陈晓曼 薛小萍（通讯作者）
（江苏省苏北人民医院临床输血科 江苏扬州 225001）
【摘要】目的：通过分析2014年7月至2015年6月送检的261例新生儿溶血病筛查标本的实验室检测结果，探讨发生ABO新生儿溶血病( hemolytic disease of the newborn ，HDN)的血型模式，溶血三项试验之间阳性率的差异，以及追溯孕妇产前IgG血型抗体效价来分析其与ABO-HDN发病的相关性。方法：均采用微柱凝胶法。结果：261例送检标本ABO-HDN的发病率为26.8%（70例），以A型较多;70例ABO-HDN溶血三项试验中红细胞抗体释放试验阳性率最高;70例ABO-HDN中，孕妇产前IgG抗体效价越高所占有的比率越大。结论：及早进行相关实验室相关检测，及早对患儿治疗对阻止溶血的进一步发生极为重要。
【关键词】新生儿溶血病；溶血三项试验；IgG抗体效价；
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2015）20-0101-03
Laboratory tests of related analysis ABO newborns hemolytic disease. Chen Xiaoman Xue Xiaoping. Clinical Blood Transfusion Department of Subei Peoples Hospital ,Yangzhou, Jiangsu province, 225001,China
【Abstract】Objective Through the analysis in July 2014 to June 2015 were 261 cases of neonatal hemolysis disease screening specimen of laboratory testing results, and discussion in ABO newborns hemolytic disease (hemolytic diseases of the newborn, HDN) blood type model, the difference of positive rate between three hemolysis test, blood type and traces the prenatal IgG antibody titer to analyze its correlation with ABO HDN - come on. Method Adopted micro column gel method . Results The incidence of 261 cases of samples ABO HDN - 26.8% (70 cases), to model A more . In 70 cases of ABO HDN - three hemolysis test ,erythrocyte antibody release test positive rate highest; Of 70 patients ABO - HDN, the higher the prenatal IgG antibody titer possession ratio is larger. Conclusion Related laboratory tests as early as possible, as soon as possible for children is very important to prevent hemolysis further treatment. .
【Key words】Hemolytic disease of the newborn; Three hemolysis test ; IgG antibody titer
新生儿溶血病（HDN）常发生于胎儿期及新生儿早期[1]，主要原因为母婴血型不合，孕母体内IgG类血型抗体通过胎盘进入胎儿体内，胎儿红细胞被母亲的同种抗体包被，这种抗体是针对胎儿红细胞上父源性的抗原，被包被的红细胞在分娩前后加速破坏，造成胎儿发生以溶血为主要损害的一种被动免疫性疾病，可发生严重的神经系统后遗症。HDN又以ABO血型不合引起的溶血病（ABO-HDN）为多见，据研究报道得，将孕妇的产前检查和新生儿溶血三项试验结合起来进行风险评估以及相应治疗能有效降低新生儿溶血病的发病风险[1]。现笔者对ABO-HDN的实验室检测结果及孕母产前IgG血型抗体效价进行分析，报告如下。
1.材料与方法
1.1 标本来源
2014年7月至2015年6月送检的怀疑为ABO血型不合引起的高胆红素血症新生儿261例。出生天数0～5天。
1.2 试剂与仪器
戴安娜全自动血型仪，戴安娜血型卡及抗球蛋白卡，DG Therm孵育器，DG Spin离心机，SC-3616低速离心机。A，B，O红细胞悬液为本科自配。
1.3 检测方法均采用微柱凝胶法检测。
1.3.1新生儿及孕母血型均用戴安娜全自动血型仪进行检测。
1.3.2新生儿溶血三项：①游离抗体测定（简称游离）：各孔中加入50ul 1%自制的A/B/O型红细胞悬液和50ul标本血清；②红细胞抗体释放试验（简称放散）：取洗涤后的标本红细胞450ul加450ul生理盐水，于56℃水浴10分钟后立即离心，各孔中加入1%自制的A/B/O型红细胞悬液各50ul，然后各孔加放散液尽量加满。③直接抗球蛋白试验（简称直抗）：将洗涤过的标本红细胞配制成1%的红细胞悬液，吸取50ul加入孔中。④将上述加样好的戴安娜抗球蛋白卡至戴安娜专用孵育器孵育15分钟，孵育好后至戴安娜专用离心机离心，判定结果。
1.3.3孕妇IgG抗体效价测定：①20ul2-巯基乙醇（2-Me）加20ul标本血浆，盖上盖子温育30分钟。②排四根管子，第一管加300ul生理盐水，后三管加150ul生理盐水。③加第一步温育过的血浆20ul到第一管中，混匀后取出150ul加入第二管中，依次稀释到第四管（稀释倍数为1∶32、1∶64、1∶128、1∶256）。④取戴安娜抗人球蛋白卡，抗A每孔加50ulA型1%红细胞悬液，抗B每孔加50ulB型1%红细胞悬液，然后各加50ul后三管倍比稀释过的血浆，至戴安娜专用孵育器孵育15分钟，孵育好后至戴安娜专用离心机离心，判定结果。
1.4 结果判读
1.4.1试验阴阳性结果判读阳性结果:红细胞凝集块位于微柱上端或分布在凝胶中。阴性结果: 红细胞完全沉降至微柱底部。
1.4.2 ABO-HDN结果判读单个放散试验阳性，放散试验阳性合并游离试验和（或）直抗试验阳性，放散试验阴性但游离试验和直接抗体试验同时阳性。这3种情况均可确诊为ABO-HDN。
2.结果
2.1 261例送检标本确诊为ABO-HDN70例，其中A型患儿44例，B型患儿26例，各占阳性病例的62.9%和37.1%。见表1。
表1 70例ABO-HDN新生儿的血型分布
3.讨论
新生儿溶血病是孕妇和胎儿之间血型不合而产生的同种免疫性疾病，主要以ABO血型不合多见，是引起HDN的主要原因，也是临床新生儿高胆红素血症的常见病因[2]。ABO新生儿溶血病主要见于O型母亲孕育了A型或B型胎儿时，主要原因是O型母亲较其他血型母亲具有更多量的IgG类ABO血型抗体，进入胎儿体内也就更多，引起HDN的机会就会更大。本研究中，最终确诊为ABO-HDN的血型模式均为O-A和O-B，未发现其他血型模式。确诊的70例ABO-HDN中有44例为A型患儿，26例为B型患儿，A型患儿较多。这可能因为新生儿红细胞上的A 位点上的抗原决定簇比 B 位点多，所以 A 型患儿比B 型患儿发生ABO-HDN 的几率相对更大一些，研究结果与文献[3-4]报道相符。
在ABO-HDN溶血三项试验中，游离试验是检测新生儿血清中是否存在针对其红细胞不相配合的ABO 以外抗体和（或）IgG抗-A（B），单一游离试验阳性并不能代表患儿红细胞已被致敏，但存在致敏红细胞的可能性，起到辅助诊断的作用，一定程度上可提示病情的严重程度。直抗试验阳性提示新生儿红细胞已被IgG型抗体致敏，是诊断新生儿溶血病的有力证据，其阳性强度与发生溶血程度呈正相关。但单一直接抗体试验阳性并不能证明是ABO血型系统引起的新生儿溶血病，因为其他血型系统抗体引起的新生儿溶血病以及自身免疫性溶血病等疾病也会引起直接抗体试验阳性，只有合并其他1项或2项才能证明是ABO-HDN。在ABO-HDN中，直接抗体试验阳性率并不高，本研究阳性率只有15.7%，这是由于新生儿红细胞上A（B）抗原密度较低，所以被结合的抗体也较少，影响了阳性检出率，使得ABO系统HDN直抗试验通常为阴性或弱阳性。在溶血三项中，放散试验阳性反映新生儿红细胞已经受累，提示新生儿红细胞结合了来自母体的IgG抗体，是诊断新生儿溶血病的直接证据。放散试验实为直抗试验的放大试验。本研究中，将放散液量加大，尽量加满每孔，使阳性率检出提高。放散试验是3项试验中敏感性最高的，此试验一旦出现阳性结果就表明患儿红细胞上包被了IgG型血型抗体，即可明确诊断为HDN[5-6]。新生儿溶血三项试验是诊断HDN极为重要的试验，应及早筛查，以便患儿得到及早治疗，阻止溶血进一步发展，减轻高胆红素血症对新生儿神经系统的危害尤为重要。
在本研究中，笔者发现在70例确诊为ABO-HDN的新生儿中，其母亲产前IgG血型抗体效价为1∶64的仅有2例（占2.9%），抗体效价为1:128的有9例(占12.9%)，抗体效价≥1∶256的有59例（占84.3%）。抗体效价越高，发生ABO-HDN的几率越大，绝大多数抗体效价都超过了1∶256，抗体效价小于1∶64的相对较为安全。所以在产前IgG血型抗体效价小于1∶64的一般不做特殊治疗，对于抗体效价较高的应及早进行预防性治疗并动态监测抗体效价水平，降低抗体效价，预防新生儿溶血病的发生。但仍有个别抗体效价小于1∶64时，发生了ABO-HDN，而抗体效价超过1：256并且母婴血型不合时，新生儿却未发生ABO-HDN。据有关文献报道：这可能与致敏新生儿红细胞上的IgG亚型有关[7]。IgG抗体可分为4种亚型，其中IgG1和IgG3免疫性最强，IgG2和IgG4则不能免疫，因此，如果是由IgG2与IgG4引起的孕妇血清IgG抗体增高，并不会导致HDN的发生[8]。另外在某些胎儿（分泌型）的体液中还含有可溶性A或B物质，这种物质能中和抗A或抗B抗体，起到保护胎儿红细胞，起到阻止ABO-HDN的发生或缓解其临床表现的作用[9]。
综上所述，对孕妇产前进行抗体效价动态监测，根据检测结果进行预防性用药，同时产后及时对高危儿做新生儿溶血病实验室相关检测，这有助于临床及时诊断新生儿溶血病，制定治疗方案，减少溶血给患儿造成的伤害。
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论文作者:陈晓曼,薛小萍（通讯作者）
论文发表刊物:《心理医生》2015年20期供稿
论文发表时间:2016/5/13
标签：抗体论文; 新生儿论文; 红细胞论文; 血型论文; 阳性论文; 患儿论文; 胎儿论文; 《心理医生》2015年20期供稿论文;