1山西医科大学第一临床医学院 山西太原 030001；2山西医科大学 山西太原 030001
摘要：目的：探讨妊娠期甲状腺功能减退（甲减）大鼠胎盘组织中TNF-α、IL-10的表达趋势。方法：用免疫组织化学SABC法分别检测24例正常孕鼠、甲减孕鼠、甲减治疗孕鼠、甲减合并妊高症孕鼠胎盘组织中TNF-α、IL-10的表达。结果：1.四组样本的TNF-α、IL-10进行Kruskal-Wallis秩和检验，P＜0.05，差别具有统计学意义，四组样本的TNF-α、IL-10水平不全相同；2.正常组与甲减组TNF-α、IL-10分别比较，P＜0.05，差别具有统计学意义，甲减组的TNF-α水平较正常组高，而IL-10水平反之，正常组与甲减治疗组TNF-α、IL10比较，P＞0.05，差别无统计学意义；3.甲减组与甲减治疗组TNF-α、IL-10比较，P＜0.05，差别具有统计学意义，甲减组的TNF-α水平较甲减治疗组高，而IL-10水平较甲减治疗组低，甲减组与甲减合并妊高症组TNF-α、IL-10比较，P＞0.05，差别无统计学意义。结论：妊娠期甲减可能从胎盘细胞因子分泌失衡方面影响妊娠期高血压疾病的发生。
关键词：妊娠期甲减；妊娠期高血压疾病；TNF-α；IL-10；免疫组化；胎盘
近年来随着人们对甲状腺功能筛查的重视，学者们发现甲状腺功能异常与妊娠期一些严重的并发症密切相关，例如，妊娠期糖尿病、妊娠期高血压疾病、胎盘早剥等，而其中妊娠期高血压疾病是导致孕产妇及围产儿死亡的主要原因，其发病机制尚不明确，但已有很多学者在胎盘细胞因子分泌失衡的方面做了充分研究，并证实胎盘细胞因子分泌失衡可能是妊娠期高血压疾病的病因之一。同样有些学者[1]，[2]进行了相关研究结果提示，甲减对妊娠结局影响的具体表现形式存在多样性，机制不明确，可能部分与甲状腺激素直接参与胎盘发育有关。本研究主要通过免疫组化的方法测定大鼠胎盘肿瘤坏死因子α（TNFα）及白介素10（IL-10）来探讨两种疾病的关联，让人们从细胞因子的基础上认识妊娠期甲状腺功能减退的危害，重视对妊娠期甲状腺功能的筛查。
1.实验材料及方法
1.1实验材料 1.1.1实验动物 2014-04-01选用清洁级成年Wistar健康大鼠（初胎），周龄12~14周，体重210~240g，由山西医科大学实验动物中心提供。
1.1.2主要试剂及仪器 丙硫氧嘧啶片；左甲状腺素片（优甲乐）；兔抗鼠TNF-α、IL-10单克隆抗体、SABC试剂（北京博奥森生物科技有限公司）。
1.2实验方法1.2.1实验动物分组及实验动物模型的制备 利用丙硫氧嘧啶片、左甲状腺素制备甲减组及甲减治疗组大鼠模型，同时测量甲减组大鼠尾动脉血压分出甲减合并妊娠高血压疾病组。分别随机抽取24例正常孕鼠、甲减孕鼠、甲减治疗孕鼠、甲减合并妊高症孕鼠，孕鼠分娩后，立即在胎盘母体面中央取1.0×0.5×0.3cm的胎盘组织，避开出血钙化区，生理盐水清洗（尽量洗出血液）后，放入10%中性甲醛液中固定，石蜡包埋，切片（4nm）备用。
1.2.2检测方法 采用免疫组化SABC法检测胎盘TNF-α与IL-10蛋白的表达。TNF-α与IL-10表达阴性和阳性根据细胞染色强度和染色细胞所占面积，即两者积分之和来判断。染色强度分为：不染色0分，轻度染色1分，中度染色2分，重度染色3分；染色面积分为：无细胞染色0分，＜25%细胞染色1分，＜50%细胞染色2分，＞50%细胞染色3分。积分之和为0-1分，则表达阴性（-），1-2分为表达弱阳性（+），3-4分为表达阳性（++），5-6分为表达强阳性（+++）。
1.3统计学方法 采用SPSS18.0软件进行数据分析，对测定的TNF-α、IL-10数据进行多个独立样本比较的Kruskal-Wallis秩和检验，α＜0.05为差异具有显著统计学意义，同时采集数据分别进行两样本比较的Wilcoxon秩和检验，α＜0.05为差异具有显著统计学意义。
2.实验结果
2.1TNF-α水平 正常组、甲减组、甲减治疗组、甲减合并妊高症组的TNF-α进行Kruskal-Wallis秩和检验，P＜0.05，差别具有统计学意义，四组样本的TNF-α水平不全相同。正常组与甲减组、甲减治疗组的TNF-α分别进行Wilcoxon秩和检验，正常组与甲减组比较，P＜0.05，差别具有统计学意义，甲减组的TNF-α水平较正常组高；正常组与甲减治疗组比较，P＞0.05，差别无统计学意义，正常组与甲减治疗组的TNF-α水平相当。甲减组与甲减治疗组、甲减和并妊高症组的TNF-α分别进行Wilcoxon秩和检验，甲减组与甲减治疗组比较，P＜0.05，差别具有统计学意义，甲减组的TNF-α水平较甲减治疗组高；甲减组与甲减合并妊高症组比较，P＞0.05，差别无统计学意义，甲减组与甲减合并妊高症组的TNF-α水平相当。
2.2 IL-10 正常组、甲减组、甲减治疗组、甲减合并妊高症组的IL-10进行Kruskal-Wallis秩和检验，P＜0.05，差别具有统计学意义，四组样本的IL-10水平不全相同。正常组与甲减组、甲减治疗组的IL-10分别进行Wilcoxon秩和检验，正常组与甲减组比较，P＜0.05，差别具有统计学意义，甲减组的IL-10水平较正常组高低；正常组与甲减治疗组比较，P＞0.05，差别无统计学意义，正常组与甲减治疗组的IL-10水平相当。甲减组与甲减治疗组、甲减和并妊高症组的IL-10分别进行Wilcoxon秩和检验，甲减组与甲减治疗组比较，P＜0.05，差别具有统计学意义，甲减组的IL-10水平较甲减治疗组低；甲减组与甲减合并妊高症组比较，P＞0.05，差别无统计学意义，甲减组与甲减合并妊高症组的IL-10水平相当。
3.讨论
妊娠期甲状腺功能异常常导致一些严重产科并发症的发生，如：有研究称妊娠合并甲减患者轻度子痫前期的发生率为44%[3]，同时Anna[4]报道甲减孕妇妊娠期高血压的发病率为7.6%，轻度子痫前期发病率为15%，合并子痫者发病率上升至22%。可见妊娠期甲减患者中妊娠期高血压疾病高发，已经有一些人就妊娠期甲减对妊娠期高血压疾病的发生从生理的基础上作了初步阐述，如有报道[5]指出甲减时心血管系统表现为低动力状态，心输出量减少，外周血管阻力增高。亚临床甲减也可增加心血管疾病患病危险性[6]。虽然，妊娠期高血压疾病的发病机制尚不明确，但胎盘细胞因子分泌失衡与妊娠期高血压疾病的发生关系紧密，本研究证实妊娠期甲减可能从胎盘细胞因子分泌失衡方面影响妊娠期高血压疾病的发生。
3.1 TNF-α与妊娠期甲减和妊娠期高血压疾病
TNF-α是介导多向性炎症反应及免疫调节反应的细胞因子，具有广泛的生物学效应，主要来源于激活的单核巨噬细胞及TH1细胞。正常妊娠时，TNF-α在较低水平发挥其生物学效应，如促进分解代谢以满足胎儿能量需求；诱导TGF-β、IL-1、血小板源性生长因子等细胞分化和生长因子的产生，参与胎儿、胎盘组织生长和分化调节。但当TNF-α异常常引起妊娠相关疾病的发生。Knackstedt[7]等研究发现TNF-α能影响滋养细胞的侵袭性，另外它还可以促进巨噬细胞对滋养细胞的凋亡作用，使其侵入子宫蜕膜和螺旋动脉能力受损和胎盘浅着床，导致胎盘缺血缺氧。本研究表明妊娠期甲减组与妊娠期甲减组合并妊娠期高血压疾病组的TNF-α水平较正常组及妊娠期甲减治疗组高，且强阳性率高，因此可以推断，妊娠期甲减时TNF-α水平异常可能在妊娠期高血压疾病的发生上起一定作用。
3.2 IL-10与妊娠期甲减和妊娠期高血压疾病
IL-10主要由TH2免疫细胞产生，其正常妊娠时免疫系统起到双面作用，既可以激活又可以抑制，但通常以抑制免疫反应为主。妊娠时IL-10通过抑制TNF-α、IL-2等TH1细胞因子反应，以及直接抑制NK细胞等方式来抑制母胎免疫反应，抑制母体对胎儿的排异反应[8]。并且IL-10可以限制血管紧张素2介导的氧化应激和内皮功能障碍，从而减少氧化应激反应的发生[9]。本研究表明妊娠期甲减组与妊娠期甲减组合并妊娠期高血压疾病组的IL-10水平较正常组及妊娠期甲减治疗组低，且强阳性率低，妊娠期甲减时IL-10水平降低可能导致妊娠是免疫抑制作用降低，氧化应激反应增强，从而影响妊娠期高血压疾病的发生。
妊娠期甲减时究竟如何影响胎盘细胞因子的分泌，还有待研究，也许正如一些学者所说，甲状腺激素直接参与胎盘的发育。我们应该加强妊娠期甲功的筛查，不仅仅是TSH、FT4，还应包括TPOAb在内。同时我们应该注意对妊娠期甲减患者的治疗，从而防止妊娠期其他疾病的发生。
参考文献：
[1]Casey Bm，Dashe Js，Wells CE et al.Subclinicl hypothyroidism and pre-gnancy outcomes.Obstet Gynecoi 2005，105：239-245.
[2]Benhadi N，Wiersinga WM，Reitsma JB et al.Higher matemal TSH leve -ls in pregnancy areassociated with increased risk for miscarriage，fetal or neonatal death.Eur J Endoerinol 2009，31（6）：523-535.
[3]Lowell ED，Kenneth JL Gary FC.Hypothyroidism compli- catingpregnancy[J].ObstetricsGynecology，1988，72：108-112.
[4]Anna SL，Lynnae KM，Paul PK.et al，Perinatal outcome in hypothyroid pregnancies[J].Obstetrics Gynecology，1993，81：349-352.[5]Ojamaa K，Balkman C，Kiein 1.Ann Thorac Surg[M]，1993，56：S61-67.
[6]Harvey CB，Williams GR[J].Thyroid.2002：12：441-446.
论文作者:栗虹1,张延丽（通讯作者）2,李兵飞1
论文发表刊物:《健康世界》2015年3期供稿
论文发表时间:2015/10/27
标签：甲减论文; 妊娠期论文; 胎盘论文; 高血压论文; 统计学论文; 水平论文; 疾病论文; 《健康世界》2015年3期供稿论文;