沈甍
（四川省成都市第七人民医院病理科 610000）
【摘要】目的 分析SNIP中PCNA与Bcl-2的表达与意义。方法 对所有蜡块进行切片处理，切片的厚度为5μm，同时使用PV法进行化学染色。结果 所有切片均存在Bcl-2及PCNA阳性表达，阳性Bcl-2表达主要集中于细胞膜及细胞浆，而阳性PCNA表达则集中于细胞核当中。结论 细胞增殖与凋亡抑制过程同时存在于SNIP发展及恶化进程中，凋亡抑制过程与增殖过程相互促进，增殖加速时，凋亡也在加快。
【关键词】增殖细胞核抗原 鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤 Bcl-2
【中图分类号】R739.62 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）05-0015-02
Inverted papilloma of the nasal sinuses through sex and pcna in the Bcl - 2 expression and significance of the analysis
Department of pathology, the first people's hospital of shen south 7 610000 chengdu city, sichuan province
【Abstract】 objective to analyze the expression of PCNA and Bcl - 2 \"with meaning. Carried out on all the wax block slice processing, the thickness of the slice is 5 microns, while using PV method for chemical staining. Results all exist the Bcl - 2 slices and PCNA positive expression, positive Bcl - 2 expression mainly focused on the cell membrane and cytoplasm, and positive expression of PCNA is concentrated in the nucleus. Conclusions cell proliferation and apoptosis inhibition process exists in \"at the same time in the process of development and progression, apoptosis and proliferation inhibition process promote each other, accelerated proliferation apoptosis is accelerated.
【key words】 pcna Inverted papilloma of the nasal sinuses double sex The Bcl - 2
鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤（SNIP）为一种临床常见的上皮良性肿瘤，SNIP虽然属于良性肿瘤，但极容易发生恶变，因此也被认为是良性真性肿瘤。为了有效治疗SNIP患者，则在临床中应正确认识SNIP的恶变机制[1]。细胞增殖、细胞凋亡失衡是导致恶性肿瘤发生的主要原因，增殖细胞核抗原（PCNA）是细胞完成DNA复制时不可缺少的蛋白，B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）是抑制细胞不断凋亡的主要原因。对此，本文分析了SNIP中Bcl-2与PCNA的表达与意义，报告如下。
1.资料与方法
1.1一般资料
选择2010年3月至2014年1月我院经病理确诊SNIP的存档蜡块进行分析，SNIP蜡块来源于45例患者，其中男28例，女17例，年龄在24岁至83岁之间，平均为（52.9±1.8）岁。所有患者均无SNIP复发史，10例行鼻侧切开手术，23例行扩大根治手术，其余22例行新生物摘除手术。患者的发病部位包括鼻中隔、筛窦、上颌窦及鼻腔；临床症状为鼻衄、流涕、鼻痒及鼻阻等，部分患者伴有嗅觉减退及头晕症状。另选择同期确诊为鼻息肉的存档蜡块进行对比分析，鼻息肉蜡块来源于45例患者，其中男23例，女22例，年龄在16岁至86岁之间，平均（49.7±2.4）岁，45例鼻息肉患者均无复发史。
1.2方法
本研究所采用的试剂如下：Bcl-2及PCNA鼠抗人单克隆体均为美国sigma公司生产，二氨基联苯氨（DAB）显色盒、Envision工作液及过氧化物酶（HRP）保护剂来自于美国Zymed公司。对所有蜡块进行切片处理，切片的厚度为5μm，同时使用PV法进行化学染色。完成切片及染色后按照以下方法对PCNA及Bcl-2表达率进行检测：首先，对切片进行脱蜡处理并加入蒸馏水。第二，利用浓度为4%的HRP保护剂处理内源酶，待20min后对切片进行冲洗。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆第三，在PH为5.5的抗原修护液中置入切片，并同时采用微波炉加热修护液及切片，加热时间控制在15min左右，加热温度为95℃～100℃。完成加热后，应静置30min以上才能再次冲洗切片。第四，加入一抗，并将切片置入冰箱孵育12h左右。第五，从冰箱内取出切片并进行冲洗，冲洗后滴加Envision工作液并在温箱内孵育1h左右，随后取出冲洗及置入DAB显色盒，显色后及时进行脱水、透明及封片处理，并同时利用显微镜对试验结果进行观察。
1.3结果判定
阳性对照为鼻咽癌患者的阳性切片，阴性对照为PBS缓冲液。如细胞核膜、细胞浆出现褐黄色及棕黄色颗粒，则Bcl-2及PCNA标记为阳性，同时将阳性Bcl-2细胞数的百分比记录下来，细胞计数＞1000。
1.4统计学方法
将相关数据记录下来之后利用统计软件SPSS19.进行分析，计量资料组间差异检验为t检验，如P<0.05，则说明两组数据存在统计学意义上的显著性差异。
2.结果
对鼻息肉患者病理切片及SNIP切片进行观察后发现，所有切片均存在Bcl-2及PCNA阳性表达，阳性Bcl-2表达主要集中于细胞膜及细胞浆，而阳性PCNA表达则集中于细胞核当中。鼻息肉病理标本的阳性Bcl-2在上皮表层的表达活性较强，而SNIP的中层及表层均存在活性较强的阳性Bcl-2表达。鼻息肉标本中表达活性较强的阳性PCNA主要位于基底层，而SNIP标本则集中于中层及基底层，且SNIP标本的Bcl-2及PCNA呈正相关关系。此外，SNIP标本与鼻息肉标本中的Bcl-2、PCNA阳性表达率均存在显著性差异（P<0.05），SNIP标本的阳性表达率高于鼻息肉标本，两种标本的表达率见表1。
表1.SNIP标本与鼻息肉标本中的Bcl-2、PCNA表达率分析（%）
标本类型 n Bcl-2表达率 PCNA表达率
鼻息肉标本 45 7.65±4.67 12.43±2.96
SNIP标本 45 15.13±6.34 25.94±5.12
3.讨论
Bcl-2及PCNA是细胞当中的DNA实现复制的两种重要因子，目前已经有许多研究证实SNIP恶变、复发及侵袭的出现均与Bcl-2及PCNA表达率存在一定的关系，因此对Bcl-2及PCNA表达率进行分析有利于提高SNIP预后及病变增殖评估的有效性。
本研究分析了45例SNIP及鼻息肉病理切片，结果发现SNIP切片标本的Bcl-2表达率与鼻息肉标本存在显著性差异（P<0.05），且SNIP中的表达率较高。因此可以认为Bcl-2表达活性过强与SNIP的出现及增殖均存在相关关系。由于上皮细胞表层当中的Bcl-2具有较强的表达活性，所以表层细胞的凋亡抑制较为明显。如上皮细胞处于正常状态，则Bcl-2的表达活性具有非常明显的选择性，这样的形式有利于延长体外上皮细胞生存的时间；但从另一方面来看，Bcl-2的选择性表达也可能会导致细胞癌变概率变大。当出现某种诱导因素时，上皮细胞就容易发生恶变，同时恶变细胞的寿命会在Bcl-2的阻断及抑制作用下得以延长，进而引起肿瘤，因此在SNIP的恶化阶段，Bcl-2起到了加速作用。有研究指出，如Bcl-2的表达活性较强，则SNIP患者病情恶变的可能性较大，这一点与本研究得出的结论相一致[2]。
在SNIP病理切片的PCNA与Bcl-2相关关系方面，本研究发现两者呈相关关系，当Bcl-2表达活性不断增强时，PCNA表达也会随之增强。如Bcl-2表达活性过强，则会对p53介导产生抑制作用，因此细胞的程序化死亡过程就会被减慢，肿瘤细胞生存的时间也因此得以延长[4]。目前也有相关研究指出p53基因能够对PCNA mRNA不断增殖的过程产生选择性的抑制作用，因此当p53基因受到抑制时，PCNA mRNA增殖的过程就会加快，所以PCNA表达活性也会由此升高[5]。通过上述分析可知，Bcl-2及PCNA表达在SNIP向恶性转化的整个进程中均表现为逐渐递增的趋势，所以细胞的凋亡抑制过程及过度增殖过程均能够起到恶化SNIP病情的作用，如发现临床症状加重，则可以对Bcl-2及PCNA表达进行检测，以便可以了解疾病的发展进程，并由此对SNIP的生物及化学行为进行预测，从而做到尽早诊断及治疗。此外，本研究所得出的结论与国外部分学者所作的报告存在不同之处。如Guichard等人认为在正常情况下，内翻性乳头状瘤伴恶变组织当中的Bcl-2基因主要为阴性，Bcl-2基因表达活性的增强并不是引起SNIP的主要原因，且SNIP发生恶变是由细胞增殖所引起的，与Bcl-2及PCNA的关系并不大。因此，Bcl-2及PCNA的表达在SNIP发生恶变中的作用还要做进一步的探讨。
参考文献
[1] 王海瑞,刘伟杰,赵俊亭,许波.鼻内镜手术、鼻内镜联合柯-陆氏进路和鼻侧切术治疗鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤的疗效对比观察[J].中国医药指南,2013,11(27):313-314.
[2] 孙璞,张燚,马瑞霞,陈群,陈晓平,裴斐,伍立德,卿志荣.鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤临床分期与人乳头状瘤病毒感染的关系[J].中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志,2011,19(2):125-127.
[3] 杨军,宋福存,周志远,柴晓文.转化生长因子-β1和血管内皮生长因子在鼻腔鼻窦内翻转乳头状瘤组织中的表达[J].中国基层医药,2012,19(7):987-988.
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论文作者:沈甍
论文发表刊物:《医药前沿》2014年第5期供稿
论文发表时间:2014-5-5
标签：切片论文; 阳性论文; 标本论文; 细胞论文; 鼻腔论文; 鼻窦论文; 活性论文; 《医药前沿》2014年第5期供稿论文;