【摘要】：近年来，总有机碳TOC方法在制药设备清洁中得到了广泛应用。在制药生产成本和工艺技术不断提高的背景下，总有机碳TOC分析法在保证药品质量的同时，还能够进一步简化制药设备清洁程序，提升清洁效率，平抑高额的生产成本，有利于制药企业核心竞争能力的提升。
【关键词】：应用价值；中药固体口服制剂；总有机碳；清洁验证
总有机碳检测方法（TOC法）最早由欧洲和美国药典收录，用于注射用水和纯净水检测中，我国在2010版《中医药典》已进行了收录。该方法将水中有机物转化为二氧化碳，通过检测二氧化碳的量，来计算水中有机物的量。本文以复方丹参丸为例，探究TOC法在中药固体口服制剂设备清洁验证中的实际应用效果。
1.中药产品清洁验证面临的挑战
由于西药产品毒理学数据全面，自身成分较为单一，因此现已形成了完善的清洁验证方法，且验证过程也较为简单。但中药产品具有缺少毒理数据、成分复杂等特点，无法确定清洁标志物，导致中药产品清洁验证困难，无法借鉴西药复方产品的清洁验证经验。全面的数据需求、严格的清洁验证标准，都是中药清洁验证所需要面临的挑战。目前，多采用UV法、UPLC法、HPLC法等进行中药产品清洁验证，但仍然存在一定局限性，主要体现在灵敏度较低、容易出现未知杂峰等方面[1]。
2.TOC法的应用优势
中药固体制剂中所含成分包括鞣质类、有机酸类、挥发油类、皂苷类、生物碱类、糖类、纤维素、蛋白质等，GC法、UV法、HPLC法等只能对某一类或某一种成分进行定量检测。TOC法则能够对所有含碳有机物产生响应值，属于非专属性方法，且不需要寻找清洁标志物，不受限于毒理学数据，可有效解决未知峰无法解释、清洁标志物无法确定等问题，达到更好的清洁验证效果[2]。
3.仪器与试剂
供试品为：复方丹参滴丸（国药准字：Z10950111，天津天士力医药集团股份有限公司生产）
试剂为：碳酸钠（批号：20190305，天津风船化学试剂有限公司生产）；磷酸（批号：20170206，天津化学试剂三厂生产）；4-对苯醌标准品（批号：C10537000，Dr.Enrenstorfer）；蔗糖对照品（批号：111507-200014，中国药品生物制品检定所）。仪器为：UPLC分析仪（Waters AcquityTM）；总有机碳分析检测仪（GE sierers 900实验室型）。
4.试验与结果
4.1方法学验证
将复方丹参滴丸为例，对TOC检测法的取样回收率、耐用性、样品稳定性、精准度、精密度、线性等进行方法学验证，得到如下数据：
重复性验证：制作6份复方丹参滴丸样品，并将其编号为1~6，按顺序进行有机碳检测，计算RSD。结果：检测结果显示，RSD为1.540%。
线性验证：将适量超纯水和蔗糖对照品溶解，制成5000μg/L的TOC质量浓度标准溶液，使用超纯水将6份溶液进行稀释，将其编号为1~6，检测6份溶液的TOC值。结果：线性方程范围200~2500μg/L,相关系数r＝0.9999，y＝1.0071x，超纯水空白为84.6μg/L[4]。
取样回收率：取6块面积为20cm×20cm的生产设备表面钢板（材质相同），分别滴加1.5ml、1ml、750μL、500μL、200μL、100μL的复方丹参滴丸溶液，自然晾干后，按照规定方法用TOC擦拭专用棉签擦拭钢板表面，将样品分别编号，将棉签折断与40ml超纯水TOC取样瓶中，计算回收率。结果：RSD为5.2%，擦拭回收率为65.8%~73.5%。
耐用性验证：取4-对苯醌和蔗糖对照品（已知有机碳浓度），分别用碳酸钠及磷酸调节样品为pH10,pH7，pH4，进行TOC检测。结果：pH的改变并未对结果产生影响。
样品稳定性：分别于0、2、4、6、8、24h取复方丹参滴丸样品进行TOC检测。结果：24h内检测结果未出现明显变化[3]。
检测限定与定量限确定：k＝现行方程的斜率，定量限＝10σ/k,检测限＝10σ/k，对空白超纯水溶液进行10次检测，并计算标准偏差值σ。结果：定量限为8.24μg/L，检测限为2.72μg/L，线性方程的斜率为1.0071，样本标准偏差为0.83.
准确度验证：对6份方丹参滴丸样品进行总有机碳浓度检测，加入蔗糖对照组品溶液（已知浓度），计算回收率RSD和回收率。结果：RSD为2.37%，平均回收率为100.25%。
重复性验证：制作6份复方丹参滴丸样品，并将其编号为1~6，按顺序进行有机碳检测，计算RSD。结果：检测结果显示，RSD为1.540%。
精密度验证：连续检测6次1清洁验证品复方丹参滴丸，计算RSD。结果：RSD为0.466%。
线性验证：将适量超纯水和蔗糖对照品溶解，制成5000μg/L的TOC质量浓度标准溶液，使用超纯水将6份溶液进行稀释，将其编号为1~6，检测6份溶液的TOC值。结果：线性方程范围200~2500μg/L,相关系数r＝0.9999，y＝1.0071x，超纯水空白为84.6μg/L[4]。
4.2 TOC复方丹参滴丸含量线性关系
将复方丹参滴丸作为目标化合物，为了了解TOC方法与复方丹参滴丸含量的线性关系以及其回收率，将目标化物配制成浓度不同的溶液，使用TOC分析仪进行各浓度溶液TOC值测定。获得结果后，将浓度与TOC测定值作为坐标系的横、纵坐标轴，分析两者的关系式，可以获得TOC复方丹参滴丸含量线性关系，最终的线性相关系数在0.99以上，表明两者具有良好的相关性。
4.3 复方丹参滴丸残留可接受限度标准
对于复方丹参丸残留可接受限度的计算以国际常用检测方法—灵敏度（10ppm）获得残留物的限度，并利用其TOC值作为可接受限度标准。获得与产品直接接触设备的总面积，采用清洁验证取样方法，展开两种取样方法TOC可接受限度标准计算。具体方法为：
林洗法取样残留限度：
最大允许残留物总量*淋洗回收率*；
擦拭法取样残留限度：。将两者计算数值利用TOC校正曲线进行计算，即可获得复方丹参滴丸残留可接受限度标准。
4.4 UPLC方法与TOC 方法清洁验证对比
采用超高效液相色谱法，对复方丹参滴丸中8个主要成分进行定量检测。UPLC灵敏度难以到达清洁验证要求；UPLC方法无法兼顾辅料和药品残留检测。 TOC法应用于中药产品检测中，检测限可达2μg/L,复方丹参滴丸清洗剂、辅料及产品本身均为有机物，可到达控制药品质量，达到验证清洁效果的重要作用。与UPLC法相比，TOC法更适用于中药产品检测。详见表1 随机选取10个取样点UPLC方法与TOC方法检测结果。TOC法为非专属性方法对所有有机碳均有响应，若药品残留物中无有机化合物，那么将无法采用TOC法进行清洁验证，仍需要使用UV、GC、UPLC等传统专属性方法进行检测。同时，对于部分不溶于水的物质，TOC法则很难准确检测出有机碳含量，因此不建议使用TOC法[5]。
表1 10个取样点UPLC方法与TOC方法检测结果
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5.结束语
综上所述，通过对TOC法符合性、工作原理的分析可知，TOC是一种科学有效的中药固体口服制剂清洁验证方法，可为药品生产成本和药品质量控制提供理论依据和数据支持，具有较强的合理性和科学性。
参考文献：
[1]与HPLC相比,用TOC分析进行清洁验证的优势[J].中国医药工业杂志,2017,48(5):后插3-后插4.
[2]郑卓,谭婷心.总有机碳TOC方法在中药注射剂设备清洁验证中的应用[J].轻工科技,2015,31(5):108-109.
[3]王冕,丁立安,董月.应用TOC方法测定头孢菌素类抗生素残留[J].中国抗生素杂志,2017,42(9):790-793.
[4]李昕,钱浩洲,孙非非, 等.总有机碳(TOC)测定方法在疫苗生产企业清洁验证中的初步应用研究[J].药物分析杂志,2016,36(8):1465-1469.
[5]冯潇,戈玲,刘晨鸣, 等.总有机碳分析在制药设备清洁验证中的应用[J].微生物学免疫学进展,2016,44(3):43-48.
论文作者:郑鹏程
论文发表刊物:《中国医学人文》2020年6期
论文发表时间:2020/5/6