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摘要：目的 分析ELISA方法检测HCV抗体的相关影响因素，寻求提高ELISA方法检测HCV抗体准确性的科学方法。方法 以2013年1月-2014年12月在本院进行丙型肝炎抗体检测的2568份标本作为研究对象，先采用ELISA法测定HCV抗体，对于检测阳性的标本进行HCV-RNA确证试验，对患者基本情况、使用试剂、标本状况、操作过程等影响检测结果的相关因素进行统计分析。结果 ELISA法共计检测出HCV抗体阳性样品78份，阳性率3.04%，HCV-RNA确证试验检测阳性标本数为64份，确证符合率82.05%，在采用ELISA方法检测HIV抗体的整个过程中，包括病人的基本情况、标本的采集、标本的保存、试剂的准备、样品的加入、酶标孔的孵育、酶标孔的洗涤、显色、结果判断等因素都会影响到检测结果。结论 要提高ELISA法检测HCV抗体的准确度，必须制定严格的标准操作程序并按照标准操作程序进行操作，每次检测都要加入外部质控品，绘制质量控制图。
关键词：HCV抗体；ELISA法；影响因素分析
酶联免疫吸附试验（ELISA）作为检测丙型肝炎抗体（HCV）最为常用的一种方法，具有特异性强、灵敏度高、操作方便，血清或者血浆样品都可以检测，操作性非常好[1]，不管是批量样品还是单个样品，都可以用该方法进行检测。本文对ELISA方法检测HCV抗体的相关影响因素进行分析，希望能够找到提高检测结果准确性的有效方法。
1 资料与方法
1.1一般资料 以2013年1月-2014年12月在本院进行丙型肝炎抗体检测的2568份标本作为研究对象。
1.2仪器设备 酶标仪MK3；洗板机MK2。
1.3试剂厂家 ELISA法检测试剂由北京万泰生物药业股份有限公司生产，有效期内使用。HCV-RNA检测试剂采用进口的罗氏公司生产，有效期内使用。
1.4方法 先采用ELISA法测定HCV抗体，对于检测阳性的标本进行HCV-RNA确证试验。
2 结 果
ELISA法共计检测出HCV抗体阳性样品78份，阳性率3.04%，HCV-RNA确证试验检测阳性标本数为64份，确证符合率82.05%。
3 讨 论
在采用ELISA方法检测HCV抗体的整个过程中，病人的基本情况、标本的采集、标本的保存、试剂的准备、样品的加入、酶标孔的孵育、酶标孔的洗涤、显色、结果判断等因素都会影响到检测结果。现分别就以上影响因素进行分析讨论：
3.1病人基本情况 病人体内的一些内源性物质是影响ELISA法检测HCV抗体的重要因素，这些物质主要有内风湿因子、自身抗体、相关补体、以及一些交叉反应物质等，这些物质与酶标孔特异性结合，可能出现假阳性结果[2]。所以在检测中出现初筛阳性的时候，需要结合患者的整体情况来综合判断，从而提高检测结果的准确性。
3.2标本的采集、保存 ELISA方法检测HCV抗体一般都是采用血清样品进行检测，所以在分离血清的时候要充分离心，避免红细胞、纤维蛋白等混入检测样品中。
期刊文章分类查询,尽在期刊图书馆标本要尽量避免溶血，因为溶血标本容易出现假阳性结果，但是有研究认为只要样品溶血血红蛋白浓度不大于4.95g/L则不会影响结果[3]。如果在实际检测中遇到溶血标本，可以先检测其溶血血红蛋白，看是否大于4.95g/L，从而确定标本是否适合采用ELISA法进行检测。徐学新等[4]的研究发现不同程度的乳糜血液放置时间越长OD 值下降越多，越容易导致漏检。黄疸病人如果结合胆红素浓度过高也会影响ELISA检测结果，对于高黄疸病人可选择其他检测方法。另外血清样本须避免反复冻融，反复冻融的标本会产生假阴性结果。
3.3试剂影响因素 所使用的试剂必需经国家食品药品监督管理总局注册批准、批批检合格，临床评估良好并且在有效期内使用。现在多数实验室正在使用的第3代双抗原夹心法试剂盒，具有良好的敏感性和特异性[5]，在使用过程中酶标结合物要避免反复冻融，以免酶的活性降低。检测试剂盒一般保存在2-8℃冰箱，使用前需要放置室温30min，不同厂家、不同批号的试剂不能混用。
3.4加样操作的影响 ELISA检测加样时吸头不能接触到包被物，尽量垂直加入酶标孔的底部，防止标本飞溅出或者产生气泡。加不同样品时需要更换吸头，避免样品间的交叉污染。滴加酶标结合物、显色液、终止液的时候，需要摇匀以后再加。如果样品量大，为了快速加入，可以使用排枪。
3.5孵育的影响 孵育是非常重要的一步，是影响结果的决定性因素，必须严格按照说明书要求的孵育时间及温度进行操作，并注意封闭避免边缘效应。在样品量大的时候，酶标板之间不能互相叠加；干热孵育一般会导致受热不均匀，所以尽量采用水浴箱进行孵育；孵育时间也是影响检测结果的主要因素，曹青梅等[6]通过实验证明，孵育时间过短会引起漏检，至少需要孵育30min以上。陈怀霞[7]研究证明，孵育温度过高或者过低，会出现假阴性或者假阳性结果，所以需要严格控制在37℃以保证检测结果的准确性。
3.6洗板 浓缩洗涤液要严格按照试剂说明书要求的稀释倍数进行稀释，洗涤液注入酶标孔不能外溢，以免引起交叉污染。洗涤液浸泡时间及洗板次数需要严格按照说明书要求进行设定，不能随意增加浸泡时间或者洗板次数。洗板结束后需要将酶标板在吸水纸上拍干，每次更换干净的吸水纸。
3.7显色 国产试剂显色液常为底物液和底物缓冲液两种液体，加显色时应先加底物缓冲液液后加底物液液，加完显色液以后注意避光保存。加入终止液以后应该在10min内完成酶标仪读数，放置时间越长，OD值下降程度越大，时间太长，甚至会出现假阴性。
3.8质量控制 在每一次检测中都必须要加入试剂盒内的内部对照，同时也需要做外部质控对照，绘制质量控制图，定期参加上级实验室组织的室间质量考评活动，严把质量关。
综上所述，ELISA法检测HCV抗体必须严格按照试剂说明书和全国艾滋病检测技术规范的相关要求进行操作，从而确保检测结果的准确性。
参考文献：
[1]李宁.影响酶联免疫吸附实验测定的关键环节[J].检验医学与床，2006，3（7）：314-315.
[2]宗永学，梅桂杰. 酶联免疫吸附实验的影响因素及控制方法[J].中国疗养医学，2007，16（8）：480-481。
[3]孙爱琴.ELISA 法检测HIV 抗体的影响因素和控制措施[J].河南预防医学杂志，2012，23（4）：270-272.
[4]徐传国.不同程度溶血对ELISA 两步法检测HBsAg 的影响观察[J].天津科技，2012，39（5）：6-7.
[5]黎学东.带血球的标本对ELISA 一步法检测HBsAg 的影响[J].中国实用医药，2012，7（1）：116-117.
[6]汪建国，周莺莺.溶血、脂浊样品对ELISA 法检测HBsAg 结果的影响[J].现代实用医学，2009，21（8）：818-819.
[7]梁其隆，陈龙菊，甘芳香.ELISA 法检测抗-HIV 结果影响因素的研究[J].国际检验医学杂志，2011，32（10）：1050-1051.
论文作者:杨继慧
论文发表刊物:《健康世界》2015年第14期供稿
论文发表时间:2015/11/19
标签：抗体论文; 标本论文; 样品论文; 试剂论文; 阳性论文; 方法论文; 因素论文; 《健康世界》2015年第14期供稿论文;