张文刚[1]2002年在《p73蛋白及凋亡在膀胱移行细胞癌中表达的意义》文中研究指明前言 膀胱癌为泌尿系统最常见的恶性肿瘤。到目前为止，对于导致膀胱癌变的细胞和分子机制仍然不十分清楚。越来越多的证据表明，致癌作用的发生必须是调控基因突变的积累，包括癌基因的激活和抑癌基因的失活或缺失。在众多的候选基因中，p53基因被认为是基因组的主要保护基因。最近发现了一个新的与p53有明显同源家族性的基因，且命名为p73(Kaghad等1997)。p73定位于1号染色体短臂。最近文献报导，p73基因可以激活P53的靶基因，包括p21~(Wad)基因，导致细胞凋亡。但p73基因在人类肿瘤中无明显的突变，这与经典的抑癌基因不同。最近Mai等发现在肺癌中p73沉默的等位基因被激活，且野生型p73过度表达，而且在不同肿瘤中有明显的表达差异，提示p73的作用或许具有组织特异性。到目前为止还没有文献报导，p73在膀胱癌中的表达及其在膀胱癌中与凋亡表达的相关性。本实验用免疫组化法及末端酶标记技术(TUNEL)，研究P73、凋亡在膀胱癌中的表达及其相关性、及与膀胱癌临床分期，病理分级之间的关系。 实验材料 1．材料：收集中国医科大学第一临床学院泌尿外科2000年3月～2001年4月期间，住院行TUR-Bt，膀胱部分切除及全切的新鲜癌组织标本，液氮冷冻，-70℃冰箱保存。全部患者术前均未行放疗、化疗及生物治疗，术后定期常规膀胱灌注(丝裂霉素)。全部标本均经病理科医生复查、证实诊断。其中男性34例(77％)，女性10例(23％)。TUR-Bt22例，膀胱癌部分切除16例，膀胱全切6例。年龄32～79岁，平均55岁，均为膀胱移行细胞癌。病理分期：表浅性膀味移行细胞癌11例，浸润性膀航移行细胞癌33例。按WHO分级：I级17例，11级13例，皿级14例。全部病例均经随访。随访时间从术后当日起至2002年3月（平均18个月入选择8例正常膀施粘膜做正常对照。所有标本均经OCT包埋，连续切片厚度为spin，10％福尔马林或丙酮固定。 Z试剂：兔抗人p73多克隆抗体，工作浓度1：5山S－P试剂盒；DAB显色剂及凋亡试剂盒均为 Santa Cruz公司产品，以上均购自北京中山生物技术有限公司。 实验方法 1．HE染色：所有标本组织均作 HE染色。 2．采用免疫组织化学 S－P法进行组织染色检测 p73蛋白 步骤：冰冻切片，丙酮固定 10分钟，PBS洗叁次，滴加 3％Hp卜孵育5分钟，PBS洗叁次，加10％正常山羊血清，室温十分钟，去血清滴加稀释一抗厂：5N，37℃孵育二小时，朋S洗叁次加二抗孵育＊分钟，mS洗3次，辣根酶标记的链酶卵白素37℃孵育 10分钟，PBS洗3次，DAB显色，自来水充分冲洗，苏木素复染，透明封片。 3．采用：末端原位标记uOD法亲和素辣根过氧化物酶法） 步骤：冰冻切片，10％中性福尔马林室温固定25分钟，PBS洗叁次，放人 3％Hp。孵育 10分钟，PBS洗叁次，放人 0．2％Titon－X一 液中，室温5分钟，蒸馏水洗样片3次，加标记缓冲液，室温15分钟，去掉，将TdT及Diction一二一dUTP及标记缓冲液混合液（1：1：8）力人，37℃孵育 60分钟，2 X SSC浸泡 15 分钟，PBS洗片 3次加封闭液，孵育 30分钟，去掉，加人 Avidin－HRP作液，37℃孵育60分钟，PBS洗叁次，DAB显色，苏木素复染，透明封片。 4．对照 ·2· 门）阴性对照以 PBS代替一抗，及以 PBS代替 TdT，Biotion－11－dUTP及标记缓冲液混合液 问）阳性对照：已知 P73染色阳性的肺癌组织切片及经 DNase处理过的肺癌凋亡阳性片 5．结果判定 P73和凋亡阳性表达均定位于细胞核内，以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞。每张切片选取4个高倍视野，每个视野计数 200个细胞，共 800个细胞，以着色细胞数 3 10％为阳性（十人无阳性细胞或阳性细胞数＜10％为阴性（一人凋亡以核内出现棕黄色颗粒为阳性。 6．统计学处理 两组间的比较用 x‘检验；相关性分析用列联表资料 X‘检验，相关系数用Peaxson系数；均数比较用方差分析。 实验结果 一p3蛋白和凋亡在膀航癌组织中的表达 本组 44例膀肤癌标本中，P73染色阳性 24例占 55％，凋亡染色阳性共23例占52％。镜下所见P73、凋亡阳性表达，其核内均呈棕黄色或棕褐色颗粒。P73及凋亡阳性表达均以细胞核为主，8例正常膀脱粘膜 p73、凋亡均无阳性染色。p73及凋亡阳性表达与病理分级之间有显着性差异河＜0．05入… 及凋亡阳性表达与临床分期之间（表浅与浸润癌）之间无显着性差异u＞O．05h凋亡指数与病理分级之间有显着差异河＜O．05h凋亡指数在p 不同表达中有显着差异沙＜0．05人 二、膀脱癌组织中… 与凋亡的相关性分析 p73与凋亡共同阳性表达19例，共同阴性表达16例，凋亡阳性而 p73阴性4例，凋亡阴性而 P73阳性 5例，Person列联系数为0．579，相关性分析P＜o．005，表明膀脱癌组织中p73和凋亡表达 ·3· －——显着相关。 叁、随访结果
赵伟[2]2006年在《胸苷酸合成酶、胸苷磷酸化酶在膀胱移行细胞癌中的表达及预后价值》文中提出目的探讨胸苷酸合成酶(TS)、胸苷磷酸化酶(TP)在膀胱移行细胞癌(TCCB)的表达情况及其临床意义,评价TS、TP预后价值,从而为肿瘤预后判断及治疗方案的选择提供帮助。方法采用免疫组织化学染色的方法(S-P法)检测54例TCCB组织及15例正常膀胱组织的TS、TP表达,通过回顾性随访,了解患者术后情况。以TS表达水平、TP表达水平、临床病理变量及3个预后变量(无复发生存率[RFS]、无病生存率[DFS]和总生存率[OS])作为研究对象,探讨它们之间的关系,绘制生存曲线,进行Cox回归分析,评价TS、TP预后价值。结果1. 54例TCCB中TS高表达率46.30%(25/54),在不同的WHO分级中,G1的TS高表达率为29.41%(5/17),G2为46.43%(13/28),G3为77.78%(7/9),肿瘤恶性程度越高,TS表达水平越高(P=0.03)。在不同的UICC分期中,TS高表达率Ta为21.43%(3/14),T1为26.32%(5/19),T2为86.67%(13/15),T3为66.67%(2/3),T4为66.67%(2/3),随着分期的升高,TS表达水平增高(P=0.00)。15例正常膀胱组织TS高表达率40.00%(6/15),与TCCB相比,差异无统计学意义(P=0.67)。2. TP在54例TCCB肿瘤细胞的阳性率为57.41%(31/54),TP表达水平与TCCB的分级、分期、复发及患者死亡无关(P>0.05)。15例正常膀胱移行上皮未见表达,与TCCB相比,差异有统计学意义(P=0.00)。3.经生存分析和Cox回归分析,肿瘤的TS表达水平与TCCB患者术后RFS、
陈培煌[3]2011年在《PTEN和MDM2基因在膀胱移行细胞癌中的表达及相关性研究》文中研究指明目的：研究抑癌基因PTEN和癌基因MDM2在不同病理分级、临床分期的膀胱移行上皮细胞癌(BTCC)组织中的表达水平及其与BTCC生物学行为的关系及临床意义,从而为肿瘤的基因治疗和抗肿瘤药物的研究提供理论依据,给癌症治疗带来新的希望。方法：膀胱移行细胞癌标本65例,另取正常膀胱组织标本10例作为对照。所有标本术前未经放、化疗或免疫治疗。全部标本甲醛固定,常规石蜡包埋,5μm厚连续切片。应用SP免疫组织化学染色法检测标本中PTEN和MDM2基因的表达。采用SPSS 13.0软件对实验数据进行统计学分析,检验水准以P<0.05为有显着性差异。结果：PTEN在膀胱移行细胞癌组的阳性率为47.69%(31/65),随着病理分级、临床分期的增高,PTEN阳性率逐渐降低(P<0.05)；PTEN在10例正常膀胱组织中阳性表达率为100%。MDM2在膀胱移行细胞癌组的阳性率69.23%(45/65),随着病理分级、临床分期的增高,MDM2的阳性率逐渐降低(P<0.05),在膀胱移行细胞癌中,PTEN和MDM2的表达呈明显负相关(r=-0.42,P<0.05)。结论：膀胱移行细胞癌组织中PTEN和MDM2的异常表达在膀胱癌的进展中起重要作用,观察二者的表达情况,对膀胱肿瘤的早期诊断,预后判断及指导治疗都具有重要意义。
参考文献：
[1]. p73蛋白及凋亡在膀胱移行细胞癌中表达的意义[D]. 张文刚. 中国医科大学. 2002
[2]. 胸苷酸合成酶、胸苷磷酸化酶在膀胱移行细胞癌中的表达及预后价值[D]. 赵伟. 广西医科大学. 2006
[3]. PTEN和MDM2基因在膀胱移行细胞癌中的表达及相关性研究[D]. 陈培煌. 福建医科大学. 2011