鲁峰[1]2000年在《Fas介导的病理性瘢痕成纤维细胞死亡信号传递及基因调控的实验研究》文中提出背景及目的：我们先前的实验发现：FasMcAb不能诱导瘢痕疙瘩 Fas受体高表达的成纤维细胞的正常凋亡，同时其胞内外源性抑制蛋 白Bc1-2表达阳性率亦较低，提示：瘢痕疙瘩成纤维细胞Fas介导的 死亡信号通道阻断。为明确瘢痕疙瘩成纤维细胞Fas介导的死亡信号 通道阻断的原因及具体阻断位点，我们对Fas介导的病理性瘢痕成纤 维细胞死亡信号通路进行了研究，旨在探索导致瘢痕疙瘩成纤维细胞 凋亡异常的根本原因。 方法及内容：采用组织培养技术，以手术切除的瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤为组织来源的体外培养的成纤维细胞为研究对象；1.应用粘附式细胞仪检测及比较各种来源的细胞缝隙连接介导的细胞间通讯。2.以FasMcab为处理因素，探讨Ca~(2+)、H~+、LPO（氢过氧化物）在其相应死亡信号通道中的作用。检测和比较FasMcab作用后增生性瘢痕和瘢痕疙瘩成纤维细胞内神经酰胺的变化。3.银染PCR-SSCP筛选Fas基因的突变，最后可疑阳性的PCR样本进行DNA测序。。 结果：1.正常皮肤成纤维细胞的细胞间通讯正常，增生性瘢痕成纤维细胞的细胞间通讯受到抑制，瘢痕疙瘩成纤维细胞的细胞间通讯被阻断。2.在FasMcab作用下，增生性瘢痕成纤维细胞内Ca~(2+)、LPO、神经酰胺显著增高而瘢痕疙瘩成纤维细胞内Ca~(2+)、LPO、神经酰胺无变化；在FasMcab作用下，增生性瘢痕、瘢痕疙瘩成纤维细胞内H~+均下降，两组间无显著的差异。3.经PCR-SSCP检测，20％（2/10）的瘢痕疙瘩组织中发现异常电泳带，提示可能存在Fas基因突变。经DNA测序证实这两例突变均为位于Fas cDNA的755bp处的“A”缺失而导致的移码突变。 结论：1.细胞间通讯被证明与细胞生长的接触抑制及细胞的浸润性 生长密切相关，通过本实验揭示细胞间通讯被阻断可能是痰痕疙瘩呈” 蟹足样”浸润性生长的细胞生物学机制。2＊as介导凋亡的异常可能是瘤 痕疙瘩成纤维细胞增殖－凋亡调控异常的细胞生物学机制。在FasM0山 。作用下，胞内 Ca2＋、LPO产生的障碍可能直接导致痰痕疙瘩的凋亡异常。 3．作为Fas介导的死亡信号通道中的第二信使，瘤痕疙瘩成纤维细胞内 神经酚胺产生有缺陷。因此，Fas介导的癫痕疙瘩成纤维细胞死亡信号 传导阻滞是“上游”事件。＃．．编码ras分子死亡域结构基因的移码突变 可能导致Fas受体功能丧失，从而导致成纤维细胞的凋亡异常
鲁峰, 高建华, 黎小间[2]2000年在《病理性瘢痕成纤维细胞的增殖调控及Fas基因突变的筛选》文中认为目的 从细胞生物学及基因水平探讨正常皮肤、增生性瘢痕、瘢痕疙瘩周边部和中央部不同生长特性及瘢痕疙瘩发生的可能机制。方法 (1)取手术切除的正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织各 6例为标本 ,通过细胞培养 6～ 10代后 ,应用流式细胞仪、粘附式细胞仪检测不同来源的成纤维细胞p5 3蛋白的表达和细胞周期的分布。 (2 )取瘢痕疙瘩、增生性瘢痕患者的组织及外周血标本 ,聚合酶链式反应 (PCR)特异性扩增Fas分子外显子 9的编码区 ,扩增产物经银染SSCP(单链构象多态性检测 )筛选 ,最后可疑阳性的PCR样本进行DNA测序。结果 (1)正常皮肤成纤维细胞主要分布在静止期 (G0 、G1期 )且p5 3蛋白的表达最高 ;增生性瘢痕成纤维细胞p5 3蛋白的表达最低 ,大量细胞处于增殖状态 (G2 期、S期和M期 ) ;瘢痕疙瘩周边部较中央部 ,成纤维细胞大量分布于增殖期 ,p5 3蛋白表达也较低 ;(2 )经PCR SSCP检测 ,2 0 % (2 / 10 )的瘢痕疙瘩组织中发现异常电泳带 ,经DNA测序证实这两例突变均为位于FascDNA的 75 5bp处的“A”缺失而导致的移码突变。结论 (1)成纤维细胞细胞周期的分布及p5 3蛋白表达的差异可能是导致正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中央部及周边部呈现不同生长特性的细胞生物学机理之一。 (2 )编码Fas分子死亡域
参考文献：
[1]. Fas介导的病理性瘢痕成纤维细胞死亡信号传递及基因调控的实验研究[D]. 鲁峰. 第一军医大学. 2000
[2]. 病理性瘢痕成纤维细胞的增殖调控及Fas基因突变的筛选[J]. 鲁峰, 高建华, 黎小间. 中华医学杂志. 2000