虞洋
辽宁省本溪市疾病预防控制中心 117000
摘要：目的：对比酶底物51孔定量盘法和乳糖多管发酵法检测水中大肠埃希菌的结果。方法：用酶底物51孔定量盘法和乳糖多管发酵法分别检测50份水标本，比较大肠埃希菌检出率和检测周期，采用适用性实验法比较两种检测方法的适用性。结果：酶底物51孔定量盘法和乳糖多管发酵法的适用性基本一致，但酶底物51孔定量盘法的大肠埃希菌检出率更高（92.00%），检测周期更短（24.00±0.00小时）（p值＜0.05）。结论：检测水中大肠埃希菌时，采用酶底物51孔定量盘法更加方便准确。
关键词：酶底物51孔定量盘法；乳糖多管发酵法；大肠埃希菌
前言：
生活水平的提高使得人们对饮用水质量越来越重视，饮用水中可能会存在多种微生物，其中最多的是大肠埃希菌，在温血动物的肠道中大量存在，容易引发肠道疾病[1]，禽畜放养增加了水资源的污染，威胁人们的身体健康。滤膜法、酶底物51孔定量盘法、乳糖多管发酵法是常用于检测大肠埃希菌的方法，本文旨在对比酶底物法和乳糖多管发酵法的应用价值。
1 材料和方法
1.1 材料
【设备】：紫外线灯（波长为366nm，功率为6w）、水浴箱（温度为44.5±0.5℃）、培养箱（温度为36.5±0.5℃）、封口机、51孔定量盘。
【试剂】：大肠埃希菌标准菌株、MMO-MUG培养基粉末、EC-MUG培养基、乳糖蛋白胨，根据GB/T 5750.12-2006检验流程和方法完成配制、检测。
1.2 方法
【酶底物51孔定量盘法】：用100ml的无菌稀释瓶量取100ml水样，加入2.7g±0.5gMMO-MUG培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解（共10支）。将溶解后的水样全部倒入51孔无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以赶除空穴内气泡，然后用封口机封口。放在培养箱（温度为36.5±0.5℃）中培养24个小时，大肠埃希菌阳性标准：水样变为黄色，并且出现蓝色荧光。
【乳糖多管发酵法】：水样首先进行36.5±0.5℃恒温培养箱培养24±2个小时，再将初发酵产气或产酸的管进行大肠埃希菌检测。用灼烧灭菌接种环将其液体接种在EC-MUG管中，放在培养箱（温度为44.5±0.5℃）中培养24±2个小时，培养后，用紫外线灯（波长为366nm，功率为6w）在暗处照射EC-MUG管，大肠埃希菌存在的标准是：产生蓝色荧光。
1.3 观察项目
比较两种检测法的适用性[2]，方法如下：将对应标准菌株混悬液加入到灭菌试管中（共60支），共6种类型菌株，10支/1菌株，酶底物51孔定量盘法用MMO-MUG粉末，培养24个小时，乳糖多管发酵法用灭菌乳糖蛋白胨、无菌吸管和EC-MUG培养基，培养48个小时，与空白试验对照。
记录两种检测方法的检测周期，分别检测50份水标本，比较大肠埃希菌的检出率。
1.4 统计学处理
文中计数、计量资料用SPSS20.0软件卡方、t检验，P＜0.05代表对比数据存在显著差异。
2 结果
2.1 适用性
如表1所示，两种检测法的适用性都较高。
3 讨论
肠杆菌属、克雷伯菌属、柠檬酸菌属、埃希菌属组成了“耐热大肠菌群”，其中埃希菌属占比最大，和人们的日常活动关系密切。现在人们对饮用水的要求越来越高，以往常采取乳糖多管发酵法检测水中大肠埃希菌，该检测方法需要在44.5±0.5℃、36.5±0.5℃两个温度中培养各24个小时，检测周期长达48个小时。大肠埃希菌会产生β-葡萄糖醛酸酶，将MUG分解[3]，在紫外线灯光下可以产生荧光。酶底物51孔定量盘法则是利用上述原理判断水样中有无大肠埃希菌，检测周期只需24个小时。
滤膜法、乳糖多管发酵法、酶底物51孔定量盘法都是水中大肠埃希菌检测的国标法，滤膜法特异性差，容易受到浊度和污染度的干扰，并且检测时间过长，乳糖多管发酵法过程繁琐，操作复杂，酶底物法在废水、瓶装水、饮用水等多种水样大肠埃希菌检测中都可应用[4]，操作简单，无需确证试验，灵敏度高，本次结果部分证实，酶底物51孔定量盘法和乳糖多管发酵法都有较高的适用性，但是酶底物51孔定量盘法检测周期更短，检出率更高。
总之，和乳糖多管发酵法相比，酶底物51孔定量盘法应用在水中大肠埃希菌检测中价值更高。
参考文献：
[1]武利平，李晓路，刘聪颖等.两种方法检测水中总大肠菌群和大肠埃希菌的等效性分析[J].卫生研究，2017，46（5）：793-796.
[2]刘信勇，陈超，沈新宇.固定酶底物法对医疗废水中粪大肠菌群监测的适用性研究[J].环境研究与监测，2013，26（4）：16-18.
[3]朱培瑜.固定底物酶底物法与多管发酵法和快速纸片法测定水中粪大肠菌群（耐热大肠菌群）的比较[J].四川环境，2014，33（2）：30-33.
[4]邓永宏.酶底物法检测生活饮用水中大肠菌群的探讨[J].预防医学情报杂志，2016，32（1）：12-15.
论文作者:虞洋
论文发表刊物:《中国误诊学杂志》2018年7月19期
论文发表时间:2018/8/29
标签：大肠论文; 乳糖论文; 定量论文; 多管论文; 适用性论文; 水中论文; 滤膜论文; 《中国误诊学杂志》2018年7月19期论文;