（武汉市汉口医院重症医学科 湖北 武汉 430012）
【摘要】 目的：探讨过敏性哮喘患者外周血白细胞介素-17(IL-17)和白细胞介素-23(IL-23)水平变化及其临床意义。方法：40例过敏性哮喘患者作为实验组，另选40例健康体检者为对照组。采用酶联免疫吸附（ELISA）实验检测患者外周血中及外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液中IL-17和IL-23的水平，并分析其于哮喘严重程度的相关性。结果：实验组患者血浆中和PBMC培养上清液中IL-17和IL-23水平均明显高于对照组（P<0.05）。随着哮喘严重程度增加，血浆中IL-17的水平逐渐增加，具有显著性差异（P<0.05）。实验组患者血浆中和PBMC培养上清液中IL-17与IL-23水平均呈现正相关性(r=0.527,0.426;P=0.004,0.019)。结论：过敏性哮喘患者外周血IL-17和IL-23水平明显上升，IL-17和IL-23可能影响哮喘的发展，IL-17水平或许可以用来辅助判断哮喘的严重程度。
【关键词】 过敏性哮喘；白介素-17；白介素-23；临床意义
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）33-0057-02
过敏性哮喘是一种由多种细胞和细胞因子介导的气道炎症性疾病，往往由尘螨、花粉、蟑螂等过敏原引发产生，严重影响人们的身体健康和日常工作。有文献报道[1]，辅助性T细胞（Th）17在过敏性哮喘的发生与发展中有至关重要的作用。Th17细胞分泌的IL-17、IL-22等细胞因子在炎症性疾病中有重要作用，IL-17有促进炎性反应的生物学功能，参与过敏性哮喘的发生[2]。IL-23是一个上游调控Th17的因子，其能够诱导Th17细胞分泌IL-17，从而参与过敏性哮喘的发生和发展。本研究探讨过敏性哮喘患者外周血IL-17和IL-23水平变化及其与哮喘严重程度的相关性，以期为临床上采用诊断IL-17等因子判断疾病严重程度提供一定的科学依据。
1.资料与方法
1.1 一般资料
选择2012年8月到2015年1月在我院就诊的40例过敏性哮喘患者作为实验组，其中男18例，女22例，平均年龄34.7±7.2岁。纳入标准：⑴症状符合中华医学会哮喘学组制定的《支气管哮喘防治指南》标准；⑵皮肤过敏原实验（尘螨、花粉、蟑螂等）阳性；⑶血清特异性IgE阳性。排除标准：⑴心、肝、肾功能不全者；⑵有心脏病及其他肺部疾病患者；⑶精神障碍者；⑷近期有呼吸道感染患者；⑸近期接收激素治疗患者。依照世界哮喘防治协会标准[3]，对40例哮喘患者进行严重程度分级，其中轻度哮喘患者12例，重度哮喘患者14例，重度哮喘患者14例。另外选择40例健康体检者作为对照组，其中男20例，女20例，平均年龄32.2±8.3岁，均无心脏病及其他肺部疾病、无近期有呼吸道感染、近期无接收激素治疗，均体检合格。两组患者年龄、性别等资料均无显著性差异（P>0.05），具有可比性。患者均知情同意，并经医院伦理会批准。
1.2 主要仪器和试剂
Lambda 25型紫外分光光度计，购自美国PE公司；TC2323型细胞培养箱，购自美国Oregon公司；XD-202型倒置显微镜，购自南京江南永新光学有限公司；TG16-WS型台式高速离心机，购自上海赵迪生物科技有限公司。
小牛血清，购自美国Sigma公司；人淋巴细胞分离液，购自挪威Oslo公司；IL-17与IL-23酶联免疫吸附（ELISA）检测试剂盒，购自美国RD公司。Hank液，由8g NaCl、0.4g KCl、0.06g Na2HPO4、0.06g KH2PO4和0.35g NaHCO3完全溶解于1000mL注射用水中配制而得。
1.3 PBMC的分离和培养
PBMC的分离：采集患者外周静脉血12mL于加入肝素的离心管中，加入等量Hank溶液，混匀。在15mL规格离心管中加入3mL人淋巴细胞分离液，后加入混匀的外周静脉血6mL，放入高速离心机，于2000r/min，离心25min。后吸取离心管中从上到下第二层液体于新置离心管中，加入等量Hank溶液混匀，于1000r/min，离心10min来洗涤细胞，洗涤两次，备用。
PBMC的培养：将分离的PBMC洗涤后加于含有10%小牛血清的RPMI 1640培养液中，适当调整细胞密度为1.5×106个/mL，悬浮培养。
1.4 检测指标
采用ELISA法检测两组患者血浆中和PBMC培养上清液中IL-17和IL-23水平，具体操作步骤严格按照实际和说明书，所有样本和标准品均设定复孔。IL-17的最低检测限为3.2pg/mL，IL-23的最低检测限为8pg/mL。
1.5 数据处理
使用SPSS19.0软件包处理数据，计量资料以均数±标准差（x-±s）表示，采用t检验；相关性分析采用非参数统计的Spearman检验，以P<0.05为有统计学意义。
2.结果
2.1 两组患者血浆中和PBMC培养上清液中IL-17和IL-23水平的比较
对照组血浆中IL-17含量低于最低检测限，故定义其水平为最低检测限的一半，即为1.6pg/mL。实验组患者血浆中和PBMC培养上清液中IL-17和IL-23水平均明显高于对照组，具有显著性差异（P<0.05）。见表1。
2.2 不同程度哮喘患者血浆中和PBMC培养上清液中IL-17和IL-23水平的比较
随着哮喘严重程度增加，血浆中IL-17的水平逐渐增加，具有显著性差异（P<0.05）；PBMC培养上清液中IL-17的水平在不同严重程度哮喘中无显著性差异（P>0.05）。不同程度哮喘患者血浆中和PBMC培养上清液中IL-23的水平无显著性差异（P>0.05）。见表2。
2.3 实验组患者血浆中和PBMC培养上清液中IL-17与IL-23水平的相关性分析
实验组患者血浆中和PBMC培养上清液中IL-17与IL-23水平均呈现正相关性，其r=0.527，P=0.004和r=0.426，P=0.019。
3.讨论
过敏性哮喘的发生和发展涉及到多种组织细胞及细胞因子的参与，其中Th1和Th2是医学界公认具有重要作用的细胞。随着对辅助性T细胞了解的深入，近年来研究发现Th17也在过敏性哮喘的发生发展过程中具有重要作用。Th17分泌的主要成分IL-17是一种促炎性细胞因子，能够刺激气道上皮细胞及炎症细胞来分泌炎性细胞因子和趋化因子，从而促进炎症部位聚集大量巨噬细胞和嗜中性粒细胞，引发炎症的发生。有文献报道[4]，IL-23能够介导Th17分泌IL-17，使IL-17保持高表达状态。因此，研究过敏性哮喘患者外周血IL-17和IL-23水平变化及其与哮喘严重程度的相关性具有重要的临床意义。
本研究结果显示，实验组患者血浆中和PBMC培养上清液中IL-17和IL-23水平均明显高于对照组，具有显著性差异（P<0.05）。进一步研究发现，随着哮喘严重程度增加，血浆中IL-17的水平逐渐增加，具有显著性差异（P<0.05）。提示IL-17可能参与了过敏性哮喘的发生和发展，血浆中的水平随着哮喘的加重上升，与哮喘的严重程度有一定相关性。这可能是由于IL-17刺激机体气道上皮细胞分泌IL-6、IL-8等炎性细胞因子或趋化因子，从而致使炎症部位聚集了大量的巨噬细胞和嗜中性粒细胞引发炎症。本研究结果显示，实验组患者血浆中和PBMC培养上清液中IL-17与IL-23水平均呈现正相关性，其r=0.527，P=0.004和r=0.426，P=0.019。提示IL-17与IL-23在过敏性哮喘的发病中有一定相关性，共同参与哮喘的发生发展。这可能是由于IL-23介导Th17细胞分泌IL-17，通过这个反应链来参与哮喘的发生发展。有文献报道[5]，IL-23能够诱导从过敏性哮喘小鼠身体局部采集的纵膈淋巴结细胞分泌IL-17，这正好与本研究结果相符。
综上所述，过敏性哮喘患者外周血IL-17和IL-23水平明显上升，IL-17和IL-23可能影响哮喘的发展，IL-17水平或许可以用来辅助判断哮喘的严重程度。
【参考文献】
[1] 申卫红，龚芳，朱岚等.过敏性哮喘患者外周血细胞因子水平变化及临床意义[J].重庆医学，2015,44(4):485-486.
[2] 陈玲，张丙宏.儿童支气管哮喘EOS、IL-17和IgE表达水平临床意义[J].临床肺科杂志，2015,(6):1067-1069.
[3] Cavkaytar O,Akdis CA,Akdis M.Modulation of immune responses by immunotherapy in allergic diseases [J].Curr Opin Pharmacol,2014,17(1):30-37.
[4] 李艳春，孙萌，赵丽娜等.白细胞介素23在哮喘小鼠动物模型中表达的研究[J].中国免疫学杂志,2012,28(4):357-361.
[5] 赵凯姝，张云峰，成焕吉等.白细胞介素-23、白细胞介素-17在支气管哮喘小鼠发病中的作用[J].实用儿科临床杂志，2010，25(9):639-642.
论文作者:王琼娅,马雁,李莞婷,徐莉
论文发表刊物:《医药前沿》2015年11月第33期
论文发表时间:2016/5/3
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