一、鹅胚胎体外培养的研究（论文文献综述）
万政伟[1]（2021）在《人持续性G病毒二型在中国人群中的检出及其感染性克隆初步探索》文中研究指明研究背景人持续性G病毒二型（Human Pegivirus Type2,HPgV-2）于2015年英国和美国研究团队首次报道。进化分析发现该病毒属于黄病毒科病毒,与人感染的HPgV（GBV-C）同属于黄病毒科Pegivirus属病毒。目前关于HPgV-2的研究主要是通过观察性研究描述该病毒在人群中的感染特点而HPgV-2病毒的细胞嗜性和致病性尚无任何研究报道。研究发现,HPgV-2主要经血传播,尤其是静脉注射感染。该病毒大多与丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）共感染,HCV人群中HPgV-2核酸阳性率为0.29%-2.4%。健康献血员人群、HBV单独感染者、HIV-1单独感染者中很少报道有HPgV-2核酸阳性者。Pegivirus属病毒除了人感染的HPgV（GBV-C）和HPgV-2外,也有陆续报道其他动物感染的相关病毒。和其他种属感染的Pegivirus病毒一样,HPgV-2很难在体外进行分离培养,这直接影响该病毒感染机制及生物学特性研究。研究目的和意义（1）建立HPgV-2的血清学和核酸检测方法,筛查相关人群,探索HPgV-2在不同人群中的感染情况等流行病学特征。（2）扩增国内HPgV-2病毒株全序,分析该病毒基因组特点和分子进化关系。（3）探究HPgV-2对人群宿主的潜在危害及细胞嗜性。（4）尝试建立HPgV-2的体外培养体系,进一步研究该病毒的生物学特性以及和HCV/HIV-1共感染关系。研究内容及方法1、人群调查（1）建立HPgV-2的血清学和核酸检测方法,筛查该病毒在不同人群中的感染情况。（2）扩增HPgV-2的全长基因组序列,并分析该病毒序列变异情况和分子进化关系。2、病毒的致病性和细胞嗜性研究（1）比较HPgV-2感染者肝功能血清学指标,探索HPgV-2对肝脏损伤指标的影响。（2）随访HPgV-2的HCV/HIV-1感染患者,观察HPgV-2的感染状态。对比HCV病毒清除前后肝功能血清指标和肝脏病理改变结果,探索HPgV-2与肝脏损伤的关系。（3）在随访过程中获取患者的肝脏组织和PBMCs,通过免疫组化和核酸原位杂交及核酸扩增方法确定HPgV-2的细胞嗜性。3、感染性克隆构建,探索体外培养方法（1）分析质粒载体和HPgV-2全基因组序列,确定单克隆位点,并合成单克隆位点序列,构建含单一克隆位点的质粒骨架载体。（2）运用PCR方法分段扩增HPgV-2全基因组序列,采用酶切连接方法将扩增片段逐一插入载体,构建HPgV-2全基因组克隆。（3）获得的HPgV-2全基因组克隆,经线性化及体外转录获得病毒全基因组RNA。（4）利用脂质体转染方法将HPgV-2全基因组RNA转染进入细胞系,经过细胞系培养及核酸和抗原检测等方法确定病毒是否体外拯救成功。主要结果1、HPgV-2的基因变异及感染特点研究（1）HPgV-2的抗原和核酸检测方法建立本研究合成了三条HPgV-2基因组部分序列多肽（P4,P9,P16）,以此建立了酶联免疫吸附试验（ELISA）来检测血清中的anti-HPgV-2抗体。参考已报道的HPgV-2基因组序列,设计了针对HPgV-2 5’UTR和NS3区域的巢式PCR扩增方法以及该病毒的核酸定量qRT-PCR检测方法。（2）HPgV-2的基因变异性分析本研究采用RT-PCR分段扩增方式获得6条HPgV-2近似全长核酸序列。通过基因组进化分析,发现目前已发现的国内HPgV-2株和国外毒株之间的变异非常小（93.6%-97.8%）。同时,HPgV-2在进化关系上和蝙蝠体内的持续性G病毒最为接近。（3）HPgV-2人群感染特点分析本研究收集了不同人群横断面血清样本共计8198份,检测结果提示HPgV-2和HCV、HIV-1感染相关;HCV人群中,HPgV-2抗体阳性率（1.23%）是健康献血员的8.23倍。在HCV/HIV-1共感染人群中,HPgV-2抗体阳性率（8.91%）是健康献血员的59.66倍,是HCV人群的7.25倍;HPgV-2核酸阳性率（3.47%）是 HCV 人群（0.29%）的 12.08 倍。2、HPgV-2在人体内感染状态、致病性及细胞嗜性研究（1）观察到HPgV-2在人体内能形成持续性感染及一过性感染两种状态,且能够独立于HCV,HIV-1形成稳定感染本研究收集了南方医院240例HCV感染者和广州市第八人民医院512例HCV/HIV-1共感染者样本,对HPgV-2核酸阳性患者进行纵向观察,发现HPgV-2在病人体内形成长达5年的持续性感染状态。同时,也观察到HPgV-2病毒从阳性到转阴的一过性的感染状态。当HPgV-2/HCV共感染患者接受直接抗病毒药物（DAAs）治疗时,HPgV-2不受DAAs药物抑制,能够在患者体内维持稳定感染状态;HCV病毒清除后继续随访半年,HPgV-2仍能在患者体内稳定存在。（2）HPgV-2对肝脏指标（肝功能血液指标、病理指标）HCV感染者中,HPgV-2 RNA阳性和阴性感染者之间ALT水平没有显着性差异（P=0.776）;HPgV-2血清学阳性感染者与阴性感染者ALT水平无显着性差异（P=0.298）;HPgV-2抗体水平高低（OD≥1.0或者OD<1.0）感染者ALT水平也没有显着影响（P=0.623）。HPgV-2/HCV合并感染患者接受DAAs治疗后,HCV被清除而HPgV-2在患者体内单独持续感染过程中,对比感染者肝脏指标和病理特征发现,HPgV-2未导致患者的肝脏指标异常或明显肝脏病理特征改变。（3）HPgV-2的细胞嗜性免疫组化实验只在肝组织浸润的淋巴细胞内检测到HPgV-2抗原信号;RNA原位杂交在肝脏细胞和浸润淋巴细胞中都能检测到HCV信号,但只在浸润淋巴细胞中检测到微弱的HPgV-2 RNA信号。RNA正负链原位杂交实验在外周血PBMC细胞中检测到HPgV-2正负链RNA信号（阳性率分别为8%-10%,5%-6%）以及HCV病毒的正负链RNA信号（阳性率分别为6%-11%,4%-6%）。CD4+、CD8+T细胞及B淋巴细胞亚群经流式分选富集后利用HCV/HPgV-2正负链RNA扩增实验主要在B淋巴细胞亚群中扩增到HCV和HPgV-2正负链 RNA。3、HPgV-2感染性克隆构建本研究分段扩增了 HPgV-2全基因组并通过单一酶切位点逐一连入骨架载体,成功获得了 HPgV-2全长克隆。HPgV-2全长克隆经体外转录获得病毒全基因组RNA后转染Vero细胞,经核酸和抗原检测显示我们构建的全长克隆能够拯救出HPgV-2,但病毒传代发现不能形成持续有效的感染。结论1、本研究确定中国人群中存在人持续性G病毒二型（HPgV-2）感染。目前已发现的中国HPgV-2株和国外HPgV-2病毒株基因序列高度保守。HPgV-2主要感染HCV人群,合并HIV-1感染显着增加HCV人群中HPgV-2感染率。2、HPgV-2在感染者体内能形成长达5年以上的稳定感染;DAAs药物或不能抑制HPgV-2复制;HPgV-2可以不依赖HCV/HIV-1病毒在患者体内形成单独的持续感染状态。3、HPgV-2不感染肝脏细胞,也不引发明显的肝脏损伤;研究结果首次发现HPgV-2是一个淋巴细胞嗜性病毒,且主要感染B淋巴细胞。4、本课题成功构建了 HPgV-2基因组全长克隆,但尚不能稳定组装成具有持续感染性的病毒颗粒。
曾雪花[2]（2020）在《CTRP3对鹅骨骼肌细胞成肌分化的调控作用》文中研究指明鹅肉是理想的高蛋白、低脂肪和低胆固醇的健康食品,深受消费者青睐,因此开展鹅产肉性能品种改良具有重大的经济效应。探究在鹅骨骼肌组织中发挥重要作用的功能基因,并深入了解鹅骨骼肌生长发育调控的分子机理,是开展遗传育种的重要基础。CTRP3（C1q/tumor necrosis factor-related protein-3）是近期发现的参与肌肉生长发育过程的重要因子,与骨骼肌细胞分化调控密切相关,但其在鹅骨骼肌发育过程中的调控作用尚未明晰。本研究以浙东白鹅为研究对象,包含以下部分研究:（1）通过酶消化法体外分离骨骼肌卫星细胞,利用骨骼肌卫星细胞增殖期特异性标记基因进行免疫荧光鉴定,并且诱导骨骼肌卫星细胞分化,建立在体外细胞培养条件下稳定传代的细胞分化模型;（2）通过qRT-PCR检测鹅胚胎发育过程中CTRP3基因的表达情况,并检测该基因在骨骼肌卫星细胞诱导分化后的表达情况;利用真核表达载体pCDNA3.1构建CTRP3基因过表达载体,通过过表达和沉默CTRP3基因,检测CTRP3及其与分化相关标志基因的mRNA和蛋白表达水平;（3）利用生物信息学软件预测和筛选可能靶向调控CTRP3基因的重要miRNA,通过骨骼肌卫星细胞的转染试验,结合qRT-PCR和Western blot检测候选miRNA以及CTRP3基因的表达,进一步推测候选miRNA对CTRP3基因的调控作用。结果表明,（1）体外成功分离培养鹅骨骼肌卫星细胞,并构建能够稳定传代的体外分化模型,用于后续相关实验研究;（2）成功获得了鹅骨骼肌发育过程CTRP3的表达谱;通过过表达和干扰试验,进一步证实CTRP3能够调控鹅骨骼肌卫星细胞的分化;（3）通过生物信息学预测并结合实验初步分析发现miR-129-5p可能作用于鹅CTRP3基因。
李楠,林忠[3]（2019）在《体外胚胎培养是胚胎工程技术的关键环节》文中指出背景:体外早期胚胎的培养是胚胎工程技术的主要环节之一。目的:近年来,随着科学家的研究对胚胎发育和体外胚胎培养有了新认识和进展。方法:由第一作者检索1990年1月至2018年10月PubMed数据库相关文献,检索词为"Embryo Engineering;Pre-implantation Embryo;In vitro embryo culture;Assisted Reproductive Technology;ART",文献语言限制在英文。根据纳入排除标准,最终纳入76条进行分析探讨。结果与结论:在严格遵循医学伦理学原则条件下开展的胚胎体外培养体系是动物胚胎工程的一项关键技术,是保证运用胚胎生物技术顺利生产体外胚胎的基础,通过改良体外胚胎培养体系,可以使体外培养环境更加接近体内环境,提高体外胚胎质量。
刘逍,娄玉杰[4]（2018）在《吉林白鹅毛囊发育及IGF-1、EGF基因对其发育调控的影响》文中研究说明旨在研究吉林白鹅毛囊发育以及IGF-1、EGF基因对毛囊发育过程调控的影响。选择保存7d内的吉林白鹅种蛋300枚,饲养到出雏后28d。分别在孵化期23（E23）,27（E27）d,出雏后0,1,4,7,14,21,28d取样,共9个处理组,将E23作为对照组,每个处理6个重复,采用单因素完全随机试验设计,测定初级毛囊和次级毛囊密度、毛球直径、IGF-1、EGF基因在皮肤中的相对表达量。结果表明,吉林白鹅E2328d,初级毛囊密度显着降低（P<0.05）,初级毛囊毛球直径显着增加（P<0.05）,次级毛囊密度显着增加（P<0.05）,次级毛球直径显着增加（P<0.05）。吉林白鹅胸部为主要产绒部位。吉林白鹅E2328d皮肤中IGF-1、EGF基因相对表达量显着增加（P<0.05）。IGF-1和EGF基因可以促进次级毛囊的发育,对吉林白鹅毛囊发育起到了调控的作用。
孙思怡,李琦,张帆,韩淑敏,李雁冰,李井春,魏国生[5]（2018）在《动物早期胚胎体外培养的研究进展》文中研究说明胚胎的体外培养是动物胚胎工程技术的基础环节之一,也是胚胎移植重要的前期基础。由于在体外培养过程中,早期胚胎对环境的变化较为敏感,导致早期胚胎发育到囊胚的成功率不高,因此,如何提高囊胚率是核心问题。就动物早期胚胎体外培养的培养环境、胚胎培养液添加物以及胚胎体外培养体系等方面的研究进展进行综述,同时对胚胎体外培养技术目前存在的一些问题进行了总结,并对其前景做了展望。
施超[6]（2016）在《TSA对小鼠早期胚胎体外发育的研究》文中指出目的小鼠是生命科学研究最常用的模型动物,小鼠早期胚胎体外发育技术在许多的领域都起着重要的作用,比如发育生物学,胚胎移植等。小鼠早期胚胎体外发育阻滞,是实验研究中经常遇到的问题。KSOM等一些培养液在许多实验中被证实对突破早期胚胎发育有着积极的作用,但是囊胚移植后的成熟率低成为了普遍存在的问题。TSA（Trichostatin A）,具有抑制真菌作用的化合物。很多实验已经证明了使用TSA处理过的动物早期胚胎,核移植后胚胎的发育率都有明显升高,原因是TSA通过抑制去乙酰化酶的活性来提高组蛋白的乙酰化程度,促进表观遗传重编程。所以,在本次实验中使用TSA对小鼠早期胚胎进行处理,观察其在体外发育的过程和变化,探讨TSA对小鼠早期胚胎体外发育的影响。方法（1）超数排卵:C57BL/6小鼠,3-4周龄,雌性,SPF级,PMSG10 IU/只腹腔给药,48h后hCG 10 IU/只腹腔给药,致超数排卵,15H后收集小鼠的卵母细胞。（2）孤雌胚的建立:根据文献资料以KSOM为培养液,使用不同参数的电激活卵母细胞并培养24H,观察记录卵裂率和囊胚率。从而确定合适的电激活参数。（3）在KSOM中添加浓度为0μmol/L,50μmol/L和100μmol/L的TSA分别培养12H和24H,之后观察和记录24H以及第6天的卵裂率和囊胚率。（4）在显微镜下对2细胞期和囊胚期胚胎计数。通过数据分析说明TSA对小鼠的早期胚胎发育的作用。结果（1）通过4次重复性实验,最终确定孤雌胚的电激活参数为脉冲强度1.2Kv/cm,脉冲宽度100μs,时间间隔1s,脉冲次数2次。（2）通过4次重复实验,分别在KSOM中加入浓度为0μmol/L,50μmol/L和100μmol/L的TSA。观察发现加入浓度为50μmol/L和100μmol/L的TSA培养12H,小鼠胚胎细胞发育到2细胞期和囊胚期的成功率都有所增加,但是差异不显着。结论在KSOM培养液中添加TSA处理小鼠早期胚胎12H和24H,实验结果发现观处理12H的能够提高胚胎的发育率和卵裂率,而处理24H的则会出现胚胎的发育率和卵裂率明显下降,这说明TSA作用时间过长可能会出现组蛋白的超乙酰化,对胚胎发育产生抑制作用。所以,50μmol/L的TSA处理12H有助于提高小鼠胚胎的体外发育率和卵裂率,但是差异不显着。
张霞,聂正文,苗义良[7]（2015）在《猪克隆胚胎体外培养的研究进展》文中提出猪克隆胚胎的体外培养一直是限制克隆猪大批量生产的制约因素。早期,猪克隆胚胎的培养主要是借鉴体外受精胚胎的体外培养体系,但培养效果并不理想。这是因为,两者的代谢方式不同,其表现在两种胚胎对氧气的需要时段不同,体外受精的胚胎在致密化阶段对氧气的消耗量增大,而克隆胚胎是在囊胚以后的阶段,因此,建立更适合克隆胚胎氧需求的培养体系可有效提高克隆胚胎的发育能力。另外,通过向基础培养液中添加各种添加剂也可改善克隆胚胎的发育。该文分别从猪克隆胚胎体外培养的研究历史与现状、影响因素（包括基础培养液、各种添加物和氧分压等）及体外培养优化策略等进行了论述,旨在为建立稳定的猪克隆胚胎体外发育的最佳培养体系提供理论依据。
王芳,陈绍威[8]（2015）在《胚胎体外培养及胚胎干细胞系的建立》文中研究表明背景:人类胚胎干细胞体外建系成功,对人类胚胎发育机制和发育生物学研究、细胞和组织移植治疗某些疾病等领域都有重大意义。目的:综述近年来关于胚胎体外培养及建立胚胎干细胞系的研究进展,重点探讨胚胎体外培养影响因素、人废弃胚胎培养分离内细胞团建立胚胎干细胞系的方法及建立胚胎干细胞系的条件。方法:以"胚胎（embryo）,胚胎干细胞（embryonic stem cell）,共培养（co culture）,序贯培养（sequential culture）"为检索词,由第一作者检索2000至2014年CNKI数据库和SCI数据库,获取有关胚胎体外培养、移植及胚胎干细胞建系的相关文献,并进行系统评价,最终保留58篇文献进行分析。结果与结论:胚胎体外培养条件是影响胚胎移植结局的重要因素,其中包括培养液的成分和培养体系。在过去的研究过程中,培养液的构成及应用已经发生了很大的变化,培养体系也从单一培养发展到共培养、序贯培养。伦理问题及胚胎来源的限制束缚着人胚胎干细胞系的建立,利用临床废弃的低质量的胚胎可作为建立人胚胎干细胞系的材料来源之一,有效的缓解了建立人胚胎干细胞系过程中胚胎缺乏的问题,并减少其中的伦理学纷争。
李玉芳,庄益芬,张文昌[9]（2013）在《不同培养液对鹅胚胎体外培养的影响》文中研究说明为了探讨不同培养液对鹅胚胎体外培养的影响,本试验分别用鸡、鸭、鹅3种稀蛋白作培养液对90只鹅胚进行体外培养。结果表明:用鹅稀蛋白作培养液优于鸡稀蛋白和鸭稀蛋白。鹅稀蛋白组在第6、15天时鹅胚存活率显着高于鸭稀蛋白组（P<0.05）,鹅胚存活率在第6、15天分别为33.33%、20.00%;在第31天时鹅稀蛋白组鹅胚存活率为3.33%,其他两组为0。综上所述,鹅胚体外培养效果因培养液的不同而不同,在鸡、鸭和鹅稀蛋白3种培养液中,以选用鹅稀蛋白为宜。
刘洁[10]（2011）在《小鼠4细胞胚胎密闭培养体系的建立及胚胎密闭培养条件筛选研究》文中研究指明作为空间生命科学重要研究内容之一,胚胎的空间发育研究一直受到国内外研究者的高度关注。但是目前所普遍采用的开放式胚胎培养体系无法在真空、失重的环境中支持早期胚胎的体外发育,因此必须选用密闭培养的方式（包括气密和液密）进行胚胎空间密闭培养。胚胎密闭培养就是在胚胎培养前预先向胚胎培养液中充入含有一定比例O2,CO2和N2的标准气以提供胚胎发育的气相支持。同时,由于密闭培养的特殊性,在胚胎发育的过程中无法向体系中补充更新营养与气相成分,因此适宜的胚胎培养密度对体系能否更长时间支持胚胎体外发育至关重要。本研究通过对胚胎培养液充气标准气,胚胎培养液以及胚胎培养密度的筛选,以建立一种可支持早期胚胎体外发育的密闭培养体系,并应用于空间环境条件对胚胎发育影响的研究。1.本研究选择了两种O2比例不同的标准气（5% O2,5% CO2,90% N2和10% O2,5% CO2,85% N2）、两种营养条件和缓冲体系不同的胚胎培养液（添加10%胎牛血清的mDPBS和CZB液）,并在培养液体积为200μL的前提下,选用三种培养密度（胚胎数/n∶培养液体积/μL为1:1, 1:2和1:4）,进行小鼠4细胞胚胎的密闭培养,同时设置不充气培养组和常规微滴培养对照组。通过观察和分析各组胚胎在密闭培养84 h时的囊胚发育率和胚胎孵化率,判定各培养组的胚胎培养效果。结果表明,利用5% O2比例的标准气进行胚胎培养液充气时,mDPBS和CZB液表现出类似的胚胎培养结果。1:1培养组的囊胚发育率与对照组无显着差异（P>0.05）,但胚胎孵化率显着低于相同培养密度的对照组（P<0.05）;1:2培养组的囊胚发育率与胚胎孵化率与相同培养密度的对照组无显着差异（P>0.05）;1:4培养组无论是囊胚发育率还是胚胎孵化率皆显着低于相同培养密度的对照组（P<0.05）。利用10% O2比例的标准气进行胚胎培养液充气时,mDPBS和CZB液表现出类似的胚胎培养结果。1:1培养组的囊胚发育率和胚胎孵化率与相同培养密度的对照组无显着差异（P>0.05）;1:2培养组和1:4培养组的囊胚发育率和胚胎孵化率皆显着低于相同培养密度的对照组（P<0.05）。培养液不充气密闭培养时,1:1培养组,1:2培养组和1:4培养组的囊胚发育率与胚胎孵化率皆显着低于相同培养密度的对照组。证明,在密闭培养体系中,胚胎培养密度过低会导致胚胎发育率和胚胎孵化率下降;培养液不充气密闭培养不能支持小鼠4细胞胚胎体外发育。2.在上述研究结果的基础上,在5% O2比例的标准气进行胚胎培养液充气时,利用mDPBS和CZB对小鼠4细胞胚胎进行密闭培养,以筛选小鼠胚胎密闭培养的适宜培养液。结果表明,相同培养密度下在mDPBS培养液中发育的胚胎,囊胚总细胞数显着低于在CZB培养液中发育的胚胎（P<0.05）,mDPBS组囊胚细胞的凋亡率显着高于CZB组（P<0.05）,而且在mDPBS中发育的胚胎形态学质量较差。证明CZB培养液支持密闭培养小鼠胚胎发育的能力优于mDPBS培养液。3.在上述研究结果的基础上,以CZB培养液为胚胎培养液,分别利用5% O2比例和10% O2比例的标准气进行胚胎培养液充气,比较不同培养密度下囊胚细胞总数以及囊胚细胞凋亡率的差异,并检测胚胎发育早期过氧化物产生情况和密闭培养过程中胚胎缺氧诱导因子1 alpha（HIF-1α）蛋白质表达情况。结果显示,利用5% O2比例的标准气进行胚胎培养液充气时,1:1培养组的囊胚细胞总数显着低于相同密度的对照组胚胎（P<0.05）,凋亡率显着高于对照组（P<0.05）;1:2培养组的囊胚细胞总数以及胚胎细胞凋亡率皆与相同密度对照组胚胎无显着差异（P>0.05）。利用10% O2比例的标准气进行胚胎培养液充气时,1:1培养组的囊胚细胞总数以及胚胎细胞凋亡率皆与相同密度对照组胚胎无显着差异（P>0.05）;1:2培养组的囊胚细胞总数皆显着低于相同密度的对照组胚胎（P<0.05）,凋亡率显着高于对照组（P<0.05）。在胚胎发育早期过氧化物产生情况检测时发现,利用10% O2比例的标准气进行胚胎培养液充气,密闭培养12 h时1:1培养组和1:2培养组胚胎过氧化物产生量高于对照组,而在利用5% O2比例的标准气进行胚胎培养液充气的密闭培养组中未见此现象。提示当标准气中O2比例为10%时,密闭培养的胚胎在发育早期可能出现氧化损伤。利用5% O2比例的标准气进行胚胎培养液充气时,1:1培养组在密闭培养60 h时胚胎中可检出HIF-1α表达;1:2培养组在密闭培养84 h时胚胎中可检出HIF-1α表达。利用10% O2比例的标准气进行胚胎培养液充气时,1:1培养组在密闭培养84 h时胚胎中可检出HIF-1α表达;1:2培养组在密闭培养84 h时胚胎中未检出HIF-1α表达。综上所述,小鼠胚胎密闭培养的适宜培养液为CZB液,将胚胎密度为1:2的小鼠4细胞胚胎密闭培养于经5% O2标准气充气处理的培养液中,胚胎可较好地发育至囊胚和孵化胚阶段。
二、鹅胚胎体外培养的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、鹅胚胎体外培养的研究（论文提纲范文）
（1）人持续性G病毒二型在中国人群中的检出及其感染性克隆初步探索（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 黄病毒科病毒 |
| 1.2 GBV-C病毒(HPgV)简介 |
| 1.3 HPgV-2病毒简介 |
| 1.4 Pegivirus病毒的培养体系探索 |
| 1.5 本研究的目的与意义 |
| 第二章 HPgV-2在国内人群中的发现 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 技术路线 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 HPgV-2感染人的致病性及细胞嗜性 |
| 3.1 材料方法 |
| 3.2 技术路线 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 HPgV-2感染性克隆探索 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 技术路线 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 全文总结 |
| 5.1 全文总结 |
| 5.2 本研究的不足之处 |
| 5.3 下一步工作计划 |
| 参考文献 |
| 缩略词汇总表 |
| 成果 |
| 致谢 |
（2）CTRP3对鹅骨骼肌细胞成肌分化的调控作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 文献综述 |
| 文献综述 |
| 1 骨骼肌及骨骼肌卫星细胞的研究 |
| 1.1 骨骼肌生长发育基本过程 |
| 1.2 骨骼肌发育相关因子的研究现状 |
| 1.3 骨骼肌生长发育相关信号通路 |
| 1.4 骨骼肌卫星细胞概述 |
| 2 鹅骨骼肌发育相关基因的研究进展 |
| 3 CTRP3基因相关研究进展 |
| 4 miRNA与骨骼肌发育的研究进展 |
| 4.1 miRNA生物形成与作用机制 |
| 4.2 miRNA与骨骼肌发育 |
| 5 本研究的目的、意义及内容 |
| 5.1 本研究的目的及意义 |
| 5.2 本研究的主要内容 |
| 第二部分 试验研究 |
| 第一章 鹅骨骼肌卫星细胞的分离鉴定和诱导分化 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验试剂与仪器 |
| 1.2 实验样品 |
| 1.3 应用的分析软件 |
| 1.4 实验试剂的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 鹅骨骼肌卫星细胞分离培养 |
| 2.2 鹅骨骼肌卫星细胞传代培养及换液 |
| 2.3 免疫荧光鉴定鹅肌卫星细胞 |
| 2.4 鹅肌卫星细胞分化模型的构建 |
| 3 实验结果与分析 |
| 3.1 鹅肌卫星细胞的分离培养 |
| 3.2 未分化鹅骨骼肌卫星细胞的鉴定 |
| 3.3 诱导分化后鹅骨骼肌卫星细胞的鉴定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 鹅骨骼肌卫星细胞的分离培养 |
| 4.2 鹅骨骼肌卫星细胞的鉴定 |
| 4.3 鹅骨骼肌卫星细胞的诱导分化 |
| 5 小结 |
| 第二章 CTRP3对鹅骨骼肌细胞分化的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验试剂与仪器 |
| 1.2 实验样品 |
| 1.3 应用的分析软件 |
| 1.4 实验试剂的配置 |
| 1.5 实验所用载体和菌株 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 CTRP3基因在鹅骨骼肌发育过程中的表达情况 |
| 2.2 过表达载体的构建 |
| 2.3 siRNA合成 |
| 2.4 过表达载体及siRNA转染相关试验 |
| 3 实验结果与分析 |
| 3.1 浙东白鹅腿肌组织总RNA提取结果 |
| 3.2 鹅早期发育过程中CTRP3的表达谱 |
| 3.3 过表达载体构建及siRNA筛选 |
| 3.4 si RNA干扰CTRP3 抑制骨骼肌卫星细胞的分化 |
| 3.5 过表达CTRP3促进骨骼肌卫星细胞的分化 |
| 3.6 CTRP3 基因对Notch信号通路相关基因表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 CTRP3对鹅骨骼肌卫星细胞分化的影响 |
| 4.2 Notch 信号通路与骨骼肌发育 |
| 5 小结 |
| 第三章 鹅骨骼肌细胞中靶向调控CTRP3 的潜在mi RNA预测分析 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验试剂与仪器 |
| 1.2 实验样品 |
| 1.3 实验所用主要分子生物学软件、数据库和网站 |
| 1.4 实验试剂的配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 靶向CTRP3 基因的mi RNA的预测和筛选 |
| 2.2 miRNA模拟物的合成 |
| 2.3 miRNA定量引物的设计(茎环法) |
| 2.4 miRNA模拟物在骨骼肌卫星细胞中的表达量检测 |
| 3 结果 |
| 3.1 生物信息学初步预测候选靶向鹅CTRP3的mi RNA |
| 3.2 miRNA模拟物对鹅骨骼肌卫星细胞分化的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 miRNA的预测及筛选 |
| 4.2 miRNA对骨骼肌发育的调控研究 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 1 本实验中的主要研究结论 |
| 2 本研究的创新点 |
| 3 本实验中的不足以及后续实验计划 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 在校期间发表论文 |
| 致谢 |
（3）体外胚胎培养是胚胎工程技术的关键环节（论文提纲范文）
| 文章快速阅读: |
| 文题释义: |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 入选标准 |
| 1.3 质量评估 |
| 1.4 数据的提取 |
| 2 结果Results |
| 2.1 早期胚胎体外培养系统 |
| 2.2 早期胚胎体外培养系统的组成 |
| 2.2.1能量物质 |
| 2.2.2 氨基酸 |
| 2.2.3 维生素 |
| 2.2.4蛋白质 |
| 2.2.5 核酸前体物 |
| 2.2.6 生长因子 |
| 2.3 物理因素 |
| 2.3.1 渗透压 |
| 2.3.2 pH值 |
| 2.3.3 气相及温度系统 |
| 3 总结与展望Conclusions and prospects |
（4）吉林白鹅毛囊发育及IGF-1、EGF基因对其发育调控的影响（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与饲料配方 |
| 1.2 试验设计和样品采集 |
| 1.3 数据处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同阶段和部位初级毛囊密度变化 |
| 2.2 不同阶段和部位次级毛囊密度变化 |
| 2.3 不同阶段和部位初级毛囊毛球直径变化 |
| 2.4 不同阶段和部位次级毛囊毛球直径变化 |
| 2.5 IGF-1和EGF基因RNA扩增结果 |
| 2.6 IGF-1基因对吉林白鹅毛囊发育调控的影响 |
| 2.7 EGF基因对吉林白鹅毛囊发育调控的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 不同阶段初级毛囊和次级毛囊发生发育变化 |
| 3.2 IGF-1基因对吉林白鹅毛囊发育调控的影响 |
| 3.3 EGF基因对吉林白鹅毛囊发育调控的影响 |
（5）动物早期胚胎体外培养的研究进展（论文提纲范文）
| 1 早期胚胎体外培养的培养环境 |
| 2 胚胎培养液的添加物 |
| 2.1 能量底物 |
| 2.2 氨基酸 |
| 2.3 抗氧化剂 |
| 2.4 蛋白质及大分子物质 |
| 2.5 其他成分 |
| 3 胚胎培养体系的培养方式、方法 |
| 4 展望 |
（6）TSA对小鼠早期胚胎体外发育的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 一、动物胚胎发育技术的研究 |
| 1.动物胚胎发育和动物胚胎技术的简介 |
| 2.胚胎技术的应用和价值 |
| 2.1 动物胚胎技术在畜牧业中应用的价值 |
| 3.动物胚胎技术的发展和前景 |
| 3.1 PCR法进行胚胎性别鉴定的前景和展望 |
| 3.2 转基因动物进展 |
| 3.3 哺乳动物核移植技术研究进展 |
| 4.动物早期胚胎发育技术存在的问题 |
| 4.1 激素对胚胎发育的影响 |
| 4.1.1 促排卵对胚胎发育的影响 |
| 4.1.2 激素对胚胎发育的影响 |
| 4.2 培养液对胚胎发育的影响 |
| 4.3 胚胎培养系统 |
| 4.3.1 培养方式对胚胎发育的影响 |
| 4.3.2 能量物质对胚胎发育的影响 |
| 4.3.3 物理因素对胚胎发育的影响 |
| 4.4 卵子的数量和质量 |
| 4.5 动物合子原核构型及早期卵裂 |
| 4.6 胚胎碎片 |
| 4.7 动物胚胎致密化基因表达差异 |
| 4.8 细胞因子在胚胎发育过程中的作用 |
| 4.8.1 白血病抑制因子 |
| 4.8.2 干细胞因子 |
| 4.8.3 可溶性人类白细胞抗原G(sHLA.G)分子 |
| 4.8.4 白细胞抗原G(HLA.G)分子 |
| 4.8.5 胶质细胞源性神经营养因子(GDNF) |
| 4.8.6 各类生长因子 |
| 4.8.7 单胚胎k—Y寡糖 |
| 4.9 其他因素 |
| 二、小鼠早期胚胎体外发育研究进展 |
| 1.小鼠早期胚胎体外发育的意义与研究进展 |
| 2.国内研究进展 |
| 三、曲古抑菌素A(TSA)在胚胎发育中的应用和研究 |
| 1.曲古抑菌素A对动物胚胎应用的概述 |
| 1.1 曲古抑菌素A对羊胚胎的应用 |
| 1.2 曲古抑菌素A对猪胚胎的应用 |
| 第二章 小鼠孤雌胚的建立 |
| 一、小鼠孤雌胚的概述 |
| 二、小鼠孤雌胚的建立 |
| 1.卵母细胞的收集 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2.卵母细胞的孤雌激活 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 数据统计 |
| 2.4 数据的分析和讨论 |
| 第三章 TSA对早期胚胎的体外作用 |
| 1.实验材料和方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验设计 |
| 2.数据统计和分析 |
| 2.1 数据统计 |
| 2.2 数据分析和讨论 |
| 第四章 结果讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 攻读学位期间发表文章 |
（7）猪克隆胚胎体外培养的研究进展（论文提纲范文）
| 1猪克隆胚胎体外培养研究的历史与现状 |
| 2猪克隆胚胎体外发育的影响因素 |
| 2.1培养液及各种添加物对猪克隆胚胎体外发育的影响 |
| 2.2氧分压对猪克隆胚胎体外发育的影响 |
| 3猪克隆胚胎体外培养的优化策略 |
| 3.1共培养系统 |
| 3.2基因表达谱分析 |
| 4结语与展望 |
（8）胚胎体外培养及胚胎干细胞系的建立（论文提纲范文）
| 0引言Introduction |
| 1资料和方法Dataandmethods |
| 2结果Results |
| 2.1胚胎体外培养 |
| 2.2人胚胎干细胞系建立的影响因素 |
| 2.3人胚胎干细胞的实验研究现状及临床应用前景 |
| 3展望Prospects |
（9）不同培养液对鹅胚胎体外培养的影响（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 试验分组 |
| 1.2.2 蛋的消毒 |
| 1.2.3 代用蛋壳的准备 |
| 1.2.4 稀蛋白培养液的准备 |
| 1.2.5 体外培养 |
| 2 结果与分析 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
（10）小鼠4细胞胚胎密闭培养体系的建立及胚胎密闭培养条件筛选研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 小鼠胚胎体外培养研究进展 |
| 1.1 培养环境对小鼠胚胎体外发育的影响 |
| 1.1.1 胚胎培养液的组成要素及其对胚胎体外发育的作用 |
| 1.1.2 温度条件对胚胎发育的影响 |
| 1.1.3 气相条件对胚胎发育的影响 |
| 1.1.4 湿度条件对胚胎发育的影响 |
| 1.1.5 pH 对早期胚胎发育的影响 |
| 1.1.6 胚胎培养密度对胚胎发育的影响 |
| 1.2 早期胚胎体外培养的常用方法及特点 |
| 1.3 胚胎质量与胚胎发育能力的评价 |
| 第二章 密闭培养体系中的小鼠胚胎发育特点 |
| 2.1 微重力及模拟微重力条件对动物胚胎发育的影响 |
| 2.2 密闭培养的必要性和密闭培养体系的特点 |
| 2.2.1 密闭培养的必要性 |
| 2.2.2 空间培养对胚胎发育阶段的限制要求 |
| 2.3 动物细胞应对低氧环境的方法 |
| 2.3.1 缺氧诱导因子家族 |
| 2.3.2 HIF-1 氧调节机制 |
| 2.3.3 HIF-1 降低组织缺氧损伤的调控途径 |
| 2.3.4 HIF-1 与细胞凋亡的关系 |
| 2.4 活性氧分子对细胞生长与胚胎发育的影响 |
| 2.4.1 ROS 引起DNA 损伤 |
| 2.4.2 ROS 引起脂膜损伤 |
| 2.4.3 ROS 引起蛋白质损伤 |
| 2.4.4 ROS 引起细胞凋亡 |
| 2.5 胚胎密闭培养体系需要解决的主要问题 |
| 试验研究 |
| 第三章 小鼠早期胚胎密闭培养研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 标准气O_2 比例为5%时密闭培养小鼠4 细胞胚胎体外发育结果 |
| 3.2.2 标准气O_2 比例为10%时密闭培养小鼠4 细胞胚胎体外发育结果 |
| 3.2.3 小鼠4 细胞胚胎不充气密闭培养胚胎体外发育结果 |
| 3.2.4 小鼠4 细胞胚胎微滴法培养胚胎体外发育结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 密闭培养体系对胚胎培养环境的要求 |
| 3.3.2 小鼠4 细胞胚胎在不同培养体系中的发育规律 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 小鼠胚胎密闭培养的培养液筛选 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 小鼠早期胚胎密闭培养的培养液充气标准气筛选 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验材料 |
| 5.1.2 试验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 囊胚细胞计数与胚胎细胞凋亡统计结果 |
| 5.2.2 胚胎内过氧化物产生情况检测结果 |
| 5.2.3 缺氧诱导因子HIF-1α蛋白质表达检测结果 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 5% O_2 比例的充气标准气对密闭培养早期胚胎发育的影响 |
| 5.3.2 10% O_2 比例的标准气对密闭培养早期胚胎发育的影响 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、鹅胚胎体外培养的研究（论文参考文献）
- [1]人持续性G病毒二型在中国人群中的检出及其感染性克隆初步探索[D]. 万政伟. 南方医科大学, 2021(02)
- [2]CTRP3对鹅骨骼肌细胞成肌分化的调控作用[D]. 曾雪花. 浙江农林大学, 2020(01)
- [3]体外胚胎培养是胚胎工程技术的关键环节[J]. 李楠,林忠. 中国组织工程研究, 2019(29)
- [4]吉林白鹅毛囊发育及IGF-1、EGF基因对其发育调控的影响[J]. 刘逍,娄玉杰. 中国兽医学报, 2018(07)
- [5]动物早期胚胎体外培养的研究进展[J]. 孙思怡,李琦,张帆,韩淑敏,李雁冰,李井春,魏国生. 畜牧与饲料科学, 2018(03)
- [6]TSA对小鼠早期胚胎体外发育的研究[D]. 施超. 上海交通大学, 2016(03)
- [7]猪克隆胚胎体外培养的研究进展[J]. 张霞,聂正文,苗义良. 中国细胞生物学学报, 2015(08)
- [8]胚胎体外培养及胚胎干细胞系的建立[J]. 王芳,陈绍威. 中国组织工程研究, 2015(14)
- [9]不同培养液对鹅胚胎体外培养的影响[J]. 李玉芳,庄益芬,张文昌. 中国农学通报, 2013(08)
- [10]小鼠4细胞胚胎密闭培养体系的建立及胚胎密闭培养条件筛选研究[D]. 刘洁. 西北农林科技大学, 2011(05)