关键词：黄皮叶；新肉桂酰胺B；含量测定；
黄皮(Clausenalansium Lour Skeels)，又叫黄皮子、黄批、黄弹、黄檀子、黄弹子、黄坛子等，为芸香科黄皮(Clausern)植物属植物，原产于我国，是我国热带和亚热带地区的一种特种果树，为芸香科多年生常绿小乔木，主要分布在南亚热带地区，其栽培历史较长，到目前已有1500年之久[1]。目前种植区域主要分布于我国广西、广东、云南、海南、福建、中国台湾等地，以及越南、印度、斯里兰卡、泰国、马来西亚等东南亚国家及美国的部分地区均有栽种。黄皮的药用价值较高，其果、叶、根及种子均可入药，其果实有消食、化痰、行气的功效，能治疗脘腹疼痛、食积胀满、痰饮、咳喘等病症，其根、叶和种子也具有治疗胃痛、腹痛、感冒发热等功效[2-3]。目前，学者对黄皮的化学成分较多且主要集中在黄皮的果肉、叶和根茎上，已研究报道的化学成分主要有香豆素、挥发油、黄酮类、氨基酸及萜类等。目前,对黄皮叶黄皮新肉桂酰胺B研究鲜见文献报道。本文建立了黄皮叶黄皮新肉桂酰胺B含量测定方法,并采用FRAP法测定其抗炎活性,为建立黄皮叶质量控制标准及进一步开发成天然抗炎药提供理论依据。
1山黄皮和黄皮新肉桂酰胺B提取方法
1仪器与材料
DK-9-E电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）；DJ202A万分之一电子天平（常熟市清华电子有限公司）；UV-1102n紫外分光光度计（天美科学仪器有限公司）；LD4-2A型台式低速离心机(北京京立离心机有限公司）。芦丁对照品（中国药品生物制品检定研究院，批号:0809002)；2,4,6-三吡啶基三嗪（上海麦克林生化科技有限公司）；其余试剂均购于天津市致远化学试剂有限公司，均为分析纯化试剂。黄皮叶样品采自广西省各地,均经长沙医学院中药教研室鉴定为Clausena lansium Lour Skeels的干燥叶。
2方法与结果
2.1黄皮新肉桂酰胺B的测定
2.1.1对照品溶液的制备精密称取在120°C干燥至恒定质量的芦丁对照品25mg,置50mL量瓶中，加体积分数95%乙醇适量，超声处理5min使溶解,放冷,加乙醇至刻度,摇匀。精密量取20mL,置50mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，95%乙醇回流提取三次，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，经乙酸乙酯部位经过硅胶柱色谱以氯仿-甲醇梯度，形成九个分流，层析分离纯化即得黄皮新肉桂酰胺B。
2.1.2供试品溶液的制备 取黄皮叶干燥粉末（过二号筛）1.0g,精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入70%(体积分数，下同）乙醇50mL,称定质量，加热回流2.5h,放冷，再称定质量，用70%乙醇补足质量,3000r/min离心6min,取上清液，即得。
2.1.3测定方法 精密量取供试品溶液1mL,置25mL量瓶中，加水至6mL,加5%NaNO2溶液1mL,摇匀,放置6min,加10%Al(NO3)3?9H2O溶液1mL,摇匀，放置6min,加NaOH试液10mL,加水至刻度,摇匀,放置15min。以相应的试剂为空白，立即在503nm处测定吸光度。
2.1.4方法学考察
2.1.4.1检测波长的选择精密量取芦丁对照品溶液1mL,按“2.1.3”项下方法显色，同法制备空白对照溶液，用紫外分光光度计在400~600nm范围内扫描吸收曲线，确定最大吸收波长为503nm。见图1
2.1.4.2线性关系考察精密量取芦丁对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0mL,按“2.1.3”项下方法测定吸光度，以吸光度为纵坐标,芦丁质量浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=0.0114x-0.0183,=0.9995,表明芦丁质量浓度在8~64网/mL范围内与吸光度线性关系良好,符合定量分析要求。
2.1.4.3精密度试验取样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.1.3”项下方法测定吸光度,重复6次,计算RSD值,结果测得吸光度RSD值为0.15%,表明仪器精密度良好。
2.1.4.4重复性试验样品6份,分别按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.3”项下方法测定吸光度,计算黄皮新肉桂酰胺B质量分数和RSD值，结果测得样品黄皮新肉桂酰胺B平均质量分数为2.65%,RSD为1.8%,表明方法重复性良好。
2.1.4.5稳定性试验取样品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,按“2.1.3”项下方法分别在0、2、4、6、8、12、24h测定吸光度,计算RSD值,结果测得吸光度RSD值为0.61%,表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.1.4.6加样回收率试验取已知黄皮新肉桂酰胺B质量分数为2.61%的样品粉末约0.5g,精密称定,加入一定量的芦丁对照品，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.3”项下方法测定吸光度,计算RSD值,结果测得平均回收率为99.9%,RSD值为1.9%,表明方法准确度良好,结果见表1。
3讨论
目前对于山黄皮、黄皮的新肉桂酰胺B提取的研究较少，也是今后研究的方向之一。此外，有研究表明[4-6]，黄皮叶是芸香科植物黄皮属的干燥叶，为特色药用植物，《岭南采药录》中记载黄皮叶具有“疏风解表、除痰行气、治温病身热，咳嗽哮喘、气胀腹痛，黄肿，疟疾，小便不利，热毒疥癞的作用”。另外还具有抗肿瘤活性、抗心血管疾病、免疫调节、抗辐射、食物保鲜等功能[7-8]。在民间广泛用于治上感、痰咳哮喘以及相关疾病，但是目前学者对于山黄皮和新肉桂酰胺B提取物的生物活性研究主要集中在其清除自由基和抗氧化活性上，其他的活性研究目前较少，因此，对黄皮和山黄皮生物新肉桂酰胺B活性的研究具有重要的意义。
参考文献：
[1]刘永,罗琰.黄皮果皮多糖的提取与抗氧化活性[J].中国食品添加剂,2019,30(08):56-60.
[2]赵志常,高爱平,黄建峰,罗睿雄.黄皮叶绿体基因组测序与分析[J].安徽农业科学,2019,47(11):115-118.
[3]熊姿. 黄皮新酰胺杀菌作用研究[D].西北农林科技大学,2019.
[4]连增维. Lansiumamide B及其衍生物的合成与抑菌活性[D].福建农林大学,2016.
[5]Takuya Matsui,Chihiro Ito,Hiroshi Furukawa,Tadashi Okada,Masataka Itoigawa. Lansiumamide B and SB-204900 isolated from Clausena lansium inhibit histamine and TNF-α release from RBL-2H3 cells[J]. Inflammation Research,2013,62(3).
[6]陈燕媚,黄锁义.黄皮叶总黄酮的提取及鉴别[J].中国野生植物资源,2018,37(06):16-18.
[7].Preparation, Characterization and Nematicidal Activity of Lansiumamide B Nano-Capsules[J].Journal of Integrative Agriculture,2012,11(07):1151-1158.
[8]Yun Han,Li-chun Li,Wen-bo Hao,Ming Tang,Shu-qing Wan. Larvicidal activity of lansiumamide B from the seeds of Clausena lansium against Aedes albopictus (Diptera: Culicidae)[J]. Parasitology Research,2013,112(2).
论文作者:杨华,陈小华 童国相 罗婷 黄巍
论文发表刊物:《中国医学人文》2019年12期
论文发表时间:2020/1/2
标签：肉桂论文; 光度论文; 酰胺论文; 溶液论文; 芦丁论文; 精密论文; 质量论文; 《中国医学人文》2019年12期论文;