1半乳甘露聚糖检测与侵袭性曲霉菌感染
1.1什么是曲霉菌？
霉菌中的曲霉菌在自然界中广泛存在，常驻于正常人体的皮肤黏膜，但也是我们人类的下呼吸道的主要致病真菌之一，可分为黄曲霉、烟曲霉、土曲霉、白曲霉，等等。此外还有酱油曲霉、米曲霉，它们听起来就很好吃，也常用于发酵。在日常生活中，黄曲霉比较常见，因为发霉的粮食、粮食制品中都可以见到黄曲霉。除了侵袭性曲霉菌感染，曲霉菌还能引起角膜炎、眼内炎，等等疾病。
1.2什么是侵袭性曲霉菌感染？
当曲霉菌直接侵犯肺部、或支气管，而非寄生在肺部或支气管，也不是引起肺或支气管过敏、中毒，就会引起侵袭性曲霉菌感染。因此，侵袭性曲霉菌感染是急性或慢性的组织病理损害导致的疾病。这种疾病在造血干细胞的骨髓移植后最为常见，届时的发病率高达12%，而发病后的死亡率更高达58%。此外，实体器官移植、插管等侵袭治疗、广谱抗生素治疗、肿瘤治疗、免疫抑制治疗的患者，以及艾滋病患者，都有较大的感染曲霉菌的危险。
1.3为什么检测血清中的半乳甘露聚糖？
诊断侵袭性曲霉菌感染，最好的检测样品是活组织切片。然而，怀疑侵袭性曲霉菌感染的患者往往身体状况不佳，很难拿出自己的组织。因此，通常的做法是检测血清中的半乳甘露聚糖，来间接诊断早期侵袭性曲霉菌感染。
侵袭性曲霉菌感染患者的血清中，除了半乳甘露聚糖，1-3-β-D葡萄糖也会增多。然而，多种侵袭性真菌感染都会导致患者血清中的1-3-β-D葡萄糖增多，不如仅针对侵袭性曲霉菌感染的半乳甘露聚糖检测的特异性好。而且，患者感染曲霉菌后，在发病前的5至8天，血清中就能检测到半乳甘露聚糖，而检测1-3-β-D葡萄糖要等到起病之后的数日。此外，虽然还有实时PCR法可以检测曲霉菌，而且灵敏度、特异性也比较高，但是它非常贵，不如半乳甘露聚糖检测的费用低。因此，在临床和检验科室诊断早期侵袭性曲霉菌感染，最好检测半乳甘露聚糖。
2如何检测半乳甘露聚糖？
2.1患者的准备
检测半乳甘露聚糖前，患者应规律生活，清淡饮食，不要再吃可能影响检测结果的药物（如抗菌药物）了。
2.2医师的采血
医师应在患者接受抗真菌治疗之前留取1次血液标准，治疗中每周留取2次血液标本。每次采血后，都要使血液凝集至少半个小时，然后在采血后的24小时内分离出血清，并冷冻保存到-26摄氏度的环境中。
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2.3检测半乳甘露聚糖的方法
检测半乳甘露聚糖的基本方法，是酶联免疫吸附测定法（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay，简称ELISA，或酶联免疫法）。这种方法发现于1971年，发现者是瑞典的Engvall、Perlmann两位学者和荷兰的Van Weerman、Schuurs两位学者。
酶联免疫吸附测定法的主要方法是，让固相载体表面的抗原（或抗体）与酶复合物结合（结合物叫“酶标抗原”，其中的抗原、酶均保持活性），然后洗涤去除其他物质，最后加入酶反应底物，生成有色产物。由此可见，有色产物的量与所要检测的抗原（或抗体）的量直接相关。所以，颜色反应的深浅能够反映抗原（或抗体）的多少。最后，颜色反应的深浅可以用吸光度（光密度）来定量表示。
在半乳甘露聚糖检测中，抗原当然就是半乳甘露聚糖。
美国Bio-Rad公司研发的Platelia TM曲霉菌抗原检测试剂盒（Platelia TM Aspergillus Ag Assay），采用的是经典的酶联免疫吸附测定法，经过无创、简单的操作流程，只需3小时，就可得出结果，在国内外广受认可。Platelia TM曲霉菌抗原检测试剂盒应在2至8摄氏度的环境中储存，使用前再将所有试剂置于18至25摄氏度的室温中，使用后应立即返回2至8摄氏度的环境中储存。其中，未使用的微孔条应重新装入密封带中密封，干燥剂不要去除。稀释后的浓缩清洗液可以在2至30摄氏度条件下，保存14天，其余试剂应在8周内用尽。
Platelia TM曲霉菌抗原检测试剂盒中用的酶是过氧化氢酶，酶反应底物是四甲基联苯胺（TMB）。有些酶反应底物有致癌作用，但四甲基联苯胺没有，而且灵敏度较高，所以四甲基联苯胺是很好的酶反应底物。这种检测方法中，溶液会从蓝色变成黄色。
酶联免疫吸附测定法包括双抗体夹心法、双位点一步法、间接法测抗体、竞争法、捕获法。其中，双抗体夹心法是酶联免疫吸附测定法中最常用的一种，Platelia TM曲霉菌抗原检测试剂盒采用的就是这一种。
除了患者的血清，Platelia TM曲霉菌抗原检测试剂盒还可以用患者的肺泡灌洗液作为检测样本。
2.4检测结果的临床意义
半乳甘露聚糖的实验检测值小于0.65μg/L时为阴性，此时不建议医师采取抗曲霉菌治疗患者；半乳甘露聚糖的实验检测值在0.65~0.85μg/L时，定义为灰区，此时患者处于观察期，建议医师连续监测患者；半乳甘露聚糖的实验检测值大于0.85μg/L时，检测结果为阳性，此时建议医师结合其他症状诊断治疗患者的病，比如放射影像诊断、微生物培养诊断、活组织切片的病理分析。
另外，许多情况能导致半乳甘露聚糖的结果出现假阳性、假阴性。
导致半乳甘露聚糖结果呈假阳性的情况有：患者是以乳、乳制品为主食的婴幼儿；患者接受了异体骨髓移植；患者使用了半合成青霉素（特别是他唑巴坦、哌拉西林）；患者患有菌血症；患者自体抗体阳性；患者接受了血液透析；患者患有自身免疫性肝炎；患者食用了被污染的大米、可能含有半乳甘露聚糖的牛奶等高蛋白食物。
导致半乳甘露聚糖结果呈假阴性的情况有：患者的病情不够严重；患者使用了抗真菌药物；患者缺乏非粒细胞；患者体内曲霉菌释放到血液循环中的半乳甘露聚糖、甘露聚糖都被很快清除了。
论文作者:李光斌
论文发表刊物:《医师在线》2019年21期
论文发表时间:2020/3/24
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