1.右江民族医学院重金属与氟砷毒物研究实验室 广西百色 533000;
2.右江民族医学院附属医院;3.广西南宁市中医院病理科
摘要 目的 探讨生何首乌与炮制后何首乌对小白鼠肝功能的影响。方法 用生何首鸟、制何首乌水提取液、制何首乌去单宁水提取液定量分别给小白鼠灌胃,连续三个月,另设一组为正常对照组。实验结束,取小白鼠血清测定ALT(谷-丙转氨酶)、总蛋白、尿素氮、总胆固醇(TC),取小白鼠肝脏作病理检查,对比分析。结果 生何首乌组、制何首乌组、制首乌去单宁组、正常组ALT各组依次分别为54.24±10.64、47.65±7.23、45.51±5.78、42.28±5.43(u/L),生何首乌组ALT明显高于正常组,▲P<0.05,差异有统计学意义;尿素氮各组依次分别为4.19±0.84、7.04±1.54、6.95±1.40、6.23±1.01(mmol/L),生何首乌组尿素氮明显低于各组,▲▲P<0.01,差异有统计学意义;TC各组依次分别为1.92±0.33、2.59±0.40、2.13±0.59、2.36±0.26(mmol/L),生何首乌组明显低于制何首乌组,△P<0.05,差异有统计学意义;肝脏病理检查与血清生化相符合。结论 生何首乌对肝脏功能有一定损害作用;炮制后的何首乌对肝脏的损害作用减弱,但降胆固醇作用不如生何首乌。
关键词:何首乌;肝脏病理;肝脏功能
【Abstract】Objective To investigate on the effect of crude and processed Polygoni Multiflori Radix on mice liver function Methods Intragastric administration of quantitative extracts of crude、processed and Tannin-removed Polygoni Multiflorum were provided to mice respectively for three consecutive months;and one Normal Control group was established.After finishing the experiment,the levels of serum ALT(Alanine aminotransferase)、total protein、urea nitrogen、total cholesterol(TC)were tested,and the livers of the mice were taken from each group for pathological examination.And finally make a comparative analysis on the results.Results The Serum ALT of crude Polygoni Multiflorum group,processed Polygoni Multiflorum group and Tannin-removed Polygoni Multiflorum group was 54.24±10.64、47.65±7.23、45.51±5.78、42.28±5.43(u/L)respectively.The Serum ALT of the group that ingested the crude Polygoni Multiflori Radix had significantly increased in comparison to the normal group,P< 0.05,and the differences were statistically significant;Serum urea nitrogen in each group was respectively 4.19±0.84、7.04±1.54、6.95±1.40、6.23±1.01(mmol/L).The Serum urea nitrogen in the crude Polygoni Multiflorum group showed a significant decrease in comparison to the other groups,P< 0.01,and the differences were statistically significant;Serum TC in each group was respectively 1.92±0.33、2.59±0.40、2.13±0.59、2.36±0.26(mmol/L).The crude Polygoni Multiflori Radix group showed a significant decrease than the processed groups,P< 0.05,and the differences were statistically significant.And the histopathological examination of the mice livers was in accord with serum biochemical indicators.Conclusion The crude Polygoni Multiflorum had a negative effect on mouse liver function.After being processed,the injury effect of Polygonummultiflorum on liver was weakened,but its function of lowering cholestetol was not good as crude Polygoni Multiflorum.
[Key words]:Polygoni Multiflori Radix;histopathological examination;liver function;
何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multilorum Thunb.的干燥块根,生品性平,味苦,微甘,生津润燥,解毒散结;炮制品性变温,味转甘,具有补肝肾、益精血之功效,因而生首乌与制首乌有一定区别,生首乌偏重活血,有一定毒性,制首乌偏重补血,无毒性,临床多采用制首乌入药。卵磷脂、二苯乙烯苷等是其有效成分。何首乌炮制方法中医多以加黑豆汁九蒸九晒为主,也有淸蒸、米泔豆共制、酒制、蒸气高压等,通过炮制,生首乌成分发生变化,有效成分随即降低,毒性也减小,功效也发生改变,随着炮制时间越长,有效成分减小越多(1),因而需控制适当时间,以保存有效成分含量。近年来文献时有报导临床使用何首乌发生患者肝功损害情况(2)。为此,本实验用生首乌与制首乌水提取液给小鼠灌胃三个月,测定血清转氨酶活性和肝细胞形态变化,作对比分析。现将结果报道如下。
1.试剂与方法
1.1丙氨酸氨基转栘酶(ALT)试剂盒、血清总蛋白、尿素氮、总胆固醇试剂盒,购自南京建成生物工程研究所。
1.2中药 生何首乌,购自百色市正阳药店;制首乌,生何首乌水浸润后,用蒸气高压法(3),120℃,4h,即成制首乌;生首乌和制首乌提取液制备,称取生首乌和制首乌,分别放容器内加水加热提取60分钟,药液加热浓缩后,95%乙醇沉淀,过滤,回收乙醇,得药液,定容为0.5g/ml;取一半制首乌水提取液,加5%明胶水溶液适量,搅拌吸附单宁沉淀,过滤除去单宁沉淀,再加乙醇沉淀过量的明胶,过滤,回收乙醇,药液加热浓缩,定容为0.5g/ml,即得制首乌去单宁液。
1.3实验动物 48只小鼠,昆明种,雌雄各半,体重50±2 g/只,右江民族医学院动物室提供,动物实验许可证SYXK桂2011-0010,动物生产许可证号:SCXK桂2012—0003.
1.4 动物实验 48只小鼠,分成四组,每组12只,分笼喂养。首乌剂量按成人50公斤体重每天15g计算,体重折算后,再乘10倍量,给小鼠灌胃,每天一次。连续3个月。分生首乌组、制首乌组、制首乌去单宁组、正常组。实验结束,取眼球后静脉血,分离血清测定生化指标。处死小鼠,取肝脏用10%甲醛浸泡,作病理检查。
2.结果
2.1各组小鼠血清ALT(谷-丙转氨酶)、总蛋白、尿素氮、总胆固醇(TC)测定结果。结果显示,生首乌组血清ALT明显高于正常组,▲ P<0.05,差异有统计学意义,制首乌组、去单宁组,处于两组之间;生首乌组尿素氮明显低于其他三组,▲▲P<0.01,差异有统计学意义;生首乌组TC明显低于制首乌组,△P<0.05,差异有统计学意义,其正常组、去单宁组处于两组之间;总蛋白各组间差异无统计学意义。见表1。
方差分析:组间比较,ALT,与正常组比较,▲P<0.05,差异有统计学意义;总蛋白,各组比较,P>0.05,差异无统计学意义;尿素氮,与生首乌组比较,▲▲P<0.01,差异有统计学意义;TC,与生首乌组比较,△P<0.05,差异有统计学意义。
2.2各组小鼠肝细胞病理检查结果。结果显示,
2.2.1生首乌组。镜下可见较多点状坏死及桥接状坏死,局部肝细胞可见溶解,部分汇管区增大,纤维组织增生明显。(见图一)
2.2.2制首乌组 镜下肝组织部分细胞水肿变性,有轻度点状坏死,纤维组织轻度增生,部分汇管区稍增大。(见图二)
2.2.3制首乌去单宁组 镜下肝组织结构尚好,小灶肝细胞水肿变性,部分汇管区稍增大。(见图三)
2.2.4正常组 镜下可见肝组织结构尚好,小灶肝组织轻度水肿,少量纤维轻度增生,灶状汇管区稍增大。(见图四)
3讨论
生首乌与制首乌有一定区别,生首乌偏重活血,有一定毒性,制首乌偏重补血,无毒性,临床多采用制首乌入药[4]。炮制品性变温,味转甘,具有补肝肾、益精血之功效。其机理目前多数认为炮制过程在高温作用下,生首乌的一些化学成分发生变化,如结合型蒽醌分解转变为游离型,有效成分二苯乙烯苷降低[3],其药理作用也会发生一定变化,毒性也会逐渐减弱或消失,从而转变成制首乌。但这种转变,与温度的高低和炮制时间有关,如果提高温度会加快转变甚至可缩短炮制时间,但在相同的蒸制温度下,缩短炮制时间则会达不到如期的效果,甚至会出现毒性,如肝脏损伤,临床上有报道使用首乌制品出现肝功能障碍[5],转氨酶升高,原因可能与此有关。
本次实验结果表明,生首乌实验组,肝细胞损伤最重,血清谷-丙转氨酶最高[6];制首乌实验组次之;而正常组最轻最低,说明首乌经炮制后毒性降低。但尚未到达正常组水平,可能是炮制时间不够有关。血清总蛋白各组间差异无统计学意义,可能肝细胞损伤并不很严重,对清蛋白合成影晌不大(清蛋白是血清总蛋白中的主要成分),因而血清总蛋白不是测定的敏感指标。而生首乌组的血清总胆固醇(TC)和尿素氮明显低于其他各组,说明生首乌对肾脏无损伤(补肾),并有降低血清总胆固醇的作用,当肝细胞损伤严重时也可引起的尿素合成降低(造成尿素氮降低)和总胆固醇合成降低(血清胆固醇主要来源于肝脏合成),但血清总蛋白各组间无差异显示肝细胞损伤并非严重,可以排除肝损伤引起。首乌含大量的单宁,单宁具有许多药理功能,是否是首乌致肝损伤的原因之一,本次设一组去除单宁的制首乌组,而结果与制首乌接近[7],不能说明。
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作者简介:凌霄雁,女,1991年生,2010年临床医学本科毕业,右江民族医学院附属医院住院医生;韦爱伯,通讯作者.右江民族医学院附属医院住院医生。
论文作者:凌霄雁2,李峰先3,邓晓珍1,刘燕2,韦爱伯2(通讯
论文发表刊物:
论文发表时间:2016/6/1