南京医科大学大学第二附属医院210011
【摘要】目的:通过比较四种梅毒检测方法的敏感性和特异性，选择高效、简便、特异梅毒感染诊断方法。方法:通过回顾性研究，采用甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST)、梅毒螺旋体特异性抗体酶联免疫吸附试验(TP—ELIsA)、梅毒螺旋体特异性抗体明胶凝集试验(TPPA) 、TP-胶体金试条4种方法对梅毒患者血清进行检测.结果:TRUST、TP-ELISA、TP-胶体金试条、TPPA敏感性分别为65％、96.7％、93.3％和98.3％，特异性分别为86.7％、95％、98、3％和100％.结论:TRUST法敏感性及特异性相对较差；TP纸条敏感性不如TP-ELISA及TPPA，但高于TRUST；TPPA在敏感性及特异性方面均高于其他三种方法，是目前公认的梅毒确证实验.
【关键词】梅毒螺旋体抗体;TRUST；TP—ELIsA；TPPA；TP-胶体金
【中图分类号】R446.6 【文献标识码】A 【文章编号】
梅毒(syphil)是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum，TP)感染引起的一种慢性全身性性传播疾病，该病病程长，危害大，临床表现复杂，呈多样性，几乎可以累及全身各个器官。近年来，我国梅毒的发病人数呈急剧上升趋势 ，严重危害了人类和社会的健康。梅毒的诊断需依据病史、临床表现、血清学检测和损伤部位的鉴定。血清学检测是临床最为常用的检测方法，寻求简单、可靠、经济的检测方法一直是研究者们努力的目标。本文通过回顾性研究，应用TRUST、TP-ELISA、TPPA、TP抗体胶体金试条四种方法对患者和正常对照者血清检测，比较得出实验室评价，现将方法结果报告如下。
1 材料与方法
1.1血清标本 605例病例组均来自本院2014年7月一2015年月本院皮肤科门诊及住院手术前病人中确诊梅毒患者,60例正常对照血清标本取自体检部健康体检人群。
1.2试剂 TRUST试剂盒为上海荣盛生物技术有限公司生产；TP抗体一ELISA诊断试剂盒(双抗原夹心法)为厦门英科新创生物科技有限公司生产；TPPA为日本富士株式会社生产；TP抗体胶体金试验条(TP试条)由杭州艾康生物有限公司生产。
1.3主要仪器 奥斯邦全自动酶免分析仪 Micro Lab Star（Hamihon公司 德国）WALLAC多用震荡器 离心机
1.4方法
1.4.1 TRUST 取血清50 ul和经生理盐水倍比稀释的血清50ul(常规血清标本用无菌生理盐水作倍比稀释至1：16，滴度高者需继续稀释)，加抗原悬液50 ul，在梅毒旋转仪上以100r／min振荡8min，室温<15℃可延长2-3min，肉眼观察结果，有凝集者为阳性，反之为阴性， 阳性滴度即是出现凝集的最高稀释度。
1.4.2 TP-ELISA 按照说明书在奥斯邦全自动酶免分析系统编制运行程序进行检测。
1.4.3 TP抗体胶体金(TP试条) 加一滴血清（约25ul）于试条内，加缓冲液两滴（约50ul），15min观察结果。
1.4.4 TPPA 室温条件下,在U型板上用稀释液将血清依次稀释，然后分别加入致敏和未致敏的明胶颗粒，振荡数秒，静置2h，观察结果。
2 结果
2.1 梅毒病人测定结果 四种方法检测120例血清标本结果见表1。
敏感度=梅毒患者中阳性例数／梅毒患者总例数；特异性=非梅毒患者中阴性例数／非梅毒患者总例数；阳性预测值：梅毒患者中阳性例数／阳性结果总例数；阴性预测值：非梅毒患者中阴性例数／阴性结果总例数
3讨论
在梅毒的诊断中，血清学试验具有重要意义。当人体感染梅毒螺旋体后4～10周左右，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体(主要是IgM和IgG)和抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体(主要是IgG、IgM)。血清学试验主要包括两种：非特异性试验如RPR、TRUST；特异性试验如TPHA、TPPA、FTA-ABS等，随着科学技术的进步，现除过筛试验外，还建立了多种TP抗体的确证试验，所用抗原有的是纯化的TP抗原，有的是重组的TP抗原 ，这些抗原均为TP特异抗原，因而所测定的抗体均为TP特异性抗体。
本次实验采用四种方法对60例梅毒患者及60例对照组测试结果表明 ，TRUST、TP-ELISA、TP-胶体金试条、TPPA敏感性分别为65％、96.7％、93.3％和98.3％，特异性分别为86.7％、95％、98、3％和100％.TRUST法敏感性及特异性相对较差，考虑其原因主要是，TRUST试验是测定血清中反应素的非特异性试验，采用非特异性类脂质抗原(心磷脂)检测抗心磷脂抗体，此类抗原的大部分可以与其他非特异性抗体有交叉反应，易受某些传染病及自身免疫性疾病等因素的影响，从而出现生物学假阳性，但因其成本低廉、检测快速、直观，作为梅毒的初筛试验及在观察疗效方面有着重要意义。TP纸条在四种方法中最为简便,快速，敏感性不如TP-ELISA及TPPA，但高于TRUST,适用于用于健康人群的体检筛查。TP-ELISA法利用基因重组梅毒螺旋体的特异性抗原TP47(TmpA)和TP17包被酶标板孔，采用双抗原夹心法检测梅毒螺旋体特异性IgM 和IgG抗体。此方法可应用于自动化检测系统，可以进行大批量的检测，是目前筛查和检测梅毒的一种良好方法。实验中亦发现TP-ELISA灰区阳性的非梅毒患者经TPPA确证为阴性，与徐龙珍等报道相一致[1]。TPPA在敏感性及特异性方面均高于其他三种方法，是目前公认的梅毒确证实验，但其操作复杂，费时长，难以做到自动化,限制了其大规模筛查.
综上所述笔者认为，在梅毒检测中可以应用TP-ELISA和TRUST、TP纸条、TPPA联合检测的方法，TP-ELISA阳性的标本可用TP试条复查，兼做TRUST试验以观察滴度及疗效，TP-ELISA灰区的病例应加做TPPA试验加以验证，从而为临床梅毒的诊治提供更可靠准确的实验室参考。目前梅毒抗体定量检测已在本实验室开展，方法学评价文献也有过报道[2.3.4]，本实验室也已开展，笔者会在后续工作中进行方法学比对，得出最理想的梅毒抗体检测方案。
参考文献
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[2]郑炘,刘纹,刘晓敏.ARCHITECT-i2000SR全自动化学发光免疫分析仪检测梅毒螺旋体特异性抗体临床应用评价[J],国际检验医学杂志,2012,33(18):2246-2247
[3]王雪春,陈灵芝,于琴,孙爱华.化学发光法检测受血者梅毒螺旋体特异抗体的方法学评价[J].中华实验和临床病毒学杂志,2013,27(1):70- 72
[4]熊继红,卢建强,赵立光,张秀明.化学发光法与ELISA法检测梅毒抗体的一致性比较[J].检验医学与临床,2011,8(3):284- 285
论文作者:王良梅 李丽霞 秦峰
论文发表刊物:《解放军预防医学杂志》2015年第5期供稿
论文发表时间:2015/11/25
标签：梅毒论文; 抗体论文; 特异性论文; 抗原论文; 血清论文; 螺旋体论文; 例数论文; 《解放军预防医学杂志》2015年第5期供稿论文;