朱德杰
（河南省周口市食品药品检验所 河南 周口 466000）
【摘要】 目的：建立热敷散中几种药材的薄层色谱（TLC）鉴别方法。方法：采用薄层色谱方法，对威灵仙、红花、当归、泽兰进行了薄层色谱定性鉴别。结果：用薄层色谱鉴别，斑点清晰，分离度好，阴性对照实验无干扰。结论：该方法简单易行、专属性强，重复性好，结果准确，可作为热敷散的质量控制方法。
【关键词】 热敷散薄层色谱法鉴别
【中图分类号】R3 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）20-0311-02
The Identification of Refusan by Thin Layer Chromatography Zhu Dejie.
Zhoukou Institute for Food and Drug Control, Henan,Zhoukou 466000
【Abstract】Objective Todevelop a method for the Identification of Refusan by TLC.Methods The method of TLC was used to makequalitative identification for Radix Clematidis, Safflower Carthamus, Angelica sinensis, Chinese angelica, herbalycopi, Results TLC spots were clear, with good separating degree, negative control experiment without interference.Conclution The method is simple,accurade and can be used for quality control of Refusan.
【Key words】Refusan; TLC; Thin Layer Chromatography
热敷散是由透骨草、威灵仙、红花、当归、泽兰、乳香、没药、等药材加工制成的中药制剂，具有温经通络，舒筋活血，祛风寒，除湿痹之功效，用于治疗关节炎、骨质增生及骨折后引起的关节疼痛，麻木活动不利或强直患者[1-2]。该制剂临床效果显著，治愈率高，广泛应用于临床，为了有效控制该制剂的质量，我们采用了薄层色谱法对热敷散中威灵仙、红花、当归、泽兰进行了薄层色谱定性鉴别方法进行了研究。
1.样品与试剂
热敷散由某医院提供。
KQ5200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；ZF-1型三用紫外分析仪（江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；齐墩果酸对照品（批号：110709-200505 中国药品生物制品检定所）；红花对照药材（批号120907-200609 中国药品生物制品鉴定所）；阿魏酸对照品（批号：110773-200611 中国药品生物制品检定所）；硅胶G薄层板，规格100×200mm，厚度0.20～0.25mm，硅胶H薄层板规格100×200mm，厚度0.20～0.25mm（青岛海洋化工厂），化学试剂均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 威灵仙的薄层色谱鉴别
2.1.1样品溶液的制备
取热敷散粉末适量，加乙醇100ml，加热回流2小时，滤过，滤液浓缩至20ml，加盐酸3ml，加热回流1小时加水10ml，放冷，加石油醚（60～90℃）25ml振摇提取，石油醚蒸干，残渣用无水乙醇10ml使溶解，作为样品溶液。
2.1.2对照品溶液的制备
取齐墩果酸对照品10mg，置25ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并至刻度，制成每1ml约含0.45mg的溶液，作为对照品溶液。
2.1.3阴性对照溶液的制备
按照处方比例制备除去威灵仙药材的阴性对照散剂，作为阴性对照散剂，取阴性对照散剂适量、加乙醇100ml，加热回流2小时，滤过，滤液浓缩至20ml，加盐酸3ml，加热回流1小时加水10ml，放冷，加石油醚（60～90℃）25ml振摇提取，石油醚蒸干，残渣用无水乙醇10ml使溶解，作为阴性对照溶液。
2.1.4方法
照薄层色谱法[1]实验，吸取上述三种溶液各5ul，分别在同一个硅胶G层薄板的不同位置点滴，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20：3：0.2）为展开剂，然后将薄层板放置于展开缸中，进行30分钟的预饱和，然后展开，取出，晾干，然后喷10%的硫酸乙醇溶液，进行105℃加热直至斑点清晰显色。样品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照溶液色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，无斑点出现。见图1：
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图1 1 热敷散 2齐墩果酸对照品 3阴性对照粉末
2.2 红花的薄层色谱鉴别
2.2.1样品溶液的制备
取本品适量，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振摇15分钟，静置，吸取上清液，作为样品溶液。
2.2.2对照药材溶液的制备
取红花对照药材0.5g，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振摇15分钟，静置，吸取上清液，作为红花对照药材品溶液。
2.2.3阴性对照溶液的制备
按照处方比例制备除去红花药材的阴性对照散剂，作为阴性对照散剂，取阴性对照制剂适量，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振摇15分钟，静置，吸取上清液，作为阴性对照溶液。
2.2.4方法
照薄层色谱法[1]实验吸取上述三种溶液各5ul，分别在同一个硅胶H层薄板的不同位置点滴，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7：2：3：0.4）为展开剂，充分展开后，取出薄板进行晾干。观察样品色谱，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照溶液，在与对照品药材溶液色谱相应的位置上，无斑点出现。见图2：
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图2 1 阴性对照 2红花对照药材 3热敷散
2.3 当归的薄层色谱鉴别
2.3.1样品溶液的制备
取本品适量，放入50 毫升1%的碳酸氢钠溶液中，然后采用超声处理，持续处理10分钟后对溶液进行离心，离心完成后留取上层清液，进行稀盐酸点滴，使清液pH值达到2～3，然后采用乙醚振摇提取2次，每次20ml，乙醚液挥干后取残渣，使用甲醇1ml溶解残渣，溶液留作样品。
2.3.2对照品溶液的制备
取阿魏酸对照品10mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成对照品溶液，浓度为1mg/ml。
2.3.3阴性对照溶液的制备
按照处方比例制备除去当归药材的阴性对照散剂，作为阴性对照散剂，取阴性对照制剂适量，加1%碳酸氢钠溶液50ml，超声处理10分钟，离心，取上清液用稀盐酸调节pH值至2～3，用乙醚振摇提取2次，每次20ml，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为阴性对照溶液。
2.3.4方法
照薄层色谱法[3]实验，试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4：1：1：0.1）为展开剂，展开，取出晾干，置紫外灯下检视（紫外光波长365nm）。观察样品溶液色谱，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照溶液，在与对照品药材溶液色谱相应的位置上，无斑点出现。
见图3.
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图3 1 溶栓通脉胶囊 2阿魏酸对照品 3阴性对照粉末
2.4泽兰的薄层色谱鉴别
2.4.1样品溶液的制备 取样品适量，加丙酮30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚（30～63℃）10ml，浸泡约2分钟，倾去石油醚液，蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为样品溶液。
2.4.2对照品溶液的制备
称取熊果酸对照品10mg，加无水乙醇溶解制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
2.4.3阴性对照溶液的制备
按照处方比例制备除去泽兰药材的阴性对照散剂，作为阴性对照散剂，取阴性对照制剂适量，加丙酮30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加石油醚（30～63℃）10ml，浸泡约2分钟，倾去石油醚液，蒸干，残渣加无水乙醇2ml使溶解，作为阴性对照溶液。
2.4.4方法
照薄层色谱法[1]实验，试验，吸取上述三种溶液各4ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环乙烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（20：5：8：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。样品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照溶液，在与对照品溶液色谱相应的位置上无斑点出现。见图4
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图4 1阴性对照 2熊果酸对照品 3热敷散
3.讨论
3.1 热敷散成分复杂，为了严格控制制剂质量，保证药品的安全有效，增加了威灵仙、红花、当归、泽兰的鉴别试验。本文采用薄层色谱鉴定，结果显示薄层色谱，斑点清晰，分离度好，且阴性对照实验显示其他成分对本试验无干扰，表明本方法专属性强，简单易行，分离度好，结果准确，可作为热敷散中的薄层色谱定性鉴别，适合于热敷散的质量控制。
3.2 对于当归薄层鉴别样品处理时，采用过回流提取10分钟，结果表明，回流10分钟与超声10分钟没有差别，所以选择了超声提取，方法简单易行。在萃取过程中本实验曾采用乙酸乙酯，与用乙醚萃取进行了比较，结果表明，乙酸乙酯没有使用乙醚时分层效果好，所以方法采用了乙醚为萃取溶剂。在展开剂的选择上，避免了使用毒性和污染比较大的苯和丙酮等溶剂，减小了对实验者的毒性和对环境的污染。
【参考文献】
[1]Ning,Zhang,Ying,Hua,Cuiling,Wang,Yanni,Sun,Zheng,Wang,Zhulan,Liu,Jianli,Liu.Distribution study of tryptanthrin in rat tissues by HPLC and its relationship with meridian tropism of indigo naturalis in traditional Chinese medicine. Biomedical chromatography:BMC,2014，28（12）：56-60.
[2]Yin-Ku,Lin,Hsiao-Wen,Chen,Yann-Lii,Leu,Yueh-Lung, Yang,Yu,Fang,Jong-Hwei,Su Pang,Tsong-Long,Hwang.Indigo naturalis upregulates claudin-1 expression in human keratinocytes and psoriatic lesions.Journal of ethnopharmacology,2013，145（2）:110-113.
[3]中国药典〔S〕2015年版，四部，57页.
论文作者:朱德杰
论文发表刊物:《医药前沿》2016年7月第20期
论文发表时间:2016/7/29
标签：溶液论文; 阴性论文; 薄层论文; 色谱论文; 乙酸乙酯论文; 药材论文; 样品论文; 《医药前沿》2016年7月第20期论文;