北京协和医学院医药生物技术研究所 北京 100050
【摘 要】目的：寻找利用现有简易压力容器设备对菌种保藏用奶粉溶液进行精准的灭菌方法。方法：测控不同灭菌温度、灭菌持续时间等条件下，精准控制工艺参数达到理想的灭菌效果。结果：找到并确定了切实可行的灭菌技术方法满足菌种保藏用牛奶液的高精尖灭菌需求。结论：此灭菌技术操作简单易行，数据可靠，效果突出，保障科研特需后勤供给，一直被沿用至今。可推科研广于同类高科技灭菌技术，为更多科研一线提供优质保障供应。
【关键词】简易灭菌器；进口奶粉；菌种保藏；灭菌技术
【中图分类号】R953【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-07-311-01
1.条件与方法
I类卧式柱型压力蒸汽灭菌器（传统机械式人工控制工艺参数），设计压力0.15Mp；设计温度130℃；BD公司进口奶粉 Difco™ Skim Milk。
菌种保藏用牛奶Anple质量要求很高，必须高营养纯度和强无菌保证才能达到使菌种存活时间长久的目的。牛奶Anple制作要求也严格，据查选自国内奶源基地的鲜奶经脱脂处理，在水浴箱内水温设定在90℃，消毒30分钟后才能使用。而选择BD公司进口牛奶粉，是菌种保藏专用奶粉，营养价值高且已无脂处理，它的水溶液代替了鲜奶。唯一的问题是：灭菌需要使用高端自动化压力蒸汽灭菌器才能完成。目前我单位暂时无此设备设施，也无购置需求。
2006年伊始，因科研需要★，尝试利用现有传统压力蒸汽灭菌设备进行这种BD奶粉水溶液的特殊灭菌工艺技术处理。
选用工作压力0.10Mp的小容量灭菌器，压力相对固定；基本温度定在120℃左右；持续时间10分钟左右。根据灭菌后溶液颜色的变化为标志，以科室细菌培养试验为标准进行灭菌温度、灭菌时间等相关参数条件调控试验。如灭菌后为纯白色即合格标志，同时细菌实验标化确定；黄色则已经碳化，需降低灭菌温度或缩短灭菌时间。针对这种情况，分组进行灭菌条件的实验。
1）首先温度低于120℃灭菌组试验，试验显示结果为容易染菌并找到了灭菌前预热优于凉锅直接进行加热消毒的方法条件。
2）其次进行高于120℃灭菌组试验，结果确定预热条件最适温度121℃；灭菌持续时间10-15分钟，同时发现灭菌后的保温处理可以辅助解决碳化问题。
3）最后预热后加热121℃，操作人员需要严格控制灭菌持续时间和保温时间。避免出出现颜色差别。经试验得出最适合的灭菌持续时间是15分钟，保温时间计算至8分钟后立刻取出。
4）通过反复灭菌实验，历经3个月时间验证，最后确定菌种保藏用进口奶粉的最适合灭菌操作工艺方法：缓慢预热灭菌器内胆；快速加热至温度121℃；持续灭菌15分钟；关汽保温8分钟。效果显示为：牛奶液无碳化且细菌实验合格。
部分具体实验数据如下：
2.结果
经过上述实验，针对菌种保藏用进口奶粉溶液利用简单压力蒸汽灭菌器建立了最佳的灭菌方法---简易灭菌器灭菌保藏用进口奶粉溶液之特殊灭菌技术法。
工艺流程：预热灭菌器套层，然后内胆升温至121℃持续15分钟，停止加热再保温8分钟。需要指出的是，该技术操作参数高度精准，量化到以分秒计时严格控制参数，达到了无菌无芽孢且养分无损的菌藏高端特需标准。用此方法灭菌后的奶粉溶液经过菌种室冷干管复苏试验证实确定无任何染菌现象，并且蛋白等营养使菌种保藏时间持久不枯。此特殊灭菌技术方法自建立于2006年春，历经设施变化、设备更新等都无任何数据变动影响，一直沿用至今，从无任何染菌或碳化等不良事件记录。例如：在2011年秋以及2012年春，我单位该传统压力设备移动至它处，但经再次操作验证，工艺参数条件仍然确定不变；2013~2015至今有了稳定的新设备新区域，此灭菌参数条件仍然无丝毫变化。因此，简易灭菌器消毒保藏菌种用进口奶粉之特殊灭菌技术法已经成为较成熟稳定的灭菌法，已经并一直适用于更新数字化设备。
3.结论与讨论
以传统机械化压力蒸汽灭菌器代替高端进口灭菌器进行进口奶粉溶液灭菌实验的技术方法的摸索取得了成功。在传统数据0.10Mp蒸汽压力，120℃蒸汽加热，20分钟持续灭菌基础上有了精准的技术操作定位，并且突破性地加入了灭菌前的夹层预热、灭菌后的保温处理等工艺条件，建立了一整套成熟的技术参数工艺操作方法，有效的配合菌种保藏用牛奶溶液之高难灭菌工作。使科研实验人员减少了劳动量（鲜奶须外出取材—之后须反复脱脂处理—然后科室内自行水浴灭菌）同时大大降低了科室的特需灭菌需求成本，节省了单位设备资源，缩短了科研进展时间，为菌种保藏及其科研工作做出了积极而突出的贡献。建议广泛运用于设备简约高级科研灭菌需求的研究院所。
附注
★2006年春节后，当时菌种保藏室的技术人员朱海燕等拿着进口奶粉水溶液管来灭菌室找我说这牛奶管灭菌条件异常苛刻：120℃以上灭菌彻底同时保证营养不被破坏。按照他们科室负责人指示，请我用我所简易灭菌器试试看，能否达到专用高端设备才能达到灭菌效果，能试验成功他们科室就省得花大价钱去外面了。
论文作者:曹凤华
论文发表刊物:《系统医学》2016年第2卷第7期
论文发表时间:2016/6/24
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