（1东南大学医学院 江苏 南京 210009; 江苏省丹阳市人民医院消化内科 江苏 镇江 212300）
（2东南大学附属中大医院消化内科 江苏 南京 210009）
【摘要】目的：探讨miR-630在胃癌细胞组织中的表达形式，及其与临床病理特征的关联性。方法：选用茎环实时RT-PCR方法检测40例胃癌组织细胞及癌旁组织中miR-630的表达，并分析miR-630的表达及其与胃癌组织临床病理特征的关联性。结果：选用茎环实时RT-PCR方法检测miR-630表达的敏感性较强和特异性表现良好。miR-630在胃癌细胞组织中的表达(0.85±0.24)明显小于正常胃组织(1.63±1.02)，统计学差异很明显(P<0.05)。miR-630在发生淋巴结转移的胃癌细胞组织体中的表达(0.65±0.13)低于未发生转移的胃组织中的(0.94±0.48，P<0.05)；在已经高度分化胃癌组织中的表达小于分化较小肿瘤组织中的，其统计学差异明显(P<0.05)。miR-630的表达与性别、年龄、TNM分期无显著关系(P>0.05)。结论：miR-630在胃癌组织中的表达高于正常组织，与胃癌淋巴结转移和临床分期有一定关联。miR-630在胃癌的发展过程中可能发挥重要作用，可能是胃癌治疗的新靶标。
【关键词】 微RNAs；胃肿瘤；肿瘤转移；miR-630
【中图分类号】R730.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）35-0122-02
胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，其发病率居消化道恶性肿瘤之首，其早期诊断较为困难，发现时常处于进展期，预后较差。据统计，我国每年因胃癌死亡人数达26万[1]。胃癌的发生和发展是一个多步骤参与的多种相关基因失活的结果，其发生机制尚未完全阐明，早期诊断尤为困难。微RNA(MicroRNA/miRNA)是含有19～22个核苷酸的内源性非编码单链小分子RNA。大量研究表明，miRNA参与了细胞的发育、分化、增殖、凋亡、迁移及侵袭等生物学过程，并在肿瘤发生及淋巴转移中起重要作用[2-4]，其参与肿瘤调控的相关研究也是近年热点。miRNA有利于胃癌组织的分化，在其分化过程中起了重要作用。本文测量此物质在胃癌组织中的含量与表达时选用了荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术，并用分析其与胃癌临床病理特征的关系，所得结果如下。
1.资料与方法
1.1一般资料 收集江苏省丹阳市人民医院2014年1-10月行手术治疗并经病理确诊的40份胃癌组织标本(胃癌组)和距离癌组织边缘>5cm的癌旁正常胃组织标本(癌旁组)。术前未行放、化疗。组织病理类型的判断标准参照WHO胃癌的病理分类。患者年龄42～78岁，中位年龄65岁。
1.2实验方法
1.2.1标本 所有标本均于术后15 min内获得，经液氮速冻后-80℃冰箱保存。
1.2.2总RNA提取 总RNA用Trizol试剂(Invitrogen)提取；TRIzol试剂提取RNA：(1)细胞或组织加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。(2)12,000rpm 离心5min，弃沉淀。(3)按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振荡混匀后室温放置15min。(4)4℃ 12,000g离心15min。(5)吸取上层水相，至另一离心管中。(6)按0.5ml异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，室温放置5～10min。(7)4℃ 12,000g离心10min，弃上清，RNA沉于管底。(8)按1ml 75%乙醇/ml Trizol加入75%乙醇，温和振荡离心管，悬浮沉淀。(9)4℃ 8,000g离心5min，尽量弃上清。(10)室温晾干或真空干燥5～10min。(11)可用50ul H2O，TE buffer或0.5%SDS溶解RNA样品，55～60℃,5～10min。(12)测O.D值定量RNA浓度。
1.2.3茎环实时定量PCR法 采用茎环实时定量PCR法(qRT-PCR)检测miR-630的表达水平[5]，miR-630及其内参照逆转录和扩增引物序列(上海铂尚合成)。应用SYBR Green荧光定量PCR试剂来进行测量（Takara）, u6 snRNA作为内参，25 μLPCR反应体系检测miR-630的表达，qRT-PCR条件为：94℃预变性3min后，94℃ 30sec，45℃ 30sec，72℃ 30sec，总共有40个循环。全部反应共设立3个复孔。然后将各反应管中的荧光信号到达设定阈值对应的循环数即Ct值记录下来，对所得的数据三次重复求出平均值，然后用内参基因u6归一化处理，最后计算出癌与配对癌旁组织中的此物质相对表达量。
1.3统计学处理 对所得结果用SPSS16.0软件进行分析，并用 表示所得数据。设计两样本用t检验法对胃癌组织和配对癌旁组织中的miR-630表达的差异性进行分析，并对miR-630表达量和胃癌各病理参数之间的相关性进行单因素分析。如果得出P<0.05则表明其差异明显。
2.结果
2.1 miR-630在胃癌和癌旁组织中表达水平的比较 miR-630和U6内参的实时PCR产物溶解曲线均为单峰，且2%琼脂糖凝胶电泳显示PCR产物为单一条带，说明茎环RT-PCR能特异扩增miR-630片段。miR-630在癌组织的表达水平为(0.85±0.24)，在癌旁组织中表达水平为(1.63±1.02)，两者有显著差异(P<0.05)，见图1。
2.2胃癌组织中miR-630表达与胃癌病理特性之间的关系 胃癌组织中miRNA-630表达与胃癌病理特性之间的关系见表1。所得结果表明miRNA-630表达水平与淋巴结转移，肿瘤分化及脉管侵犯等之间存在显著相关性(P<0.05)，此物质的表达水平与患者的年龄、性别等相关性较小(P>0.05)。
3.讨论
miRNA是一种小分子RNA，其基因编码长度较小在转录后基因表达过程中起到一定的作用的调控，其对病变组织有抑制或促进作用，在肿瘤发生、转移等过程中也起到相应作用，在人类肿瘤的发病机制中发挥关键作用[6-7]。microRNA-630被报道在胰腺癌中发挥抑癌作用[7]，而对其是否在胃癌中发挥同样作用并不清楚。本研究结果显示miRNA-630在胃癌组织中的表达水平明显下调，其表达水平与淋巴结转移，侵犯层次、肿瘤分化以及脉管侵犯明显相关，而与年龄、性别以及TNM分期无明显相关。这与之前文献报道的关于miR-630的研究结论类似。
综上所述，本研究结果表明miR-630在胃癌组织及其癌旁组织中的表达差异显著，同时miR-630与胃癌的发生、发展及预后相关，通过检测miRNA-630在胃癌中的表达，可能会给胃癌的早期检查与判断提供一个新的临床检测参考指标。
【参考文献】
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论文作者:葛正辉, 陈洪
论文发表刊物:《医药前沿》2015年12月第35期
论文发表时间:2016/5/3
标签：胃癌论文; 组织论文; 病理论文; 肿瘤论文; 水平论文; 淋巴结论文; 定量论文; 《医药前沿》2015年12月第35期论文;