2华中科技大学同济医学院附属荆州医院 434020
【摘要】目的：观察结肠癌组织及癌旁组织中肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）与VEGF的表达情况并探讨两者的相关性。方法：通过免疫组织化学方法检测结肠癌组织及癌旁组织中TAMs的特异性标志物CD68的表达以及VEGF的表达情况，比较TAMs和VEGF在结肠癌组织及癌旁组织的浸润强度并采用Spearman相关分析癌组织中两者平均IOD值的相关性。结果：TAMs在86例结肠癌中的表达阳性率为80.2%（69/86），其阳性表达与患者的性别、年龄、肿瘤的病理类型无统计学差异（P>0.05），CD68的阳性率与肿瘤的分化程度、肿瘤分期、淋巴结转移与否、肿瘤的侵润深度有关（P<0.05），CD68在癌肿组织阳性高于癌旁组织，两者之间的差异具有统计学意义，TAMs与VEGF在结肠癌中的表达呈正相关（r=0.619,P<0.05）。结论：TAMs在结肠癌中有明显的阳性表达，TAMs可能作为一个肿瘤治疗的新靶点，抑制肿瘤的生长。
【关键词】结肠癌；巨噬细胞；VEGF
【中图分类号】R735 【文献标识码】A
本研究通过免疫组织化学技术对结肠癌及癌旁组织中的TAMs的特异性抗原CD68以及血管内皮生长因子VEGF进行检测。并观察两者之间的相关性，从而探讨结肠癌浸润及转移的机制。
1资料与方法
1.1临床资料
收集2012年6月至2013年6月在我院胃肠外科行根治性结肠癌切除术患者86例，术后病理均为腺癌。所有患者术前均未行任何治疗。其中男性48例，女性38例，年龄28-83岁，平均年龄59.5岁。
1.2免疫组织化学染色
结肠癌组织及癌旁组织由4%的多聚甲醛固定，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，3.5μm切片。组织切片经烤片，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化。枸橼酸钠盐高压热修复3分钟，后冷却至室温。3%过氧化氢室温孵育15分钟，山羊血清封闭非特异性抗原。CD68兔抗人单克隆抗体（abcam公司，1:150稀释），VEGF兔抗人抗体（中杉金桥公司，1:100稀释）4℃孵育过夜。生物素标记的二抗室温孵育15分钟。链霉素抗生物素蛋白室温孵育15分钟。显微镜下DAB显色，苏木素复染。脱水，封片。
1.3免疫组织化学染色结果分析
每张切片采集5个视野，采用图像分析软件（Image-pro plus 6.0）计算其单位面积平均光密度值(IOD)
1.4统计学方法 数据分析采用SPSS19.0完成。计数资料的比较采用卡方检验。Spearman相关分析对肿瘤组织中的CD68和VEGF的表达进行相关性分析。双侧检验P＜0.05表示有统计学意义。
2结果
2.1 CD68在结肠癌中的表达与患者的临床病理特征
86例接受根治性结肠癌手术患者的临床标本中，CD68的阳性表达者为69例（80.2%）。高中分化程度标本为49例，其中阳性表达者为43例，低分化者为37例，其中阳性表达者为26例，两者之间差异具有统计学意义（P=0.041）;有周围淋巴结转移者为52例，其中CD68表达阳性者为48例，无淋巴结转移者为34例，其中CD68阳性表达者占21例，两者之间差异具有统计学意义（P=0.001）；肿瘤侵及者为46例，其中CD68表达阳性者为41例，未侵及浆膜者为40例，其中CD68阳性表达者占28例，两者之间差异具有统计学意义（P=0.025）；肿瘤分期为Ⅰ+Ⅱ者为37例，其中CD68表达阳性者为25例，肿瘤分期为Ⅲ+Ⅳ为49例，其中CD68阳性表达者占44例，两者之间差异具有统计学意义（P=0.011）。CD68的表达情况与患者的性别、年龄、肿瘤的组织学类型未见明显相关。（表1）
.png)
2.2 CD68和VEGF在结肠癌组织及癌旁组织中的表达
CD68与VEGF在结肠癌组织中阳性表达均为棕黄色染色与细胞质内，结肠癌组织中两者的阳性表达明显高于癌旁组织。（图1，图2）
.png)
3讨论
TAMs在肿瘤组织中的侵润是一个复杂的过程，其依赖于肿瘤血管的生成，TAMs的前体单核细胞进入血液后与小静脉血管相互作用，粘附、聚集于血管内皮上，在相关细胞因子的作用之下，转化为TAMs。TAMs在肿瘤的生长过程中具有双重作用，一方面能够吞噬肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞的生长、浸润以及转移；另一方面，肿瘤组织中过量的M2型TAMs浸润能够刺激肿瘤新生血管的生成，促进肿瘤的生长。TAMs促肿瘤血管的生成的机制可能是TAMs和肿瘤细胞能够分泌多种生长因子，其中包括促进血管生成的细胞因子。肿瘤的生长需要血液的营养供应，当单个肿瘤直径>0.2cm时，必须有新生血管的生成，肿瘤组织才会进一步生长。因此TAMs在肿瘤中的促血管生成作用是肿瘤实体生长的一个重要因素，TAMs分泌的一个重要的促肿瘤血管生长的生长因子是VEGF。VEGF是判断肿瘤细胞侵润程度的一个重要指标。VEGF家族包括经典VEGF、VEGF-B、VEGF-C以及VEGF-D。经典VEGF与VEGF-B的表达水平及其微血管密度的大小正相关。VEGF家族中的VEGF亚型VEGF-C和VEGF-D与肿瘤组织中的淋巴管的生成存在重要联系。因此现在VEGF是作为抗肿瘤治疗的一个重要靶点，如目前应用于肾癌中的靶向药物索拉菲尼。VEGF能够刺激单核细胞进入肿瘤实体内进而分化为TAMs，反过来TAMs又能够进一步促进肿瘤细胞的血管生成及淋巴管生成。在结直肠癌患者中TAMs相关的血管生成的刺激因子IL-1β和TNF-α能够刺激VEGF的表达，进而促进血管及淋巴管生成。
本研究中结肠癌VEGF的表达水平与CD68的表达水平呈正相关，进一步印证了两者的协同关系。结肠癌组织中的CD68表达水平明显高于癌旁组织，同样VEGF在结肠癌中的表达也明显高于癌旁组织。CD68作为TAMs的重要的特异性抗原，其表达水平代表TAMs的浸润程度。在癌肿组织中，TAMs的表达明显高于癌旁组织。TAMs作为一种炎性细胞，长期的慢性炎症刺激能够生成多种大量的炎性因子，启动肿瘤的生长，并在肿瘤的生长过程中提供其血管转移及淋巴管转移的途径。长期慢性炎症刺激对于肿瘤的发生发展是具有推动作用。
肿瘤相关巨噬细胞能够促进VEGF的分泌，两者之间在结肠癌中的表达呈正相关，具有协同作用，肿瘤相关巨噬细胞可能作为治疗结肠癌的一个新靶点在抗肿瘤治疗中起到关键作用。
参考文献
[1]周金金，张玲玲.肿瘤相关巨噬细胞与卵巢恶性肿瘤的研究[J].医学综述,2010(09):1333-1335
论文作者:易俊松, 龚治林
论文发表刊物:《解放军预防医学杂志》2015年第5期供稿
论文发表时间:2015/11/23
标签：肿瘤论文; 组织论文; 结肠癌论文; 阳性论文; 血管论文; 统计学论文; 生长论文; 《解放军预防医学杂志》2015年第5期供稿论文;