岳阳市妇幼保健院产前诊断中心 岳阳 414000
摘要：目的 调查岳阳地区α-地中海贫血基因突变携带者的发病率及其基因缺失情况。方法 对2014年1月-2016年12月在本院就诊的5689例育龄人群采用血常规参数及血红蛋白电泳分析进行初筛。对其中1229例地中海贫血初筛为高风险者运用经典的GAP-PCR以及PCR-反向斑点杂交法进行α-地中海贫血基因分析。结果 经基因诊断分析，确诊为α-地中海贫血基因突变携带者147例。α-地中海贫血基因突变携带者占总就诊者2.58％，其中缺失型一种突变型携带者占96.60％，非缺失和缺失两种突变型携带者占1.36%，非缺失一种突变型携带者占2.04％。- -SEA／aa所占比例为48.30％，-a3.7／aa所占比例为29.25％，-a4.2／aa所占比例为14.29％。结论 本研究首次报道了岳阳地区α-地中海贫血携带者的发病率，该地区为α-地中海贫血高发区，基因构成比与江西省相近，非缺失型突变占比极低。本研究对在岳阳地区开展地中海贫血筛查、基因诊断、遗传咨询及预防重型α-地中海贫血胎儿的出生具有重要的指导意义。
关键词：地中海贫血筛查；α-地中海贫血；GAP-PCR；PCR-反向斑点杂交
地中海贫血（简称“地贫”）是一种严重致死、致残的遗传性血液病，分为α-地贫、β-地贫、δβ及δ四种类型[1]。其中α-地贫临床表现为遗传性溶血性贫血，是由于16号染色体短臂末端编码α珠蛋白的基因缺陷所致，为我国南方地区发病率最高、影响最大的遗传病之一[2-3]。α-地贫包括缺失型（东南亚缺失- -SEA、右侧缺失-α3.7和左侧缺失-α4.2）及非缺失型（主要为Hb Constant Spring、HbQuong Sze和Hb Westmead 3种，简写分别为Hb CS、Hb QS和Hb WS）[4]。依据临床特征，α-地贫又可分为静止型、轻型、中间型和重型四种类型，其中重型α-地贫胎儿多在胎儿期或出生后数小时内死亡，目前重型α-地贫暂无有效治疗方法，只能采取地贫筛查及基因诊断来进行预防。近年来随着检测技术的发展，α-地贫的检出率逐渐增高，也越来越引起社会各界的关注。鉴于至今还没有对岳阳地区α-地贫详细的流行性病学调查，本研究首次对岳阳地区α-地贫发生情况及缺失基因类型作初步探讨。现将2014年1月-2016年12月本院的地贫筛查及基因检测结果报道如下。
1 资料与方法
1.1 标本来源
对2014年1月-2016年12月来本院门诊和住院部就诊的5689例患者作为调查对象进行地贫筛查，其中筛查为高风险的患者再进行地贫基因诊断。
1.2 血常规参数分析
以血常规检测中的平均红细胞体积（MCV）<80fl、平均红细胞血红蛋白含量（MCH）<27pg两个参数为标准作为地贫初筛的标准。
1.3 血红蛋白电泳测定
采用法国Sebia公司生产的Capillarys 2 Flex Piercing全自动毛细管电泳仪及其配套血红蛋白电泳试剂盒，血红蛋白电泳HbA2<2.5%或>3.5%和/或血常规分析发现MCV<80fl和/或MCH<27pg的情况进行α-地贫基因分析。
1.4 地贫基因诊断
①DNA提取：采用深圳亚能生物有限公司生产的基因组提取试剂盒进行DNA的提取；②缺失型α-地贫基因诊断：采用深圳亚能生物有限公司生产的缺失型α-地贫检测试剂盒按照说明进行PCR扩增后，对PCR产物进行琼脂糖电泳检测（琼脂糖浓度为1%）；③非缺失型α-地贫基因诊断：采用深圳亚能生物有限公司生产的非缺失型α-地贫检测试剂盒按照说明进行PCR-反向斑点杂交检测常见的ααCS、ααQS及ααWS点突变。
1.5 统计学分析
采用统计学分析软件SPSS 13.0来分析α-地贫的基因型构成比。
2 结果
2.1 地贫筛查
经血常规及血红蛋白电泳分析，发现高风险病例1229例
2.2 基因诊断
通过基因诊断分析，α-地贫共有147例，携带率为2.58％（见表一）。其中，静止型、轻型和中间型患者分别为67例（45.58％）、73例（49.66％）和7例（4.76％）。
3讨论
α-地贫主要是由于α-珠蛋白基因突变导致其编码的α链合成受到抑制从而影响α与非α肽链合成之间的平衡异常，过剩的非α肽链形成异常血红蛋白，引起溶血性贫血，呈常染色体隐性遗传[5-6]。地贫治疗有基因治疗、干细胞移植、长期正规输血、长期正规去铁治疗，其中基因治疗还未临床使用，干细胞移植价格极其昂贵而且还不一定找到合适供者，主要手段还是长期输血及去铁治疗，而对重型α-地贫患者，这两种方法基本无效。因此，在中国，尤其是中国的南方，需要对孕前夫妇进行地中海筛查及诊断，对同型α-地贫夫妇的胎儿实施基因诊断，检测为重型地中海地贫的胎儿在分娩前及时终止妊娠，对提高出生人口素质有非常重要的意义。
我国南方各省是α-地贫的高发区，尤其以广西、广东两省发生率最高，分别为14.95%及8.53%，其基因突变型具有明显的种族特征和地域差异[7-9]。岳阳地区目前还没有关于α-地贫基因携带率及构成比的大样本人群调查结果，本次利用经典的GAP-PCR法及PCR-反向斑点杂交法进行检测，α-地贫基因携带率的初步调查结果是2.58％，低于广东省和广西省。其中以缺失型地贫为主，在缺失型地贫中又以- -SEA/aa为主（48.30％），-a3.7/aa占29.25％，-a4.2/aa占14.29％。本文首次报道了岳阳地区α-地贫非缺失点突变类型，非缺失突变型α-地贫5例（3.40％），以aCSa和aQSa类型为主。本研究反映出α-地贫在岳阳地区的高发性和严重性，基因型以--SEA／aa为主，其构成比低于已报道的整个湖南人群的54.45%，且右缺失和左缺失相对常见，而非缺失α-地贫比例较低，与临近的江西省人群α-地贫基因构成比相近[10]，这极有可能与岳阳在地理位置上比较靠近江西导致，说明α-地贫的地域特征及其明显。当夫妻双方同为--SEA／aa地贫时，子代不论妊娠次数和胎儿性别，每次妊娠均有25％的可能性是重型α-地贫患儿，50％的可能性是轻型α-地贫患儿，只有25％的可能是正常儿，对人口质量造成严重威胁。
本文通过地贫筛查及基因诊断分析，发现岳阳地区α-地贫发生率比较高，对我市乃至湖南省开展遗传咨询及婚姻指导有重要的参考价值，对促进岳阳地区α-地贫防治工作，控制严重地贫患儿的发生率有一定的作用，对提高岳阳地区的人口生存质量也有重要的经济效益和社会效益。
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论文作者:陈卓,张文茂,彭赞平,祝群,邬洪梁
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2017年第11期
论文发表时间:2017/8/28
标签：地中海论文; 缺失论文; 岳阳论文; 基因论文; 携带者论文; 地区论文; 筛查论文; 《中国误诊学杂志》2017年第11期论文;