石雕 周红玲
湖南中医药高等专科学校附属第一医院 湖南株洲 412000
【摘 要】目的 探讨建立复方咳喘颗粒质量研究标准。方法 采用薄层色谱（TLC）法对复方咳喘颗粒中法半夏、茯苓、浙贝进行定性质量鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）测定复方咳喘颗粒中苦杏仁苷的含量。结果 TLC法可准确地对法半夏、茯苓、浙贝进行定性鉴别；苦杏仁苷在4.099～32.792ug/ml范围内线性关系良好（r=0.9998，n=5）；平均回收率为98.27%，RSD为0.62%（n=6）。结论 该方法简便、准确、重现性好，可作为复方咳喘颗粒质量控制标准。
【关键词】复方咳喘颗粒；苦杏仁苷；高效液相色谱法；薄层色谱法
[Abstract]Objective To establish quality standard of compound cough granules．Methods The qualitative analysis of Rhizome pinelliae praeparatum，Poria cocos，and Fritillaria thunbergii was performed using TLC．The content of amarogentin in the compound cough granules was determined by HPLC．Results Rhizome pinelliae praeparatum，Poria cocos，and Fritillaria thunbergii could be accurately identified by TLC．Amarogentin showed good linearity within the range of 4.099～32.792ug/ml（r=0.9998，n=5），and its average recovery was 98.27%，with RSD at 0.62%（n=6）．Conclusions The method is simple，accurate and reproducible，and can be used for the quality control of compound cough granules．
[Key words]Compound cough granules；Amarogentin；HPLC；TLC
复方咳喘颗粒是我院自制制剂，由苦杏仁、法半夏、茯苓、浙贝、石膏等药材经过浸泡、煎煮、回流、醇沉等制剂工艺提取有效成分制成的中药复方制剂，具有镇咳、祛痰、抗炎作用，临床用于治疗咳喘，具有良好的疗效。为了控制复方咳喘颗粒的产品质量，确保其临床疗效，本实验对复方咳喘颗粒方中主要中药法半夏、茯苓、浙贝进行了薄层色谱鉴别研究，采用高效液相色谱（HPLC）法对其有效成分苦杏仁苷进行含量测定，建立了复方咳喘颗粒可靠的质量标准。
1 仪器与试药
Agilent 1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司），检测系统包括G1311A四元梯度泵、G1329A手动进样器、G1314B紫外检测器、G2170BA色谱工作站。AR153CN型电子天平（美国奥豪斯）；复方咳喘颗粒（本院制剂室，批号20130701，20130702，20130703）；苦杏仁苷对照品及法半夏、茯苓、浙贝对照药材均购于中国药品生物制品检定所；流动相试剂为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 法半夏的薄层鉴别
取复方咳喘颗粒及阴性对照（缺法半夏）各3g，加盐酸2ml，三氯甲烷20ml，加热回流l小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇0.5ml使溶解，作为供试品及阴性对照溶液。另取法半夏对照药材2g，同法制成对照药材溶液。照《薄层色谱法检验标准操作程序》（附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液、阴性对照溶液、对照药材溶液各5μl，分别点于同一硅胶GFⅢ薄层板上，以石油醚（30～60℃）一乙酸乙酯一丙酮一甲酸（30：6：5：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视[1-2]。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照溶液在与对照药材及供试品色谱相应的位置上无斑点。
2.1.2茯苓的薄层鉴别
取复方咳喘颗粒及阴性对照（缺茯苓）各3g，加乙醚50ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品及阴性对照溶液。另取茯苓对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照《薄层色谱法检验标准操作程序》（附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各2μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯一乙酸乙酯一甲酸（20：5：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液一乙醇（4：1）混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰[3]。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。阴性对照溶液在与对照药材及供试品色谱相应的位置上无斑点。
2.1.3 浙贝的薄层鉴别
取复方咳喘颗粒及阴性对照（缺浙贝）各3g，加浓氨试液2ml与三氯甲烷20ml，放置过夜，滤过，取滤液8ml，蒸干，残渣加三氯甲烷lml使溶解，作为供试品及阴性对照溶液。另取浙贝对照药材lg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）试验，吸取供试品溶液10～20μl、对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶.G薄层板上，以乙酸乙酯甲醇一浓氨试液（17：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液[4]。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而缺浙贝的阴性样品则在此位置上无斑点。
2.2 苦杏仁苷的HPLC测定
2.2.1 色谱条件与系统适用性
色谱柱：Agilent 300StableBond -C18柱（250mm×4.6mm，5?m）；柱温25℃；流动相：乙腈-0.1％磷酸溶液（8：92）；流速1.0mL/min；检测波长207nm；进样量10μL。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μL，注入HPLC 仪，按上述色谱条件进样分析，按苦杏仁苷色谱峰计算理论塔板数应≥ 7000，分离度＞1.5，对照品与供试品主成分峰的保留时间基本一致，阴性对照无干扰。
2.2.2 对照品溶液的制备
精密称取苦杏仁苷对照品2.562 mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备
取复方咳喘颗粒适量，研成细粉，取约1.0g，精密称定，置于100mL具塞锥形瓶中，加入0.1mol/LHCL溶液50mL，称定重量，超声处理30min，冷却后用0.1mol/LHCL溶液补足减失重，摇匀，滤过，精密量取续滤液25mL，滴加氨水调节pH值至11～12，用乙醚萃取3次，每次30mL，合并乙醚萃取液，加5％盐酸乙醇溶液1mL，摇匀，低温蒸干，残渣用流动相溶解至10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，过0.22?m微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
2.2.4 阴性对照溶液的制备
按复方咳喘颗粒制备工艺制备缺苦杏仁的阴性样品颗粒，依照“2.2.3”项下方法制得阴性样品溶液。
2.2.5 线性关系考察
精密吸取苦杏仁苷对照品溶液1、2、4、6、8mL，分别置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成浓度分别为4.099、8.198、16.396、24.594、32.792ug/ml的溶液，摇匀，按上述色谱条件分别进样10μL，测定苦杏仁苷色谱峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为A＝1.6352C－0.5483（r＝0.9998，n＝5）。结果表明，苦杏仁苷的检测浓度在4.099～32.792ug/ml范围内线性关系良好。
2.2.6 精密度试验
精密吸取“2.2.1”项下的苦杏仁苷对照品溶液10μL，按上述色谱条件重复进样6次，记录色谱峰面积，计算RSD＝0.76％（n＝6），结果表明仪器精密度良好。
2.2.7 稳定性试验
取已知含量的复方咳喘颗粒供试品溶液（批号：20130701）适量，在室温条件下分别于0、2、4、8、12、24 h 进样10μL，记录色谱峰面积。计算RSD＝1.19％（n＝6），结果表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.2.8 重复性试验
取复方咳喘颗粒样品（批号：20130701）适量，分别按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液6份，照上述色谱条件进样测定，记录峰面积。计算苦杏仁苷的平均含量为0.7634mg/g，RSD＝1.32％（n＝6），结果表明本方法重复性良好。
2.2.9 加样回收率试验 精密量取已知含量的复方咳喘颗粒样品（批号：20130701）适量，置于25mL量瓶中，分别精密加入高、中、低浓度的苦杏仁苷对照品溶液，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果见表1。
3 讨论
复方咳喘颗粒中苦杏仁、法半夏、茯苓、浙贝作为方中的君、臣药，对疾病的治疗起主要作用，因此采用高效液相色谱法对苦杏仁的有效成分苦杏仁苷的含量进行测定，采用薄层色谱法对法半夏、茯苓、浙贝进行定性质量鉴别，可以更好地控制产品质量。实验表明，本方法简便、准确，可作为复方咳喘颗粒的质量控制标准。
参考文献：
[1]中华人民共和国药典?2015年版.一部[S].中国医药科技出版社，2015：119-120
[2]吴巧凤，戴晓燕，文欣欣.祛瘀清热颗粒剂中苦杏仁苷和甘草酸成分的含量测定[J].中华中医药学刊，2012，30（8）：1708-1710
[3]陈向前.薄层色谱法同时鉴别知柏地黄丸中泽泻、茯苓、山茱萸[J].海峡药学，2014，26（3）：86-87
[4]郭朝光，陈丽娟.莪棱胶囊薄层色谱鉴别研究[J].海峡药学，2011，23（8）：82-83
[基金项目]：湖南中医药管理局资助项目（2013144）。
作者简介：
石雕，男，主管药师，研究方向为中药新制剂研究与开发。
论文作者:石雕,周红玲
论文发表刊物:《航空军医》2016年第1期供稿
论文发表时间:2016/4/13
标签：咳喘论文; 溶液论文; 苦杏仁论文; 色谱论文; 复方论文; 薄层论文; 颗粒论文; 《航空军医》2016年第1期供稿论文;