD）。
1.3 统计学分析
采用spss13.0统计学软件，组间计量数据采用（±s）表示，行t检验，P<0.05具统计学差异。
2 结果
2.1 各组血脂参数对比
相较正常组小鼠，模型TC指标、HDL-C指标、LDL-C指标、TC指标均具明显差异（P<0.05）。相较模型组，TMS组、DMS组、白藜芦醇组高脂血症小鼠血清中TC指标、LDL-C指标、TC指标均可有效降低，HDL-C指标可有效提高。相较resveratrol组，TMS组、DMS组HDL-C指标、LDL-C指标差异明显（P<0.05）。见表1。
2.2 氧化指标
辛伐他汀组、TMS组、DMS组SOD活性均具显著差异（P<0.05），TMS组SOD呈正常恢复且高于正常组。其中正常组平均为（94.2±1.7）U·mL-1，模型组为（84.5±1.3）U·mL-1，白藜芦醇组为（91.2±2.3）U·mL-1，DMS组为（92.4±2.4）U·mL-2，TMS 组为（95.5±1.7）U·mL-1，辛伐他汀组为（92.6±2.4）U ·mL-1。
3 讨论
动脉粥样硬化是常见对公众健康构成严重威胁的疾病，而血管内皮细胞损伤、高血脂、炎症反应均与动脉硬化形成具密切相关性［3-4］。结合本次研究示，白藜芦醇及其衍生物TMS、DMS均可使高脂血症小鼠血清中TG、TC水平降低，尤其是TMS，有优于白藜芦醇的降TC效果。LDL被氧化修饰，促氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）形成，是主要引发内皮细胞和平滑肌细胞损伤的因子，故ox-LDL和LDL-C升高，可促进动脉粥样硬化斑块形成。HDL-C可经逆转机制，将血管壁中分布的TC清除，并对LDL-C结合内皮细胞受体竞争性抑制，与动脉硬化斑块形成具负相关性。经实验示，白藜芦醇及其衍生物均可促小鼠血清中LDL-C降低，HDL-C提高，此外，还具促SOD活性提高的效果。
综上，白藜芦醇及其衍生物均可使高脂血症小鼠病发动脉硬化的几率降低，且甲基化衍生物防范效果更为显著，可能与半衰期延长、生物利用度增加相关。
参考文献
[1]马军，田玉顺.含氰基白藜芦醇衍生物的合成及抗癌活性研究[J].延边大学医学学报，2016，39（1）：31-34.
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[3]McNulty J，McLeod D.A scalable process for the synthesis of（E）-pterostilbene involving aqueous Wittig olefination chemistry[J].Tetrahedron Lett，2013，54（47）：6303-6306.
[4]Petrovski G，Gurusamy N，Das DK.Resveratrol in cardiovascular health and disease[J].Ann NY Acad Sci，2011，1215（1）：22-33.
论文作者:王畅1,周知午1（通信作者）,周予禄2
论文发表刊物:《航空军医》2017年29期
论文发表时间:2018/3/7
标签：小鼠论文; 衍生物论文; 指标论文; 乙酸乙酯论文; 血清论文; 辛伐他汀论文; 高脂血症论文; 《航空军医》2017年29期论文;