林裕龙[1]2001年在《HBV前C信号肽区热点变异对HBeAg表达及对基因组复制的影响》文中提出为研究HBV前C基因A1896，T1862，A1896+A1899及A1899变异对HBeAg表达及HBV基因组复制的影响，分别以EBO-plpp和P3.8Ⅱ质粒为载体，采用定点突变技术构建了A1896，A1896+A1899，A1899及T1862点突变的HBV前C/C区真核表达载体（EBO-preC/C）以及HBV全基因质粒（P3.8Ⅱ），并转染HepG2细胞，其中以SEAP报告系统监测P3.8Ⅱ的转染效率。分别用ELISA和western blot分析EBO-preC/C突变体对HBeAg及其前体表达的影响；用southernblot分析转染P3.8Ⅱ突变体的细胞内DNA，以检测突变对HBV基因组复制的影响。 结果显示，转染A1896，A1896+A1899，T1862点突变的EBO-preC/C突变体细胞培养上清经ELISA检测HBeAg均为阴性，而A1899变异株及野株均为阳性。转染A1896，A1896+A1899变异株的细胞经western blot分析，HBeAg及其前体均为阴性；转染T1862突变株的细胞内HBeAg也为阴性，但HBeAg前体呈强阳性；而转染A1899变异株及野株的细胞内HBeAg及其前体均为阳性，但其前体的量明显弱于T1862变异株。转染P3.8Ⅱ突变体的细胞经southernblot分析，A1896，A1896+A1899突变株细胞内的HBV DNA反应带较强，而T1862及野株的HBV DNA反应带较弱，提示A1896变异可能增强病毒基因组的复制。
林裕龙, 侯金林, 王战会, 孙剑, 阎丽[2]2001年在《HBV信号肽区热点变异真核表达载体的构建及对HBeAg表达的影响》文中指出采用分子生物学方法 ,设计引入KpnⅠ和HindⅢ酶切位点的引物扩增HBV的Pre C/C片段 (1814～ 2 45 2 ) ,经酶切后连于EBO真核表达载体 ,利用定点突变技术分别对连接载体进行T186 2 ,A1896 ,A1899,A1896 +A1899点的定点诱变。经错配PCR RFLP和测序分析 ,确定突变的克隆。将突变前后的质粒以脂质体转染法转染HepG2细胞 ,检测不同点突变后HBeAg表达的改变。突变前后的质粒转染HepG2细胞经稳定表达 ,结果未突变的EBO PreC/C重组质粒HBeAg表达为强阳性 ,A1899突变的重组质粒HBeAg表达比未突变的重组质粒稍弱 ,而转染EBO空载体和T186 2 ,A1896 ,A1896 +A1899重组质粒突变体的细胞培养上清HBeAg均为阴性。上述突变体的构建将为体外研究前C信号肽区热点变异对HBeAg在细胞中表达及对肝炎病毒基因组复制的影响奠定基础
参考文献：
[1]. HBV前C信号肽区热点变异对HBeAg表达及对基因组复制的影响[D]. 林裕龙. 第一军医大学. 2001
[2]. HBV信号肽区热点变异真核表达载体的构建及对HBeAg表达的影响[J]. 林裕龙, 侯金林, 王战会, 孙剑, 阎丽. 解放军医学杂志. 2001