DNA的粗提取与鉴定实验的改进，本文主要内容关键词为：鉴定论文,DNA论文，此文献不代表本站观点，内容供学术参考，文章仅供参考阅读下载。
DNA的粗提取与鉴定实验是人教版全日制普通高级中学《生物》必修第二册中要求学生掌握并完成的一个重要实验。实验原理指出：DNA分子在不同浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同，当氯化钠的物质的量浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低，析出DNA；利用DNA分子不溶于冷酒精，而细胞中的杂质可溶于冷酒精的性质差别提取含杂质较少的DNA；最后利用DNA遇二苯胺（沸水浴）会现蓝色，鉴定DNA。
一、改进原因
和其他实验相比，这个实验的操作过程比较复杂，对实验细节的处理要求更高，实验的成功率相对较低。很多学生在做此实验时很难得到预期的实验效果，甚至很多老师都不能轻易地完成此实验，达不到教材的要求，很难对DNA形成直观的认识。笔者在教学实践中反复试验、总结，针对这个实验成败的几个关键点进行分析和改进。
二、改进意见
1.整个实验在塑料烧杯中操作
玻璃烧杯对DNA有吸附作用，会使部分DNA被吸附到烧杯壁上。而塑料烧杯对DNA没有吸附作用，避免了DNA的损失。
2.用塑料筷子代替玻璃棒
除实验第七步用玻璃棒以外，其他步骤的搅拌和引流操作最好用塑料筷子（塑料筷子对DNA无吸附作用，并且方便实惠）。玻璃棒对DNA也有吸附作用，使部分DNA缠绕到玻璃棒上，导致溶液中DNA含量减少。用塑料筷子和塑料烧杯操作，可以减少DNA的损失。
3.第一步搅拌要快、猛、时间充分
实验步骤第一步在整个实验中最为关键。教材要求“搅拌五分钟”。很多学生操作的时候，轻轻地缓慢地搅拌，这样很难使细胞充分破裂。所以一定要像打鸡蛋一样使劲搅拌，而且时间必须确保5min，这样才能使鸡血细胞充分破裂让DNA进入溶液。
4.确定加入蒸馏水的用量
实验第三步，缓缓加入蒸馏水，析出DNA。由于教材没有给出加入蒸馏水的具体用量，很多学生操作时对加入蒸馏水的量不能有效把握，往往过多或者过少，从而不能析出DNA。根据实验第二步中加入2mol/L的氯化钠40mL，可得出此时需要加入蒸馏水的量大约是500mL（氯化钠溶液物质量浓度为0.14mol/L），能充分地析出DNA。但在实际操作中，有时候加入蒸馏水的量在250～300mL可以最多的析出DNA，分析其原因很可能是第二步溶解DNA时氯化钠的浓度不足2mol/L。
三、实验提示
1.实验材料处理
实验用的是新鲜的鸡血细胞液，不能用哺乳动物的血细胞（无核DNA）。一些老师在采集鸡血后没有离心或静止沉降就马上用于实验。这种血样不经过沉降或者静止时间不够，鸡血中含杂质成分过多，血细胞浓度较低，实验时释放出的DNA量很少，会导致最后的实验现象不明显。所以，如果没有离心设备的学校在提前处理鸡血细胞液时，一定要静止放置一到两天，然后取其下沉液，切不可操之过急。
2.酒精必须冷却
实验第七步“提取含杂质较少的DNA”时，加入体积分数为95%的冷酒精，一定要确保酒精冷却（5℃以下）至少存放24h。冷却的酒精对DNA有凝聚作用。如果不考虑到这一点，只图方便，在学生实验前就把酒精摆放在实验桌上，等到学生操作到这一步时，酒精已经变成室温（20℃左右），这样对DNA的凝聚效果非常差，几乎不能缠到玻璃棒上。所以，一定要把酒精放入冰箱内存放，待学生操作到这一步时，再立即取出用于实验。如果出现的丝状物较少，可以将此混合液再放入冰箱中冷却几分钟。
3.不能用自来水代替蒸馏水
自来水具有硬性和少量微生物，有些城市的自来水还含净化药剂，会影响DNA的提取和鉴定效果。
4.正确搅拌
实验步骤三、五、七都需要搅拌。教师应提醒学生注意，在进行步骤三、五时，筷子不要直插烧杯底部，而且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。进行步骤七时，要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间，用手缓慢转动，使DNA充分地缠到玻璃棒上。
5.DNA鉴定
①二苯胺溶液容易被氧化变质，必须严格按照比例现配现用。其中冰醋酸必不可少，如果不加，无实验现象。
②沸水浴的时间必须保证5min或以上，才会有较明显的实验现象。沸水浴后待静置冷却一段时间后，蓝色更为明显。颜色的深浅与DNA的量直接相关。有的实验组由于杂质太多，沸水浴后出现红褐色。
在整个实验操作过程中，一定要严格按照教材要求定时定量完成。有的学生添加试剂没有比量意识，控制时间也不准确。如果不能确保实验的科学性和严密性，最后就很难达到预期的实验效果。
本实验的步骤较多，操作时需要学生认真、耐心，严格按照实验要求完成。教师在指导学生操作实验时一定要对步骤的关键点进行强调，确保学生能规范成功地完成实验。这样，不仅培养了学生的实验思维和动手能力，也提升了学生的成就感和对生物科学的兴趣。