孙文佶[1]2001年在《外套细胞淋巴瘤bcl-1/IgH基因重排及其分子机理的研究》文中指出目的：外套细胞淋巴瘤（Mantle Cell Lymphoma，MCL）是起源于初级滤泡或次级滤泡外套带区未成熟CD5~+B细胞亚群的一类具有特征性的病理学、免疫表型和细胞与分子遗传学改变的非霍奇金淋巴瘤。人们对它的认识还很有限。目前，外套细胞淋巴瘤的诊断主要依据其形态学特点和免疫表型特征。然而，单纯依靠这些特征，对一些较易混淆的病例，如非典型性慢性淋巴细胞白血病和滤泡淋巴瘤等有时很难作出正确的诊断。提高临床诊断的正确性是增进对MCL认识的基础。t（11；14）（q13；q32）染色体易位是MCL高度特异的细胞遗传学改变，该易位使得11号染色体上的bcl-1和14号染色体上的IgH并列，从而形成bcl-1/IgH基因重排。已有文献报道，采用聚合酶链反应可以检测bcl-1/IgH基因重排，但对福尔马林固定的石蜡标本中小片段DNA的研究较少，且与新鲜冰冻组织的结果的一致性也较差。而在临床工作中，福尔马林固定的石蜡标本更为常见，因此，本研究的第一部分旨在设计一种可同时用于检测新鲜冰冻组织和福尔马林固定的石蜡标本中bcl-1/IgH基因重 浙江大学博士学位论文 孙文佑排的PCR引物，使之适用于临床工作，为MCL的明确诊断提供依据。 染色体易位引起的基因重排与非霍奇金淋巴瘤的特殊亚型有关，并在其病理发展过程中起重要作用。虽然 t（1；14）（ql3；q32）染色体易位是外套细胞淋巴瘤的特征性细胞遗传学改变，但其引起b－1／IgH基因重排的分子机理仍不清楚。对同样涉及14q32的t（l；18）（q32；q21）染色体易位的研究进行得比较深入，该易位一直被认为是发生在前体B细胞发育过程中lgH基因重排时的起始阶段，即D－JH重排，由重组酶的错误所致。因而，推断bCll／IgH基因重排可能也是正常的前体 B细胞发育时 V－D－J重组过程中发生错误所致。为了进一步了解伙－l／IgH基因重排发生的确切机理，本研究的第二部分对恤－1门咖基因重排连接区的序列进行分析，对恤刁区域内MTC段的断裂点，bCI－l／IgH基因重排发生时所涉及的JH基因，基因重排发生后连接区内的重组修饰于及D基因的同源序列加以辨认。希望通过对其机理的研究，进一步了解它的发生、发展机制，从而为寻找更好的诊断和治疗手段打下基础。 方法：本组研究用的标本来自1987年到1990年间德国病理协会下属的基尔…叩h node。registry。所有28例病例的诊断都符合外套细胞淋巴瘤的形态学诊断标准。取其新鲜冰冻的淋巴结（保存于液氮），其中7例还有福尔马林固定的石蜡包埋切片作为实验材料。根据GenBank提供的序列，重新设计了针对bell的引物（主要是将J。引物设计为共义引物，在POtt引物的 5’端加上CT两个碱基，对比习内侧引物则采取更靠近断裂点处（205－220）的序列设计等），分别采用半巢式PCR和GENESCAN对上述标本进行bCll／IgH基因重排检测。并进一步对bCll／IgH基因重排产物进行克隆和序列分析，寻找冰－1区域内MTC段上的断裂点，bCI－l／IgH基因重排发生时所涉及的人基因，以及对重排发生后连接区内的重组修饰于和D基因的同源序列加以辨认。 结果：通过GEN朋＊AN，在兆例新鲜冰冻组织中共有19例测得有址卜1雌H 2 浙江大学博士学位论文 孙文估基因重排，其扩增产物的大小在 694 间，荧光强度在 500七200 rd，3个病例 （例13，17和25）检测到两条特异的扩增带。而采用常规的半巢式PCR 则在门例病例中测得有恤l／IgH重排，扩增产物的大小在 901 间；在 7例福尔马林固定的石蜡标本中，6例测得有bCllop基因重排，除一例外，5例扩增产物的大小与新鲜冰冻组织的扩增产物大小相同。而采用文 道中的两组5！物，一组无法检出，而另一组，也仅有一例检出。 对门例址－lflgH基因重排产物进行克隆和测序，共得到 18个阳性结果（其中例；。得到2个阳性结果。经序列分析后发现，bCI－l％H基因重排产物为74162hp大小，融合基因连接区为 6－24hp大小。与 GenBank中的比－IMTC（MNorTranslocationCluster）区域（序列号为x74150）的序列比较后发现，断裂点集中在65hP的范围内，共有IO个不同的断裂点，4个阳性扩增产物的断裂点发生在位点494上，3个发生在437和440位点上，2个发生在486位点上，其他的各有1个发生在430，429，451，492，477和MI上，其中的五个断裂点，486，430，440。451和 492未见有文献报道。而与 JH基因（序列号为 X97051）的比较发现，最常涉及的JH基因为JH4，共8／18个，其次为汕，共3／18个，接下来依次为JH4／J。5，2／18个，JH6，2／18个，J。1，2／18个和JH3，l／18个。在b－IMTC区域内找到了一些和屹基因重组时所需要的潜在修饰于高度同源的核酸序列，有重组信号序列（RSSS），DIR基因，时叼5和咐耶非同源重组 DNA（5’－CCAG3’或它的互补序列5’－CTGG－3’）。此外，还在两例bel－l旭H基因重排中找到了D基
孙文佶, 林茂芳, 蔡真, Udo, Kellner, Reza, Parwaresch[2]2002年在《外套细胞淋巴瘤bcl-1/IgH基因重排的检测与序列分析》文中进行了进一步梳理目的 :寻找一种敏感、特异而又快捷的方法检测外套细胞淋巴瘤中 bcl- 1/ Ig H 基因重排 ,并分析 bcl- 1/Ig H 基因重排产物的序列 ,以了解 bcl- 1/ Ig H 基因重排发生的确切机理。方法 :对 2 8例经临床确诊的外套细胞淋巴瘤的新鲜冰冻组织 ,通过半巢式 PCR检测 bcl- 1/ Ig H基因重排 ,并对 bcl- 1/ Ig H基因重排产物进行克隆和序列分析。结果 :通过半巢式 PCR测到有 bcl- 1/ Ig H基因重排者计 17/ 2 8例。而采用一步法 PCR仅 9例有此基因重排 ,两者相比 ,差异显着 (χ2 =4 .59,P<0 .0 5)。对 bcl- 1/ Ig H基因重排产物进行序列分析后发现 ,bcl- 1/ Ig H基因重排产物为 74～ 16 2 bp大小 ,融合基因连接区为 6～ 2 4 bp大小。在断裂点集中的 6 5bp范围内 ,找到 10个不同的断裂点 ,其中 5个未见文献报道。对 JH 基因序列的分析 ,发现 bcl- 1/ Ig H 基因重排时 ,JH1,JH3,JH4 ,JH5和 JH6都可能参与重排 ,其中 ,以 JH4多见 ,而 JH2则没有涉及。结论 :该半巢式 PCR方法是检测外套细胞淋巴瘤中 bcl- 1/ Ig H基因重排的一种敏感而特异的方法 ,对外套淋巴细胞淋巴瘤的明确诊断和治疗都有一定的指导意义 ,而对 bcl- 1/Ig H基因重排的序列分析 ,则将为外套细胞淋巴瘤的的发病机理研究提供理论依据。
水若鸿[3]2003年在《套细胞淋巴瘤形态学、免疫表型和遗传学特征及其诊断价值的研究》文中认为套细胞淋巴瘤形态学、免疫表型和遗传学特征及其诊断价值的研究研究生：水若鸿导 师：朱雄增教授目的：研究套细胞淋巴瘤形态学、免疫表型和遗传学特征，并探讨其对套细胞淋巴瘤的诊断价值。方法：对41例套细胞淋巴瘤和91例对照组其它小B细胞恶性淋巴瘤石蜡包埋组织进行了形态学观察和cyclin D1、CD5、CD10和CD23等抗体的免疫组织化学染色；采用半嵌套式PCR及DNA测序技术对这些肿瘤和20例淋巴结反应性增生病例石蜡包埋组织中t（11；14）形成的bcl-1/JH重组基因进行了扩增和序列测定，以看家基因β-Actin作为内对照检测DNA质量；采用RT-PCR和竞争性RT-PCR（competitive RT-PCR）方法对其中38例结内套细胞淋巴瘤和58例结内其它小B细胞恶性淋巴瘤及20例淋巴结反应性增生病例石蜡包埋组织中cyclin D1 mRNA的表达进行了检测，以看家基因PGK作为内对照检测RNA质量。结果：（1）采用免疫组织化学技术，套细胞淋巴瘤和对照组小B细胞恶性淋巴瘤CD45、CD20阳性率均为100%。套细胞淋巴瘤cyclin D1阳性率为70.7%（29/41），CD5阳性率为73.2%（30/41），CD10和CD23标记均为阴性，bcl-2阳性率为92.7%（38/41）。Cyclin D1在对照组小B细胞恶性淋巴瘤中均为阴性。对照组中B-SLL中CD5 86.7%（13/15）阳性，CD23 80.0%（12/15）阳性，bcl-2 93.3%（14/15）阳性；FL中CD10 86.1%（31/36）阳性，bcl-2 100%（36/36）阳性；MZL中bcl-2 42.9%（3/7）阳性；MALT-L中bcl-2 66.7%（20/30）阳性。（2）采用半嵌套式PCR技术，41例套细胞淋巴瘤中25例检出bcl-1/JH基因组DNA。去除β-Actin 基因DNA和bcl-1/JH基因组DNA均阴性的病例3例，套细胞淋巴瘤中bcl-1/JH基因组DNA的检出率为65.8%（25/38）。PCR结果全部经测序证实，11q13上的断裂点均在bcl-1基因MTC区中SstⅠ限制性酶切位点上、下游50个核苷酸内。对照组小B细胞恶性淋巴瘤和淋巴结反应性增生中均未检出bcl-1/JH基因组DNA。（3）采用RT-PCR技术，38例结内套细胞淋巴瘤中，34例可检出cyclin D1 mRNA表达，去除PGK和cyclin D1 mRNA均阴性的病例2<WP=4>例，套细胞淋巴瘤中cyclin D1 mRNA表达的阳性率为94.4%（34/36）。对照组中B-SLL 有1例检出cyclin D1 mRNA表达，其余对照组病例均未检出cyclin D1 mRNA表达。PCR结果全部经测序证实。（4）采用竞争性RT-PCR技术，38例结内套细胞淋巴瘤中，27例可检出cyclin D1 mRNA高表达，去除2例PGK也为阴性的病例，套细胞淋巴瘤中cyclin D1 mRNA高表达率为75.0%（27/36）。对照组小B细胞恶性淋巴瘤及淋巴结反应性增生无一例有cyclin D1 mRNA高表达。结论：（1）套细胞淋巴瘤与对照组其它小B细胞恶性淋巴瘤在组织结构和组成细胞上各具形态学特征，可用于诊断和鉴别诊断。（2）套细胞淋巴瘤与对照组其它小B细胞恶性淋巴瘤各具免疫表型特征，石蜡包埋组织中cyclin D1、CD5、CD10和CD23等抗体的检测有助于正确的诊断和鉴别诊断。cyclin D1是套细胞淋巴瘤最特异性的免疫组化标记。（3）半嵌套式PCR技术在套细胞淋巴瘤石蜡包埋组织中检测t（11；14）所形成的bcl-1/JH重组基因组DNA片段特异性高，有一定的敏感性，可用于套细胞淋巴瘤病理诊断。（4）RT-PCR方法和竞争性RT-PCR方法可在石蜡包埋组织中检测cyclin D1 mRNA 的表达，前者敏感性高，特异性稍低；后者特异性高，敏感性稍低，均可用于套细胞淋巴瘤的诊断和鉴别诊断。（5）形态学、免疫组织化学和分子生物学方法（半嵌套式PCR、RT-PCR、竞争性RT-PCR）的综合应用有利于套细胞淋巴瘤的正确诊断和鉴别诊断
佚名[4]2003年在《《中华血液学杂志》2003年第24卷关键词索引》文中研究指明关键词基本按照中国医学科学院医学信息研究所 1998年出版的《医学主题词表 (英汉对照 )》标引 ,按照汉语拼音字母及论文发表的先后顺序排列。B白细胞介素 2 单倍体相合骨髓移植中急性移植物抗宿主病预防新方案的临床研究 (纪树荃 ,陈惠仁 ,王恒湘 ,等
参考文献：
[1]. 外套细胞淋巴瘤bcl-1/IgH基因重排及其分子机理的研究[D]. 孙文佶. 浙江大学. 2001
[2]. 外套细胞淋巴瘤bcl-1/IgH基因重排的检测与序列分析[J]. 孙文佶, 林茂芳, 蔡真, Udo, Kellner, Reza, Parwaresch. 浙江大学学报(医学版). 2002
[3]. 套细胞淋巴瘤形态学、免疫表型和遗传学特征及其诊断价值的研究[D]. 水若鸿. 复旦大学. 2003
[4]. 《中华血液学杂志》2003年第24卷关键词索引[J]. 佚名. 中华血液学杂志. 2003