(山西省太原市第四人民医院五病区 山西太原 030053)
【摘要】目的：探讨干扰素释放酶联免疫法（TB-IGRA）与结核抗体蛋白芯片在活动性结核的诊断价值。方法：收集2015年5月至2017年1月之间，240例确诊的结核病患者同时进行结核抗体蛋白芯片检测和ELISA法定量检测血清γ-干扰素的含量,并对其结果行回顾性分析。结果：TB-IGRA检测对结核病的诊断灵敏度为89.17%，约登指数为0.892，结核抗体蛋白芯片检测对结核病的诊断灵敏度为43.75%，约登指数为0.438，两种方法诊断灵敏度的数据差异具有统计学意义（χ2=111.040，P<0.05），从数值上看，TB-IGRA的方法高于结核抗体蛋白芯片的方法。结论：TB-IGRA技术和结核抗体蛋白芯片两种方法对于结核病的诊断，都是比较简单和快捷的方法，TB-IGRA比结核抗体蛋白芯片检测有更高的检测灵敏度，是一种有价值的结核病诊断的检测方法，值得在临床范围内进行推广和深入研究。
【关键词】干扰素释放酶联免疫法（TB-IGRA）；蛋白芯片；结核诊断
【中图分类号】R52 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2017）11-0090-03
根据文献报道，全世界大约有30%以上的人群被结核菌感染[1]，结核病已经成为了一个世界性的公共卫生问题，我国为结核病高发国家[2]，我国结核病的发病报告人数在法定传染病中一直排在前列[3]。目前对于结核病的诊断已经发展出了很多种方法，比如痰抗酸杆菌涂片、痰结核杆菌培养、X线胸片、PPD试验、结核－聚合酶链反应（TB-ＰＣＲ）检测等，但是直到今天对于结核病的诊断，也奉行多种手段综合使用的原则，在1976年Nassau[4]在世界上第一次报道了利用酶联免疫吸附方法对结核分枝杆菌抗体进行检测取得成功，而且从测试的结果看，该种方法对于结核病的诊断有重要的参考价值，以此为分界点，利用血清学方法对结核病的诊断逐渐成为了对活动性结核的重要诊断方法之一。TB-IGRA技术是现在国际上最新型的用于结核病菌感染状况进行诊断的体外免疫诊断方法，该方法在北美、欧洲和日本已经被广泛应用在结核杆菌感染的检测过程中，包括结核病的辅助诊断、高危人群的筛查和公共卫生突发事件与体检等等，美国和日本已经把该项技术写进了本国用于防治结核病的指导原则之中。随着分子生物学技术的飞速发展，结核抗体蛋白芯片技术作为生物芯片技术的一种新式检测方法已经被广泛应用在临床，其检测的基本原理是以微孔滤膜为载体，将结核菌的特异性细胞壁脂多糖抗原LAM和基因工程重组 DNA技术生产纯化的结核菌16kD和38kD特异性抗原固定在特制载体上，抗原抗体反应在固相膜上进行反应,免疫金标记物在膜上显色，然后通过芯片阅读仪器进行结果分析。分别测定出抗结核菌的特异性细胞壁脂多糖LAM的抗体、16kD抗体和38kD抗体，实现了这三种抗体进行同步检测,从而对结核菌感染做出诊断[5]。本研究选取我院五病区240例确诊的结核病患者，利用TB-IGRA技术和结核抗体蛋白芯片对该人群进行诊断，对两种方法的诊断价值进行对比和分析，现报告如下：
1.材料与和方法
1.1一般资料
选取我院2015年5月到2017年1月之间，在我院五病区确诊为结核病的病例240例，其中男性137例，占据人群的57.08%，女性103例，占据人群的42.92%。患者的年龄分布在16岁到63岁之间，平均年龄34.23±14.58岁。其中肺结核病例158例，结核性胸膜炎病例63例，肺外结核病例19例，肺外结核包括颈部淋巴结核6例，腰椎结核4例，泌尿系结核4例，盆腔结核2例，胸壁结核2例，皮肤结核1例。所有病例均排除合并免疫缺陷性疾病，既往未使用免疫抑制剂。
1.2 诊断标准
选择病例对象经过临床诊断、影像学诊断、实验室诊断、组织病理学诊断、临床治疗评价等，根据中华医学会编著的《临床诊疗指南结核病学分册》标准确诊。[6]
1.3 主要试剂与仪器
本研究中的γ－干扰素释放试验（ＴＢ－ＩＧＲＡ）采用北京市万泰生物药业股份有限公司提供的结核分枝杆菌相关γ－干扰素检测试剂盒（体外释放酶联免疫法）。结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒（蛋白芯片）和PBT-X2型芯片阅读器由南京大渊生物技术工程有限责任公司生产。
1.4 方法
1.4.1γ－干扰素释放试验（ＴＢ－ＩＧＲＡ） 所有患者均进行空腹静脉血采集，静置培养后离心收集上清液，用酶联免疫吸附法检测上清液中γ-干扰素的含量。具体操作方法及结果判段参考试剂盒说明书。
1.4.2结核抗体蛋白芯片法 检测血清抗结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露醇（LAM）、基因工程重组的16kD（结核分枝杆菌蛋白，分子量16kD）和38kD（结核分枝杆菌蛋白，分子量38kD）IgG 抗体，依照该检测系统规定方法进行操作，阴性和阳性结果根据南京大渊生物技术工程有限公司生产的芯片识别仪器设置参数自动判别。结核抗体蛋白芯片判定结果见表1。本研究取前两项作为结核抗体蛋白芯片阳性结果。
1.4.3研究指标 对两种方法对于结核病人诊断的灵敏度，特异度和约登指数等诊断价值指标进行比较。
1.5 统计学分析
对数据进行描述性分析，计量资料结果使用（x-±s）表示，利用Microsoft Excel 2007建立数据库，采用SPSS19.0软件进行统计学处理，两组计数数据比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2.结果
利用TB-IGRA技术和结核抗体蛋白芯片对该人群进行诊断的结果
TB-IGRA技术对结核病的诊断灵敏度为89.17%，约登指数为0.892，结核抗体蛋白芯片对结核病的诊断灵敏度为43.75%，约登指数为0.438，两种方法诊断灵敏度的数据差异具有统计学意义（χ2=111.040，P<0.05），从数值上看，TB-IGRA的方法高于结核抗体蛋白芯片的方法，具体如表2-3所示。
3.讨论
结核病是当今全球范围对人类最具威胁性的感染性疾病之一，是单病因所致的感染性疾病中病死率最高的疾病，我国是全球22个高负担国家之一，结核病的患病人数在世界居第二位 [8]，因此结核病的早期诊断、早期发现对该病的预防和治疗有极其重要的意义。结核分枝杆菌是结核病的致病菌群，以呼吸道传播为主要传染方式，肺部的结核感染是最常见的一种感染形式，当然也可以引起全身各个脏器的病变，目前肺外结核（包括结核性脑膜炎、腰椎结核、泌尿系结核等）的发病率也越来越高，尤其早期临床症状不典型，常难以做出明确诊断，造成一些结核病在临床的漏诊和误诊。长久以来对于结核病的诊断一直就是研究的热点，尽管现在人类已经拥有了很多比较成熟的方法，比如依靠患者的临床症状、胸片和实验室检查，但是经过研究发现，被认为是诊断金标准的痰涂片和痰培养，对于抗酸杆菌涂片阳性率的平均检出率也只能维持在25%至35%的水准[9]，对于那些在肺外产生结核病变的患者来说，痰涂片和痰培养就无法作为确诊的方法，对病理组织进行采样又可能对组织产生损伤而且价格比较高，所以对于新型诊断方法的检测，研究者们一直没有停止过开发。
γ－干扰素释放试验（TB-IGRA）是近年来发展的检测结核病的一种新型免疫学诊断方法，已在临床上得到广泛应用。其作用原理为当人体感染结核分枝杆菌后，能产生特异性T淋巴细胞，并存在于外周血中，外周血中的特异性T淋巴细胞再次接触结核抗原后被激活，并分泌γ－干扰素。TB-IGRA用结 核分枝杆菌特异抗原在体外刺激待检者的全血，经过培养后，利用酶联免疫吸附试验定量检测血清中的γ－干扰素含量变化，即可判断体内是否存在结核特异的T淋巴细胞，进而说明是否存在结核分枝杆菌感染[10]。其检测结果灵敏度较高，不受卡介苗及其他致病性非结核分枝杆菌 的干扰[11]。蛋白芯片法检测患者血清中16KD蛋白、38KD蛋白及脂阿拉伯甘露聚糖LAM三种抗原的特异性抗体，是一种快速，操作简单的诊断方法，该方法不受人为因素的影响，结果相对客观准确。其中38KD和16KD抗原是结核分支杆菌所特有的抗原，与非结核分枝杆菌不存在交叉反应，LAM为分支杆菌属细胞壁的重要组成部分，诊断的准确性理论上应该比较高。但是在本研究中的结果发现，TB-IGRA方法的诊断价值比较高，与大部分文献的报道一致，可是结核抗体蛋白芯片的诊断价值却远远逊色于TB-IGRA方法。在本研究中结核抗体蛋白芯片方法的诊断灵敏度仅为43.75%，其原因为在本研究中对于结核抗体蛋白芯片结果的判定方法是，38kD、16KD、LAM同时为阳性或38kD、LAM同时为阳性，才能判定为结核抗体蛋白芯片结果阳性，确诊结核病，此判定的标准较一般的阳性判定标准有所提高，所以诊断的灵敏度有些下降。作为对患者的诊断，诊断的特异度才是更重要的，但是本研究只采用了确诊的病例进行测试，没有用健康人进行两种方法的检测，所以对于检测的特异度的数值，也需要将来进行深入研究。
综上所述，TB-IGRA技术和结核抗体蛋白芯片两种方法对于结核病的诊断，都是比较简单和快捷的方法，TB-IGRA比结核抗体蛋白芯片检测有更高的检测灵敏度，是一种有价值的结核病诊断的检测方法，值得在临床范围内进行推广和深入研究。
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论文作者:刘华栋,王利芬 杨芳,白永忠,常蕴青
论文发表刊物:《心理医生》2017年11期
论文发表时间:2017/5/27
标签：结核论文; 结核病论文; 抗体论文; 蛋白论文; 芯片论文; 方法论文; 杆菌论文; 《心理医生》2017年11期论文;