［关键词］ 丙氨酸;酒精性肝损伤；甘油三酯；丙二醛
随着经济水平的快速发展和人民生活水平的显著提高，中国的酒精肝、脂肪肝、乙
肝发病人数众多，据2006版中国肝病市场研究报告显示：中国每年大约有200万急性肝炎病例，且每年还有上升趋势。而肝病的难以治愈性加上中国人“是药三分毒”的观念，尤其肝脏又是转化“毒物”的主要器官之一，人们越来越重视对肝脏的保护。Ｌ-丙氨酸是组成人体蛋白质的20多种氨基酸中的一员，为分子内含有羧基和氨基的中性非必需氨基酸，也是人体血液中含量最高的氨基酸。它是ɑ-丙氨酸的一种旋光异构体，所以又称为L-ɑ-氨基丙酸，溶于水，无臭无毒，具有鲜味及甜味，其甜味是蔗糖的1.2倍。有研究指出丙氨酸可以有效地减轻酒精对肝脏的损害。通过对腹腔注射170mmol/kg体重19% 的乙醇的小鼠进行试验表明,服用L-丙氨酸的小鼠的生存率为67% ,比不投的高出34% [1]。但L-丙氨酸对肝脏保护作用的实验研究文献较少，本文探讨了丙氨酸在 SD 小鼠酒精性肝损伤中对肝脏的保护作用。为研究以L-丙氨酸为原料的保肝产品提供依据。
1 材料与方法
1.1 样品 L-丙氨酸，白色结晶性粉末。试验时用蒸馏水配制，放入冰箱冷藏保存。
1.2 动物 健康SPF级昆明种雄性小鼠共50只，体重16g〜22g，饲料来源于北京科澳协力饲料有限公司。
1.3 仪器与试剂
仪器 解剖器械、灌胃针、紫外可见分光光度计、冰冻切片机、Motic生物显微镜
试剂 丙二醛( MDA)和谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒、双缩脲测定试剂盒、甘油三酯(TG)测定试剂盒。
1.4 方法 取50只昆明种雄性小鼠随机平均分成5组。每组10只，设3个剂量组92 mg/(kg·BW)、183 mg/(kg·BW)、550mg/(kg·BW)。每日一次经口给予，连续灌胃32d后测各项指标。小鼠灌胃体积为10mL/kg·BW。同时设空白对照组（0g/kg·BW）和模型对照组（0g/kg·BW）,每日灌胃体积与各受试物组相同。各剂量组均给予维持饲料。每周称重给予受试物结束时，将模型对照组和各剂量组一次性灌胃给予50%乙醇12mL/（kg·BW），空白对照组给予无菌水。各组动物隔夜禁食16h。处死动物立即称取肝重计算脏体比，并按试剂盒要求进行肝脏生化指标( MDA、GSH、TG) 检测和组织病理学检查，然后用 SPSS 11.0 对数据进行统计处理。
1.5 评定标准 在酒精性肝损伤模型成立的前提下，肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标结果阳性，或肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标中任两项指标阳性和病理组织学检查结果阳性，可判定受试样品具有对酒精肝损伤有辅助保护作用。
2 结果
2.1 L-丙氨酸对小鼠体重的影响
表1 L-丙氨酸对小鼠体重的影响( x±s)
组别 动物数 给予受试物前 给予受试物后 (只) 体重(g) 体重(g) 空白对照组 10 21.2士 1.0 48.1±3.5 模型对照组 10 21.5±1.1 49.2±2.2 92mg/(kg·BW) 组 10 21.6±0.9 47.2土 3.1 183mg/(kg·BW) 组 10 21.7±0.5 47.1±2.7 550mg/(kg·BW) 组 10 21.7±0.7 47.9±3.9 由表1可见，小鼠的初始体重在各剂量组与模型对照组(0g/kg·BW)间比较、空白对照组与模型对照组间比较，差异均无显著性(P>0.05)。即小鼠的初始体重在各组间较为均衡。经口给予小鼠不同剂量的L-丙氨酸32d后，小鼠的体重在各剂量组与模型对照组(0g/kg·BW)间比较、空白对照组与模型对照组间比较，差异均无显著性(P>0.05)。即L-丙氨酸对小鼠体重无不良影响。
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2.2 L-丙氨酸对小鼠肝脏 MDA、GSH、TG 含量的影响
表 2 L-丙氨酸对小鼠肝匀浆中 MDA、GSH、TG 含量的影响( x±s)
组别 动物数（只） MDA/nmol·mg-1 GSH/mg·g-1 TG/mmol·g-1 空白对照组 10 0.92±0.42 9.71±2.04 0.021±0.003 模型对照组 10 2.21±0.55## 7.73±1.33## 0.035±0.008# 92mg/(kg·BW) 组 10 1.90±0.77 7.78±2.11 0.030±0.005 183mg/(kg·BW)组 10 1.85±0.48 8.53±2.23* 0.027±0.005 550mg/(kg·BW) 组 10 1.21±0.45** 9.18±1.76** 0.022±0.006* 注:#表示与空白对照组比较 P＜0.05;##表示与空白对照组比较 P＜0.01;
* 表示与模型对照组比较 P＜0.05; **表示与模型对照组比较 P＜0.01。
由表2可见，经口给予小鼠不同剂量的L-丙氨酸32d后，建立酒精肝损伤模型。模型对照组与空白对照组比较，肝组织中MDA显著升高（P<0.01），GSH显著降低（P<0.01），TG显著升高（P<0.05），表明造模成功。与模型对照组（0g/kg·BW）比较，550mg/(kg·BW)组肝组织中丙二醛含量显著降低（P<0.01），183mg/(kg·BW)组与550mg/(kg·BW)组肝组织中GSH 含量显著升高（P<0.05、P<0.01），550mg/(kg·BW)组肝组织中TG含量显著降低（P<0.01）。
2.3 L-丙氨酸对肝组织切片病理学影响
表3 L-丙氨酸对肝组织切片病理学影响（I±SD）
组别 动物数 脂肪变性 （只） 平均分 空白对照组 10 9±4 模型对照组 10 41±6## 92mg/(kg·BW)组 10 39±10 183mg/(kg·BW) 组 10 34±11 550mg/(kg·BW)组 10 28±11* 注:##表示与空白对照组比较 P＜0.01; *表示与模型对照组比较 P＜0.05。
由表3可见，经口给予小鼠不同剂量的L-丙氨酸32d后，建立酒精肝损伤模型。 模型对照组与空白对照组比较，肝组织脂肪变性平均分显著升高（P＜0.01），表明模型建立成功。与模型对照组（0g/kg·BW）比较，550mg/(kg·BW)组肝组织中脂肪变性平均分显著降低（P<0.05）。
3 讨论
丙氨酸是存在于许多食品中的一种氨基酸 ,已经用作饮食的添加剂。近几年来，Ｌ－丙氨酸在国内外已普遍应用于食品的营养强化和调味。Ｌ－丙氨酸本身不含钠离子，在用量上具有更高的安全性；目前我国批准的作为食品添加剂使用的 L-丙氨酸仅适用于经酶法生产制得的 L-丙氨酸，但酶法生产过程成本高，有研究者研究了发酵法生产L-丙氨酸，并对其安全性进行了研究。陈耿等[2-3]研究发酵法 L-丙氨酸对小鼠的亚慢性毒性和最大无作用剂量、L-丙氨酸对小鼠的急性毒性和遗传毒性研究。结果表明发酵法 L-丙氨酸对雌、雄小鼠亚慢性毒性试验未观察到有害作用剂量( NOAEL) 分别为 5.56、4.58 g/kg BW( 分别相当于推荐剂量的 332 和 274 倍)，发酵法L-丙氨酸急性毒性属无毒级,未见其明显致突变作用或遗传毒性。
众所周知 ,酒精是通过肝脏进行代谢的,长期多量摄入酒精时 ,会引起脂肪肝、纤维化、肝硬化等症;即使饮入的酒量还未引起上述症状,也会引起血糖下降,行动受到抑制。L-丙氨酸在被人体吸收后可产生大量的泛酸，泛酸是 NAD+的辅酶，泛酸的增加促进了酒精在人体内的代谢，同时丙氨酸可以抑制乙醇所致的丙氨酸氨基转移酶（ALT）升高，对肝损害有显著的保护作用［4］。丙氨酸作为增味剂的较早应用是将其添加到合成酒中，增加合成酒的浓香味和甜味。Ｌ－丙氨酸可增加酒的甜味，使酒的味道更加醇厚，也能防止啤酒和发泡的氨基酸褐变，减少酵母气味，同时由于它具有减轻酒精对肝脏损伤的解毒作用，所以 Ｌ－丙氨酸被广泛用于低度酒的生产[5]，也可以将 L-丙氨酸与谷氨酰胺以 1 0. 05～ 0. 5(摩尔比 )[6]混合物制成片剂、胶囊、乳剂、口服液等,这样能起到保肝护肝、降低酒精中毒的作用。
本文运用酒精肝损伤模型法，设3个剂量组92mg/(kg·BW)、183mg/(kg·BW)、550
mg/(kg·BW) ,研究了L-丙氨酸对酒精性肝损伤保护作用，结果显示与模型组比较，受试物550mg/(kg·BW)组肝组织中丙二醛（MDA）含量显著降低（P<0.01），183mg/(kg·BW) 组与550mg/(kg·BW)组肝组织中还原型谷胱甘肽（GSH） 含量显著升高（P<0.05、P<0.01），550mg/(kg·BW)组肝组织中甘油三酯（TG）含量显著降低（P<0.01）。550mg/(kg·BW)组肝组织中脂肪变性平均分显著降低（P<0.05）。L-丙氨酸对小鼠体重无不良影响，表明在本实验条件下，L-丙氨酸对小鼠乙醇致酒精性肝损伤具有辅助保护作用，具体机制有待进一步研究。
参考文献
[1] 须田都三男 ,堀口正晴 .抗酒精损伤肝脏用组成物.日本特许公开公报,昭61-50917, 1986-03-13.
[2] 陈耿，徐军，陆罗定,等.发酵法 L-丙氨酸小鼠 90 天喂养试验研究［J］.中国食品卫生杂志，2016，28 （4）:415-421.
[3] 陈耿，施伟庆，王丽云，等.发酵法 L-丙氨酸对小鼠的急性毒性和遗传毒性研究［J］.环境与健康杂志，2016，33（1）：33-36.
[4] 杜军.氨基酸工业发展报告［M］.北京：清华大学出版社，2011：15-16.
[5] 郭媛，王丽娟，邱婷，等.Ｌ-丙氨酸在食品工业中的应用潜力.中国调味品［J］.2017,42（7）：177-180.
[6] 马渡一德 ,今野正良 ,鸟居邦夫 .抗酒精中毒用组成物.日本公开特许公报.昭64-54320. 1988-03-08.
论文作者:凌敏 李秀兰
论文发表刊物:《药物与人》2018年11月
论文发表时间:2019/1/21
标签：丙氨酸论文; 小鼠论文; 对照组论文; 模型论文; 剂量论文; 肝脏论文; 损伤论文; 《药物与人》2018年11月论文;