广元市第四人民医院，邮编：628000
摘要：目的 探究CIK细胞治疗老年非小细胞癌患者循环肿瘤细胞EMT的影响。方法 选取本院2015年1月~2017年1月收治的98例老年肺癌患者为观察组，并选择同期42例体检健康人员为对照组，分析CIK患者与临床病理特征的关系、治疗前后循环肿瘤细胞中EMT标志物表达变化、卡式行为状态评分、毒副反应。结果 上皮细胞标志物CK19、E-cadherin及EMT标志物Vimentin、Snail的mRNA阳性表达率分别为89.80%、17.35%，65.31%、62.24%；治疗后卡式行为状态评分明显优于治疗前（P<0.05）。大部分患者都没有显著不适感。结论 老年肺癌患者循环肿瘤细胞内有EMT，和肿瘤发展具有相关性，自体CIK细胞治疗对EMT有抑制作用，改善患者生活质量。
关键词：CIK；老年非小细胞肺癌；循环肿瘤细胞；EMT；影响
非小细胞肺癌的发病率较高，占肺癌的4/5左右，有3/10的患者可进行手术治疗，有4/5左右患者发现时已经处于中晚期。CIK具有多种特点，如溶瘤活性高于溶瘤谱广等，因此，其在肿瘤生物治疗方面有推广价值[1]。本研究探究了CIK细胞治疗老年非小细胞癌患者循环肿瘤细胞EMT的影响，报告如下：
1资料与方法
1.1一般资料
选取本院2015年1月~2017年1月收治的98例老年肺癌患者为观察组，其中有男64例，女34例，年龄66~81岁，平均年龄72.3岁。并选择同一时期42例体检健康人员为对照组，其中男23例，女19例，年龄61~76岁，平均年龄71.5岁。两组年龄等基本资料的对比差异无统计学意义（P>0.05）。
1.2方法
第一，血样处理。采集两组受检对象的外周血10ml，在室温下保存于EDTA管内，在4小时内进行处理。混合血样和10倍体积溶血素，冰上孵育15分钟，每分12000r离心，离心5分钟，丢弃上清液，PBS洗涤两次，制作成细胞悬液。第二，循环肿瘤细胞的免疫磁性标记、富集与分选。把单克隆EpCAM抗体偶联的雌性微珠与Fc受体阻断剂分别为100μl、100μl加到样本细胞悬液内混合，在4~8摄氏度下孵育半小时，随后根据操作说明把细胞悬液流经置在磁场中MS分选柱予以EpCAM阳性细胞分选。因为分选的细胞数量有一定限制，为了防止冻存后细胞受损，对分选后的EpCAM阳性细胞及时予以RNA提取与检测。第三，RT-PCR法。利用RT-PCR法对借助MACS富集的循环肿瘤细胞有关基因表达予以检测。根据说明书采用Trizol试剂盒，对样本RNA进行提取，逆转录试剂盒与扩增试剂盒都由大连宝生物工程公司提供。全部引物都由此公司设计与合成。第四，CIK细胞的制备与回输。对患者外周血单个核细胞利用血细胞分离机予以采集，通过淋巴分离液予以梯度离心20分，选择白膜层的单个核细胞，利用生理盐水进行三次洗涤。把细胞放置在IFN-γ1000U/ml无血清培养基，37摄氏度，5%二氧化碳中培养。1天后将抗CD3单抗100ng/ml加入，人重组IL-21000U/ml，隔一天对维持液进行更换，培养8至10天，根据4×109/次回输到病人体内。根据操作标准进行回输与培养。第五，观察CIK治疗前与治疗后症状与毒副作用，并进行针对性处理。治疗2周后对患者的症状改善情况认真观察，根据卡式行为状态对细胞治疗前后情况予以评定。
1.3统计学分析
选择SPSS17.0统计软件，计数资料用%表示、X2检验，P<0.05有统计学意义。
2结果
2.1临床病理特征的联系
CK19的阳性表达率与肿瘤大小、血型转移、病理分型与淋巴结转移具有相关性；Vimentin、Snail表达和肿瘤大小、病理分期、血行转移、淋巴结转移具有相关性。
2.2观察组治疗前后循环肿瘤细胞中EMT标志物表达变化
上皮细胞标志物CK19、E-cadherin及EMT标志物Vimentin、Snail的mRNA阳性表达率分别为。如表1。
2.2CIK治疗对卡式行为状态评分的影响与毒副反应
患者卡式行为状态评分80分、70分、60分治疗前分别有50例、30例、18例，治疗后分别为卡式行为状有60例、38例，2例，治疗后评分明显均优于治疗前（P<0.05），有统计学意义。大部分患者都没有显著不适感。
3讨论
因为老年人生理功能的降低，再加上伴随多种疾病，导致老年肺癌患者对化疗的耐受性不强，不良反应较多，对老年非小细胞肺癌的治疗比较关注。CIK就是把人外周血单个核细胞于体外用的多种细胞因子一同培养一定时间后获得的异质细胞。因为此种细胞可将CD3+与CD56+膜蛋白分子同时表达，因此，也叫作NK细胞样T淋巴细胞，并同时具有T淋巴细胞的强大抗瘤活性，以及较强的NK细胞非MHC限制性杀瘤特点。CIK细胞被认为是新型抗肿瘤过继细胞免疫治疗的首选治疗方法。CIK治疗属于细胞免疫治疗的重要内容，有高效低毒的特点，为老年肺癌患者的治疗提供有利条件[2]。研究表明：CIK治疗可使肺癌患者的免疫功能显著改善，使疾病控制率与生活质量明显提升，但作用机制还不清楚[3]。
本研究结果表明：CK19的阳性表达率和肿瘤大小、血型转移、病理分型与淋巴结转移具有相关性；Vimentin、Snail表达和肿瘤大小、病理分期、血行转移、淋巴结转移具有相关性；上皮细胞标志物CK19、E-cadherin及EMT标志物Vimentin、Snail的mRNA阳性表达率分别为89.80%、17.35%，65.31%、62.24%；说明对Snail等的mRNA表达联合检测，可对患者的预后有效预测；CIK可借助对EMT的抑制，对肿瘤发展进行抑制。研究还表明：治疗后卡式行为状态评分明显优于治疗前（P<0.05），有统计学意义，大部分患者都没有显著不适感，说明CIK治疗后患者的生活质量可得到显著改善，与相关学者研究一致。
总之，老年肺癌患者循环肿瘤细胞内有EMT，和肿瘤发展具有相关性，自体CIK细胞治疗对EMT有抑制作用，提高患者生活质量。
参考文献：
[1]朱婷,江蓓蕾,江茜,等.自体CIK细胞治疗对中晚期非小细胞肺癌患者免疫功能及生活质量的影响[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2015,22(01):84-88.
[2]琚芳芳,李宝平,张雷,等.吉非替尼联合自体DC/CIK细胞治疗对晚期非小细胞肺癌临床研究[J].中外医疗,2016,35(14):61-63.
[3]岳恺.自体免疫细胞联合TP化疗方案对老年晚期非小细胞肺癌患者生存的影响[J].中国老年学,2015,35(16):4563-4565.
论文作者:陈小乐,李树建,张凯
论文发表刊物:《医师在线》2017年10月上第19期
论文发表时间:2017/12/21
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