杨健[1]2006年在《绵羊精液稀释液添加PUFA对精子冷冻保护效果研究》文中研究指明本研究在总结前人的基础上,以葡3-3稀释液(葡萄糖-柠檬酸盐-卵黄)为基础,最新添加富含PUFA的深海鱼油和VE作为冷冻绵羊精液的新型添加剂,并通过检测一系列指标,进而研究PUFA对绵羊精子冷冻-解冻优良的保护作用,以及对绵羊冷冻精液受胎率的影响。主要是通过在多塞特绵羊精液冷冻稀释液中添加不同比例VE和多不饱和脂肪酸(PUFA),以及不同配比,经过冷冻-解冻过程后,测定解冻后活率和顶体完整率等常规指标,以及精清中钙离子浓度、钠离子浓度、氯离子浓度、LDH酶(乳酸脱氢酶)活力和GOT酶(谷-草转氨酶)活力等理化指标;同时经过筛选,确定5种配方并用透射电子显微镜检测其解冻后精子与鲜精超微结构的比较研究。研究结果表明:1.绵羊精液冷冻稀释液中添加1%VE(V/V),同时添加3%PUFA的处理组,经冷冻-解冻对精子的损害较小,解冻后各项指标均有所改善,活率和顶体完整率分别比对照组显著提高6%和10%(P<0.05),精清中LDH酶(乳酸脱氢酶)活力和GOT酶(谷-草转氨酶)活力比对照组显著降低65%和15%(P<0.05);2.本研究只添加PUFA处理组0.5%、1%、2%、3%、5%解冻后活率和顶体完整率显著高于对照组(P<0.05);同时,随添加PUFA浓度提高(0.5～3%),解冻后活率和顶体完整率有升高的趋势;但均相对低于稀释液中添加1%VE(V/V)组;3.绵羊精液冷冻稀释液中添加1%V(EV/V),同时在两步法稀释时均添加3%PUFA处理组,解冻后活率(0.345)和顶体完整率(0.396)显著高于其他处理组(P<0.05),精清中LDH酶(乳酸脱氢酶)活力(1007.29U/L)和GOT酶(谷-草转氨酶)活力(0.0396卡门氏单位)显著低于其他处理组(P<0.05);4.绵羊精液冷冻稀释液中添加3%VE(V/V),同时在两步法稀释时均添加3%PUFA处理组,解冻后活率(0.328)和顶体完整率(0.335)显著高于对照组和其他处理组,精清中LDH酶(乳酸脱氢酶)活力(681.352 U/L)和GOT酶(谷-草转氨酶)活力(0.046卡门氏单位)显著低于对照组(P<0.05);5.通过电镜可观察到稀释液中加入1%VE和两步稀释液中均添加3%PUFA处理组、稀释液中加入0%VE和两步稀释液中均添加2%PUFA处理组及稀释液中加入3%VE和两步稀释液中均添加3%PUFA处理组类似于鲜精的效果,说明冷冻精子的膜和顶体受到保护。6.经过本研究初步确定绵羊精液冷冻稀释液中添加3%VE(V/V)、两步稀释液中均添加PUFA3%的处理组为最佳配合比例。
哈福[2]2000年在《绵羊冷冻精液稀释液及解冻液的研究》文中研究指明本试验用正交设计对绵羊冷冻精液稀释液和解冻液进行了研究。对稀释液的研究结果指出，4号稀释液是一种较理想的稀释液组合。稀释液内所添加的山梨醇、氯前列烯醇、复合维生素B中，复合维生素B可以明显地提高绵羊冻精的解冻后活率，并有效地降低谷草转氨酶释放量和畸形率。 解冻液的研究结果指出4、6、7号解冻液的效果相对较好。在解冻液内添加的几种物质中，每种物质对于精子的各项评定指标的影响程度是不同的，四种物质相对比较，对活率影响较大的是抗坏血酸和复合维生素B，对畸形率和谷草转氨酶释放量影响较大的均是谷胱甘肽和亚硒酸钠维生素E，复合维生素B仍然是一种较适宜的添加物，亚硒酸钠在解冻液中添加时会对精子解冻后的形态结构产生不利的影响。
哈福, 赵有璋[3]2003年在《绵羊冷冻精液稀释液中添加复合维生素B提高冻精解冻后品质的研究》文中提出将山梨醇、氯前列烯醇、复合维生素B在绵羊冷冻精液稀释液中进行添加、筛选。解冻后活率结果显示1号稀释液(41.17±4.72)%和4号稀释液(37.76±3.15)%极显著地高于对照组稀释液(22.80±4.49)%(P<0.01)。表明在绵羊冻精稀释液中添加复合维生素B可有效提高冻精解冻后活率并保护精子形态结构的完整性。
王新奇[4]2014年在《绵羊精液稀释液、冷冻程序和离心除精浆的优化研究》文中认为精液超低温冷冻保存技术是利用液氮作为冷冻源,经特殊处理后保存在超低温环境下,从而达到长期保存的目的。绵羊精子和其他物种相比,存在着生理生化方面的特性,对低温的抵抗力较其他动物低,因此绵羊精液冷冻后精子活率、顶体完整率等精子质量评价指标较低,冷冻效果一直不理想,难以在绵羊的人工授精中得以推广应用。为了提高绵羊冷冻精液品质,本实验以精液解冻后精子活率、顶体完整率、质膜完整率和谷草转氨酶及乳酸脱氢酶活性等为检测指标,对绵羊精液稀释液配方、细管冻精制作程序和离心除精浆技术进行了优化研究,实验结果如下：(1)在6种精液冷冻稀释液配方中,以含有D-果糖、柠檬酸和Tris的F配方冷冻效果最好,解冻后精子活率达到了0.41。(2)细管冻精制作过程中的精液最佳平衡时间为：2.5h,随着平衡时间的延长而解冻后精子品质开始降低；冷冻效果最好的是在温度为40℃,解冻时间为10s的条件下的解冻程序,解冻后精子活率极显著(P<0.01)高于解冻条件为70℃,6s下的解冻程序。(3)在精液冷冻的关键环节-精液冷冻降温速率中,以冷冻降温程序b(4℃～-15℃区间内降温速率；5℃/min,-15℃～-90℃区间内降温速率：20℃/min)为最优。(4)精液的最佳离心除精浆条件：离心速率为1250r/min,离心时间为5min。经过离心除精浆的解冻后精子活率极显著(P<0.01)高于不进行除精浆的精子活率。综上所述,本实验对绵羊精液超低温冷冻-解冻程序和冷冻稀释液配方以及离心除精浆技术进行了优化筛选,使绵羊精液解冻后活率达到0.35以上,可以满足生产需要。
张树棣[5]2007年在《不同组分精液稀释液对牛精子冷冻保护效果的研究》文中研究说明本试验对内蒙古西部良种奶牛繁育中心引进的荷斯坦种公牛进行品质评定,并对中心生产的细管型冷冻精液各项指标进行检测。本试验在现有的牛精液冷冻稀释液的组成成分基础上添加了维生素B12,还进行了大豆磷脂代替卵黄的试验研究。试验结果表明:内蒙古西部良种奶牛繁育中心引进的12头荷斯坦种公牛符合种用公牛的繁殖性能的要求,表明可以进行正常的配种和种用。由中心生产的细管型牛冷冻精液各项指标符合标准。添加2mg/L的VB12对解冻后精子活力高于对照组,差异极显著(P<0.01);顶体完整率高于对照组,差异极显著(P<0.01);畸形率低于对照组,差异极显著(P<0.01)。GOT活性低于对照组,差异显著(P<0.05);添加2mg/L VB12组HYD活性低于对照组,差异极显著(P<0.01)。综合各项指标,添加2mg/L的VB12对冷冻-解冻精子效果较佳。溶解大豆磷脂的温度不同会使大豆磷脂对精子的保护作用产生一定的影响,在添加2.5%、5.0%、7.5%、10.0%磷脂组中,综合冷冻-解冻精子冻后活力、顶体完整率指标,溶解磷脂温度70℃时对冷冻保存精子的品质最佳。大豆磷脂的浓度不同对冷冻-解冻后精子品质有一定的影响。从总体来看,2.5%、5.0%磷脂和7.5%的磷脂稀释液对冷冻-解冻精液品质具有较好的效果,其中5.0%的磷脂效果最好。5.0%的磷脂稀释液对精子的冷冻-解冻活力显著高于卵黄组(P<0.01);畸形率低于其他组,差异显著(P<0.01)。5.0%磷脂稀释液冻后活力在0h、0.1 h和1h时高于卵黄组,差异极显著(P<0.01)。在2h和4h时,与卵黄组差异不显著(P>0.05)。5.0%磷脂和7.5%磷脂组GOT活力显著低于卵黄组(P<0.05);透明质酸酶活力,5.0%磷脂组低于卵黄组但差异不显著(P>0.05)。磷脂和卵黄两种类型的稀释液对精清中的无机成分有一定影响。Ca2+、Na+浓度,各磷脂组显著低于卵黄组(P<0.05)。K+、C1-浓度,5.0%磷脂与卵黄组差异不显著(P>0.05)。其他组与卵黄组差异显著(P<0.05)。利用筛选的冷冻稀释液即5.0%磷脂组与卵黄组进行体外授精试验,分别得到分裂卵数37.66%和47.18%,囊胚数14.2%和18.46%。孵化囊胚率为31.81%和38.89%。
祝发明[6]2003年在《波尔山羊冷冻精液稀释液配方研究》文中提出本试验通过逐级筛选研制出波尔山羊冷冻精液稀释液试验配方，为了分析其优劣，与国内外报道的四个典型配方进行对比，应用超微结构分析，谷草转氨酶和乳酸脱氢酶活力测定及精子异种穿卵试验等多种检测方法，评定了试验配方在波尔山羊精液冷冻保存效果上的优劣性。结果如下： 1．筛选基础液pH。分别设计出pH为6.6、6.8、7.0、7.2的四个试验组，其中试验Ⅳ组(pH7.2)效果最好，其组成为：葡萄糖3.2g、乳糖4.8g、柠檬酸钠1.7g、Tris0.01g、柠檬酸0.03g、双蒸水100ml。用其冷冻精液，其精子冻后活率0.489±0.011，复苏率(％)67.1±0.398，冻后顶体完整率(％)69.6±1.535。冻后活率、复苏率极显著优于(p＜0.01)试验Ⅰ组(pH值6.6)；冻后活率、复苏率、冻后顶体完整率均显著高于(p＜0.05)试验Ⅱ组(pH6.8)。 2．筛选基础液渗透压。分别设计出渗透压Δ0.526℃、Δ0.682℃、Δ0.754℃、Δ0.819℃四个试验组，其中试验Ⅳ组(pH7.2，渗透压Δ0.819℃)效果最好，其组成为：葡萄糖3.2g、乳糖4.8g、柠檬酸钠1.7g、Tris0.01g、柠檬酸0.03g、双蒸水100ml。用其冷冻精液，精子冻后活率0.478±0.012、解冻后顶体完整率(％)68.2±3.129，均极显著高于(p＜0.01)试验Ⅰ组(Δ0.526℃)；显著高于(p＜0.05)试验Ⅱ组(Δ0.682℃)、试验Ⅲ组(Δ0.754℃)。 3．筛选甘油的添加量水平。用试验Ⅳ组作为基础液，在此基础上分别添加2.4％、4.0％、5.6％、7.2％、8.8％的甘油，组成五个试验组，其中试验Ⅱ组(4％)效果最好。用其冷冻精液，精子冻后活率0.495±0.011，复苏率(％)65.066±0.216，均显著高于其余四个试验组(P＜0.05)。 4．筛选最佳稀释液配方。将筛选出的最好稀释液配方作为配方Ⅴ，与国内外四个典型配方比较，用配方Ⅴ冷冻保存的精液解冻后活率、冻后存活时间、冻后8h活率、冻后顶体完整率(％)分别是0.492±0.012、11.616±0.117、0.381±0.012、69.866±1.535，均极显著高于配方Ⅰ、配方Ⅲ(p＜0.01)；除精液冻后存活时间外均极显著高于配方Ⅱ(p＜0.01)，除冻后顶体完整率外均显著高于配方Ⅳ(p＜0.05)，表明配方V冷冻保存精液效果最好。 5.精浆中GOT和LDH活力测定。用配方V进行冷冻保存波尔山羊精液，解冻后精浆中的GOT和LDH活力分别是268.1士1.820、85.1士0.258，均显著低于配方I、配方11、配方m(p<0.05)。表明用配方V冷冻保存精液对精子质膜保护效果较好。 6.精子异种穿卵试验。配方V冷冻保存后精液的精子穿卵率(%)83.194士2.164，极显著高于配方I和配方m(p<0.01)，显著高于配方11(P<0.05)。表明本试验中应用配方V冷冻保存精液，其解冻后的精子受精能力效果显著。
栗瑞兰[7]2018年在《内蒙古绒山羊精液冷冻保存方法优化及精液稀释液主要成份的作用机制研究》文中进行了进一步梳理精子结构、生化和生理功能在冷冻解冻过程中会受到严重的破坏,如何将精液在冷冻解冻过程所受的损伤降到最低一直是人们研究的热点。为了进一步提高绒山羊精液冷冻保存后的质量,本研究以Tris稀释液为基础,比较了液氮熏蒸高度、精清、卵黄和大豆卵磷脂对内蒙古绒山羊精液的冷冻保存效果的影响,筛选出适合绒山羊精液冷冻保存的方法;在此基础上研究了氧化磷酸化和糖酵解对绒山羊精液冷冻保存和解冻后的作用;并进一步分析了葡萄糖、海藻糖和胆固醇在绒山羊精液冷冻保存过程中作用机制。精液冷冻解冻后分别检测了精子运动性能、精子结构完整性、精子中活性氧(ROS)、Ca2+、ATP;精子悬浮液中的丙酮酸和乳酸水平;检测了精子凋亡率和线粒体膜电位;分析了精子中AMPK、phospho-AMPK以及蛋白质酪氨酸磷酸化。结果如下:1、精液经稀释后冷却至5℃,在距离液氮液面H1(4cm)和H2(9cm)处熏蒸7min后冷冻保存,结果表明,冷冻解冻后,与H1(4cm)相比,H2(9cm)组的精子活率极显著降低(P<0.01),顶体完整性和质膜完整性极显著降低(P<0.01),DNA完整性无显著差异。因此,在距离液氮液面4cm处熏蒸7min后冷冻保存效果较好。在精液冷冻保存过程中,去除精清,结果显示冷冻解冻后精子活率和速率极显著降低(P<0.01),精子顶体完整性和质膜完整性显著降低(P<0.05),DNA完整性极显著降低(P<0.01),以及脂质过氧化水平极显著升高(P<0.01),因此,精清的存在更有利于精子的冷冻保存。在绒山羊精液冷冻保存过程中,在冷冻稀释液中添加1.5%大豆卵磷脂与10%卵黄相比,精子运动性能、结构完整性和脂质过氧化水平无显著性差异,因此大豆卵磷脂可以代替卵黄保护精子免受冷冻损伤。2、在绒山羊精液冷冻保存过程中,抑制氧化磷酸化和糖酵解作用后,冷冻解冻后,精子运动性能和结构完整性显著下降(P<0.05),线粒体膜电位显著降低(P<0.05),脂质过氧化水平极显著升高(P<0.01)。解冻后,抑制氧化磷酸化作用后,精子几乎失去运动能力,线粒体膜电位显著下降(P<0.05);抑制糖酵解作用后,精子运动性能显著下降(P<0.05),然而线粒体膜电位无显著性差异。因此,在绒山羊精液冷冻保存过程中,糖酵解和氧化磷酸化对维持精子的质量和代谢具有同等重要的作用。解冻后氧化磷酸化和糖酵解对维持精子的运动性能均具有重要的作用;在维持线粒体活性方面,氧化磷酸化的作用更明显。3、在冷冻稀释液中添加不同浓度(0-112mmol)的葡萄糖,结果发现56 mmol葡萄糖可以明显提高精子冷冻解冻后活率、运动速率、顶体和质膜完整性(P<0.05)。56 mmol葡萄糖组中的精子细胞中ROS水平显著升高(P<0.01);28 mmol和56 mmol葡萄糖组中的精子细胞中Ca2+水平显著低于其它各组(P<0.01);与其它各组相比,56 mmol和84 mmol葡萄糖组中的精子细胞中ATP浓度较高(P<0.05)。精液解冻后,在低葡萄糖浓度组(28-56 mmol)的精子悬浮液中未检测到乳酸,而112 mmol组中检测到大量乳酸(P<0.01)。因此,冷冻稀释液中添加适量葡萄糖可以促进精子的代谢,但高浓度葡萄糖可能因为乳酸的大量产生抑制精子冷冻保存后的运动能力。4、精液稀释于含有海藻糖和和葡萄糖的稀释液中,对精子的活率、质膜完整性和顶体完整性无显著性影响,但DNA完整性和线粒体膜电位显著升高(P<0.05),精子中ROS和Ca2+水平显著降低(P<0.01),以及显著降低脂质过氧化水平(P<0.05);在GT-100组(100mmol海藻糖和56mmol葡萄糖),解冻后,在顶体前端、赤道段和精子尾部中段发现存在大量的phospho-AMPK。因此,海藻糖可能通过激活AMPK发挥抗氧化作用。5、精液经过不同浓度胆固醇环糊精(CLC)处理后,没有引起精子活率的差异(P>0.05),但顶体和质膜完整性显著升高(P<0.05),DNA完整性极显著升高(P<0.01);精液经过1 mg/ml和2 mg/ml的CLC处理后,解冻后的精子线粒体膜电位显著升高(P<0.05),精子中ROS水平显著下降,Ca2+水平显著下降(P<0.05);2 mg/ml的CLC处理降低了冷冻解冻后精子中70 KDa蛋白酪氨酸磷酸化,并延迟了A23187对精子诱导的顶体反应。总之,将绒山羊精液稀释于含有56 mmol葡萄糖的Tris稀释液中,冷却至5℃的精液在距离液氮液面4 cm处熏蒸7 min后冷冻,最适合内蒙古绒山羊精液冷冻保存。葡萄糖、海藻糖和胆固醇通过不同的作用途径影响了绒山羊精液的冷冻保存。通过以上研究,为绒山羊精液冷冻保存提供理论依据。
乌兰托娅[8]2010年在《绵羊细管冷冻精液稀释液的研究》文中研究说明精液冷冻技术是利用液氮、干冰作为冷冻源,将精液做特殊处理后,保存在超低温下,以达到长期保存的目的。绵羊的自然繁殖力一直较低,发展肉羊规模化生产,最大限度地提高优良公畜的利用率,加速品种的育成和改良步伐。通过冷冻精液的方式加以保存优良的种畜的遗传资料,推广羊冷配技术显得尤为重要。本研究就针对这一现状,对绵羊冷冻精液的稀释液进行进一步摸索来提高精液解冻后活力、顶体完整率、受胎率等等。使其保证鲜精的利用率,避免资源浪费。成功的构建了能够稳定其活力的配方。本研究的主要结果和结论如下:1.不同稀释液对精子冷冻保护的影响不同,用乙二醇作为冷冻保护剂解冻后的活力较高,效果显著,达到了0.43±0.028。2.不同解冻温度对精子活力有极显著影响,在42℃解冻的精子解冻后活力最高,达到0.40±0.02。3.通过实验筛选出的最佳冷冻稀释液中添加了EDTA和Tris对精子有良好的保护性。4.两倍稀释后的精子解冻后活力最高,有效精子数较多,有利于精子的存活。5.本研究为羊冷配技术的进一步推广和其他研究学者的借鉴提供了一个更好的平台。
申惠敏, 贾秀珍[9]2016年在《畜禽冷冻精液稀释液的研究进展》文中认为畜禽精液冷冻保存是人工授精技术的一个重大发展。在精液冷冻保存中稀释液起关键作用。稀释液通过粘附到精子膜上,保护膜结构,增加膜流动性,调低精子对冷休克的易感性,增加了精子冻存能力及解冻后精子活力。
杨万里[10]2014年在《陕北白绒山羊鲜精细管输精技术研究与示范》文中进行了进一步梳理随着社会经济的发展和人民生活水平的提高，山羊生产也渐趋向于舍饲化、规模化和程序化。如何简单、高效地发挥山羊繁殖潜力，大批量生产商品羊已成为急需解决的重要问题。山羊鲜精细管输精技术，一种不需要专业的人工授精技术人员和输精器械，且具有较高妊娠率新的人工授精方法。鲜精细管输精技术配合同期发情技术可以使适繁母羊在短时间内快速而高效地达到妊娠效果。本研究对陕北白绒山羊同期发情和鲜精细管输精技术进行了研究，初步建立了陕北白绒山羊原种场同期发情和人工授精技术体系。研究结果如下：（1）陕北白绒山羊精液稀释液的筛选。对采集的种公羊精液进行品质检查之后，将合格精液分别使用3种不同的精液稀释液稀释之后低温保存，每隔12h检测活力一次至精子全部死亡，统计精子存活指数和总存活时间。每个组进行3次独立重复试验。结果显示，配方1组的精子存活指数为57.6±6.05，总存活时间为118±6.93h，显著高于配方2组（40.68±2.29，90±0.00h）和配方3组的（47.44±5.06，103±14.00h）（P﹤0.05）。因此，本研究选择配方1为陕北白绒山羊精液稀释液。（2）陕北白绒山羊鲜精细管输精。采集种公羊精液，进行精液品质检查之后，将合格精液按实际需求进行适当比例稀释，分装到细管中对发情母羊进行人工授精，共配种母羊335只，间隔一个情期返情羊有62只，返情率为18.51%；细管输精受配母羊共有258只产羔，妊娠率为77.01%。与试验羊场近3年配种产羔情况相比，利用鲜精细管输精技术对陕北白绒山羊配种后，返情率降低，妊娠率升高。（3）陕北白绒山羊同期发情。在繁殖季节对55只育成陕北白绒山羊分三批使用间隔10d两次注射氯前列醇钠的方法进行同期发情，总发情率为94.54%，母羊一个情期的返情率为19.23%，返情羊补配后总妊娠率达到67.31%；对243只成年陕北白绒山羊使用羊用炔诺酮阴道栓配合肌肉注射促卵泡素（Follicle stimulating hormone，FSH）的方法进行同期发情处理，有228只羊在撤栓之后的96h之内出现发情特征，同期发情率为93.8%，配种后间隔一个情期返情率为15.35%，返情羊补配后总妊娠率为82.89%；两种方法处理母羊后，发情时间都集中出现在处理之后的24~72h。因此可选择间隔10d两次注射氯前列醇钠的方法对育成陕北白绒山羊进行同期发情，使用阴道栓配合注射FSH的方法对成年陕北白绒山羊进行同期发情。
参考文献：
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[9]. 畜禽冷冻精液稀释液的研究进展[J]. 申惠敏, 贾秀珍. 畜禽业. 2016
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