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摘要：目的 建立一种气相色谱法测定阿戈美拉汀原料药中的残留溶剂。方法 以二甲基甲酰胺为溶解介质，色谱柱为DB-WAX（聚乙二醇20M交联聚合物为固定相，30m×0.53mm×1.0μm），氢火焰离子化（FID）检测器，载气为氮气，进样口温度为150℃，检测器温度为240℃，柱温40℃，分流比10：1的条件下检测正己烷、异丙醚、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、甲苯。结果 各溶剂峰之间的分离度应符合规定，各溶剂峰线性均良好，平均回收率在90%~110%之间。结论 本测定方法准确可靠、专属性强、灵敏度高、重复性好，适用于阿戈美拉汀原料药中残留溶剂的测定。
关键词：阿戈美拉汀；残留溶剂测定；气相色谱法；
Abstract：Objective To establish a method for the determination of residual organic solvents in Agomelatine Raw Medicine by GC.Methods The solvent was Dimethylformamide.The column DB-WAX（Polyethylene glycol 20M crosslinked polymer as stationary phase，30m×0.53mm×1.0μm）was used.The carrier gas was nitrogen with hydrogen flame ionization detector.The inlet temperature was 150℃，The detector temperature was 240℃，The column temperature was 40℃，and the split ratio was 10：1.This method detected N-hexane，isopropyl ether，tetrahydrofuran，ethyl acetate，methanol，dichloromethane，ethanol and toluene.Results The 8 kinds of residual organic solvents can be separated effectively The solvent peaks were linear.The average recovery is between 90%~110%.Conclusion The method is accurate and reliable，has strong specificity，high sensitivity and good repeatability，and is suitable for the determination of residual organic solvents in Agomelatine.
Keywords：Agomelatine；residual organic solvents determination；gas chromatography
引言
阿戈美拉汀是一种新型的抗抑郁药，为褪黑激素受体激动剂和5-羟色胺（5-HT）2C受体拮抗剂。法国Servier开发研制的阿戈美拉汀为褪黑素的生物（电子）等排体类似物，其以萘核取代了吲哚环，使其褪黑素更具代谢稳定性[1~2]。人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）规定了69种组分作为药品中残留溶剂的检测对象，并规定了各组分在药品中的残留限度。目前国内有关于阿戈美拉汀残留溶剂检测方法的报道[3~4]，方法是采用顶空气相色谱法。本研究在参照中国药典2015年版残留溶剂相关指导原则[5]，对阿戈美拉汀中工艺中存在的正己烷、异丙醚、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、甲苯8种溶剂，进行研究，确定用气相色谱法方法对残留溶剂进行控制。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
Agilent7890A气相色谱仪，FID检测器，Chemstation色谱工作站，DB-624色谱柱。
阿戈美拉汀由江苏豪森药业集团有限公司提供；正己烷、异丙醚、四氢呋喃、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇、甲苯（国药集团化学试剂公司）均为分析纯；甲醇（国药集团化学试剂公司）为色谱纯；二甲基甲酰胺（DMF）（TEDIA公司）为色谱纯。
1.2 色谱条件
以二甲基甲酰胺为溶解介质，色谱柱为DB-WAX（聚乙二醇20M交联聚合物为固定相，30m×0.53mm×1.0μl），氢火焰离子化（FID）检测器，进样口温度为150℃，检测器温度为240℃，柱温40℃；载气流速4.0ml/min，分流比1：10，进样量1μl。
1.3 溶液配制
1.3.1 稀释液：二甲基甲酰胺（DMF）。
1.3.2 对照品溶液 分别取正己烷、异丙醚、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、甲苯适量，精密称定，加二甲基甲酰胺制成每1ml中含正己烷29μg、异丙醚500μg、乙酸乙酯500μg、甲醇300μg、二氯甲烷60μg、乙醇500μg、甲苯89μg的溶液。
1.3.3 供试品溶液 取阿戈美拉汀适量，精密称定，加二甲基甲酰胺制成每1ml含100mg的溶液。
1.4 方法学考察
1.4.1 专属性试验
在1.2的色谱条件下，分别量取正己烷、异丙醚、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、甲苯适量、二甲基甲酰胺1.0 μl注入气相色谱仪，记录图谱，相邻两峰最小分离度为2.7。色谱图见图1，说明本色谱条件对正己烷、异丙醚、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、甲苯等溶剂专属性强。
图 1 阿戈美拉汀残留溶剂图谱
1.4.2 检测限定量限测定
在1.2的色谱条件下，精密称取各溶剂适量，制备不同浓度的对照品溶液，分别进样至信噪比（峰高／基线噪声）为3左右为检测限，至信噪比为10左右为定量限，结果显示各溶剂的检测限分别为：正己烷1ppm；异丙醚2ppm；四氢呋喃3ppm；乙酸乙酯7ppm；甲醇10ppm；二氯甲烷15ppm；乙醇7ppm；甲苯5ppm。定量限分别为：正己烷4ppm；异丙醚5ppm；四氢呋喃12ppm；乙酸乙酯20ppm；甲醇20ppm；二氯甲烷50ppm；乙醇20ppm；甲苯21ppm。
1.4.3 线性关系考察
分别精密称取各溶剂适量，制成定量限浓度溶液及限度浓度相当的梯度浓度溶液，考察各溶剂的线性。①正己烷，0.443～32.4μg/ml，A=1.32×C+0.045，r=0.9997；②异丙醚，0.520～594 μg/ml，A=1.00×C-1.31，r=0.9997；③四氢呋喃，1.28～96.4μg/ml，A=0.87×C-0.095，r=0.9997；④乙酸乙酯，1.85～605 μg/ml，A=0.63×C-1.18，r=0.9997；⑤甲醇，2.04～361μg/ml，A=0.52×C-0.033，r=0.9997；⑥二氯甲烷，5.08～81.0μg/ml，A=0.23×C+0.040，r=0.9997；⑦乙醇，1.98～613μg/ml，A=0.71×C-1.27，r=0.9997；⑧甲苯，2.13～116 μg/ml，A=1.60×C-0.78，r=0.9994；线性相关系数皆大于0.999，说明线性良好。
1.4.4 精密度试验
1）系统精密度：取1.3.2项下的溶液，连续6次进样的八个溶剂的峰面积的最大RSD为3.25%，小于10.0%，系统的精密度符合实验要求。
2）方法精密度：取1.3.3项下的溶液，重复6次测定样品，只检测出少量的异丙醚，平均含量为408ppm，标准偏差SD为25ppm，精密度良好。
1.4.5 准确度试验
精密称取各溶剂适量，用二甲基甲酰胺稀释定容，制备储备液，分别向供试品溶液中添加相当于限度浓度70%、100%、120%的溶剂，各浓度平行3份，考察溶剂回收率。各溶剂的回收率分别为①正己烷的平均回收率为91.2%，RSD为2.30%；②异丙醚的平均回收率为99.2%，RSD为2.17%；③四氢呋喃的平均回收率为95.8%，RSD为0.99%；④乙酸乙酯的平均回收率为96.2%，RSD为0.87%；⑤甲醇的平均回收率为95.7%，RSD为0.79%；⑥二氯甲烷的平均回收率为104.1%，RSD为4.19%；⑦乙醇的平均回收率为96.6%，RSD为0.81%；⑧甲苯的平均回收率为96.9%，RSD为1.06%；结果显示八个溶剂的平均回收率介于91.2%～104.1%之间，最大RSD为4.36%；说明本分析方法对八个残留溶剂的检测是准确的。
1.4.6 耐用性试验
在1.2的色谱条件下，用DB-WAX柱进行测试，①改变柱初温（±3℃），溶剂的最小分离度在2.3～2.6之间；②改变载气流速（2.5ml/min、3.0 ml/min、3.5 ml/min、4.0 ml/min、4.5 ml/min），溶剂的最小分离度在2.3～3.0之间；分离度变化不大，符合实验要求，该色谱条件可以满足对阿戈美拉汀中残留溶剂的检测。
2 讨论
本研究中建立了一种同时测定阿戈美拉汀中的正己烷、异丙醚、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷、乙醇、甲苯8种残留溶剂的气相色谱方法，限度参考中国药典2015版及ICH指导原则Q3C中的要求，具体为含正己烷不得过0.029%，异丙醚不得过0.5%，四氢呋喃不得过0.072%，乙酸乙酯不得过0.5%，甲醇不得过0.3%，二氯甲烷不得过0.06%，乙醇不得过0.5%，甲苯不得过0.089%。通过方法验证，建立的检测方法准确、灵敏、专属，故可作为阿戈美拉汀原料药中有机溶剂残留的检测方法。
参考文献
[1] Luis S，Belen A． Agomelatine：a novel mechanism of anti-depressant action involving the melatonergic and serotonergicsystem[J]，Europ Psychinary，2008，2（1）：1~7。
[2] 胡茂荣，陈晋东，李乐华，等。阿戈美拉汀：一种新型抗抑郁药[J]，中国新药与临床杂志2009，（02）：81-85。
[3] 段国玲，国永红，王丽，等。顶空气相色谱法测定阿戈美拉汀原料中有机溶剂残留量[J]，《中国药师》，2013，16（10）：1548-1550。
[4] 唐健，殷学治。气相色谱法测定阿戈美拉汀的残留溶剂[J]，广东化工，2014，41（22）：215-216。
[5] 中国药典2015年版四部[S]，2015：63，105，374。
论文作者:掌效舟通讯作者 张翠 孙井龙 王俊亮 李赛
论文发表刊物:《航空军医》2018年16期
论文发表时间:2018/11/21
标签：乙酸乙酯论文; 溶剂论文; 色谱论文; 甲酰胺论文; 甲烷论文; 甲苯论文; 甲醇论文; 《航空军医》2018年16期论文;