浅析配伍生地黄、熟地黄对制马钱子抗炎、镇痛影响的实验研究论文_李影

浅析配伍生地黄、熟地黄对制马钱子抗炎、镇痛影响的实验研究论文_李影

黑龙江省哈尔滨市依兰县人民医院 154899

摘要:目的:研究分析以前期试验证明配伍均可显著降低制马钱子的毒性为基础,研究制马钱子与生地黄、熟地黄配伍对制马钱子在风湿病治疗中的抗炎和镇痛作用的影响,为安全、合理、有效地使用制马钱子提供实验依据。方法:将制马钱子分别与生地黄、熟地黄以不同比例配伍,对实验用SPF级昆明小白鼠,分别进行毛细血管通透的抗炎实验和热板法的镇痛实验。结果:各配伍组与制马钱子组相比,制马钱子的抗炎、镇痛效果,没有明显的差异。结论:生地黄、熟地黄与制马钱子配伍能显著降低制马钱子的毒性,且对其抗炎、镇痛效果均无明显的影响。

关键词:制马钱子;生地黄;熟地黄;抗炎;镇痛;实验研究;动物;小鼠

[Abstract]Objective:To study the analysis on the previous test proved that the compatibility can significantly reduce the toxicity of Strychnos based effect of Strychnos and radix rehmanniae,Radix Rehmanniae Preparata compatibility on anti-inflammatory and analgesic effects of strychnine in the treatment of rheumatic diseases,safe,rational and effective use of Strychnos to provide experimental basis for.Methods:Strychnos respectively with radix rehmanniae,Radix Rehmanniae with different proportions,to experiment with SPF Kunming mice,the analgesic experiments of antiinflammation and hot plate method were the capillary permeability.Results:compared with different combinations of Strychnos group,anti-inflammatory and analgesic effect of Strychnos,there is no obvious difference.Conclusion:Radix rehmanniae,Radix Rehmanniae and the compatibility of Strychnos nux vomica can significantly reduce the toxicity,and the anti-inflammatory and analgesic effect had no obvious influence.

[Key words]Strychnos;Radix Rehmanniae;Radix Rehmanniae;anti inflammation;analgesia;experimental study;animal;mice

马钱子是一味常用中药,历代典籍多有记载,都盛赞其治疗效果;同时,因其中含有剧毒,临床上因服用马钱子制剂导致中毒的事件也经常发生。为了降低其毒性,历代医家尝试了各种方法,有炮制减毒、配伍减毒、减少用量减毒等。其中配伍减毒是最常用、最方便、且易于掌握的方法。本实验以生地黄和熟地黄与制马钱子配伍,前期实验证明均可显著降低制马钱子的毒性[1],对制马钱子的毒性起到约束的作用。而临床上使用制马钱子时不仅要降低其毒性,更要发挥其治疗作用。寻找不影响其治疗效果或者能增强其治疗效果的配伍是本实验的出发点。娄玉钤教授在临床已使用,并经过大量的病例积累认识到可以降低其毒性的配伍,符合中医配伍减毒理论,并在实验中也得到证实。作为常用的治疗风湿类疾病的药物,制马钱子的抗炎、镇痛作用较为重要。本实验从这两个指标入手观察对其的影响,为临床使用提供帮助。

1 实验材料

1.1 药 品

1.1.1 制马钱子粉 将马钱子(由河南风湿病医院提供,统一购于河南省药材公司)经砂烫法炮制后,置于超微粉碎机中,粉碎10 min后取出,过200目筛即得。用高效液相色谱仪测得士的宁含量为14.43 mg·g-1,马钱子碱4.79 mg·g-1,经河南风湿病医院中药鉴定教研室鉴定,符合《中国药典》标准。

1.1.2 生地黄浸膏 将生地黄饮片(购于河南省药材公司)置煎药机中,加18倍水煎煮1.5 h,浓缩至1 g膏相当于原生药1.948 g。水浴灭菌30 min,低温冷藏,实验时与制马钱子按配伍比例制成混悬液。

1.1.3 熟地黄浸膏 取熟地黄饮片(购于河南省药材公司),置煎药机中,加18倍水煎煮1.5 h,浓缩至1 g膏相当于原生药2.18 g,水浴灭菌30 min,低温冷藏,实验时与制马钱子按配伍比例制成混悬液。

1.2 配伍比例 本实验所选取的制马钱子与生地黄和熟地黄配伍的比例是娄玉钤教授在临床上业已使用并证明有效的比例。分别为制马钱子生地黄122、127.7、133.4,制马钱子熟地黄122、127.7、133.4。

所用生地黄、熟地黄是流浸膏,实验中按照其浓缩程度来确定其使用剂量。以制马钱子粉生地黄122为例,生地黄浸膏浓缩程度为1 g浸膏相当于原生药1.948 g,在配伍中实际使用的是11.948,余同(为了方便于临床参考,仍以原药材的比例表示)。

1.3 动 物 SPF级昆明小鼠,体重18~22 g,抗炎实验雌雄兼用,镇痛实验仅用雌鼠,由郑州大学动物实验中心提供,合格证号为0008746,在河南中医学院动物实验中心统一喂养。

2 方 法

2.1 实验方法 分抗炎、镇痛两个实验进行,制马钱子Dm(最小100%死亡量)为90 mgkg-1,

Dn(最大0不死量)为50 mgkg-1[2]。

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2.2 配伍制马钱子的抗炎实验

2.2.1 动物分组 雌雄各半,按体重、性别随机分组,分别为对照组,制马钱子组,制马钱子粉生地黄122组,制马钱子粉生地黄127.7组,制马钱子粉∶生地黄133.4组,制马钱子粉熟地黄122组,制马钱子粉熟地黄127.7组,制马钱子粉熟地黄133.4组,共8组,每组10只。

2.2.2 给药的状态及时间 按照 上述比例配成制马钱子与生地黄浸膏、熟地黄浸膏的混悬液,统一以0.3 ml·(10g)-1给药,每天1次,连续灌胃给药5天,定时给药。

2.2.3 给药剂量 对照组给予等容积蒸馏水,给药标准为制马钱子50 mg·kg-1(以制马钱子最大不死量Dn作为给药剂量),其余各配伍组中马钱子的含量也必须达到此含量,保证动物长期灌胃不死亡,同时发挥最大药效(为了方便对比均写做50 mgkg-1)。

2.2.4 抗炎结果的获得 于末次给药后30 min,各小鼠尾按小鼠体重每10 g静脉注射0.50%依文思兰溶液0.1 ml,随即按小鼠体重于小鼠腹腔注射0.60%的冰醋酸溶液0.1 ml,20 min后脱颈椎处死,腹腔注射5 ml生理盐水,轻揉小鼠腹部,使腹腔内染料充分溶于生理盐水中并混合均匀,剪开腹部肌肉,吸管吸出洗涤液4 ml,加生理盐水至10 ml,置离心机中以3000 r·min-1离心15 min,取上清液在紫外分光光度计上595 nm比色测定吸光度。

2.3 配伍制马钱子的镇痛实验

2.3.1 动物的筛选及分组 将购回的小白鼠采用GJ-8402型热板测痛仪,自动控温在(55±0.5)℃,将小鼠置恒温盒内,以小鼠舔后足的时间为痛阈值,选择痛阈值在5~30 s的雌性小鼠80只,随机分组,分别为对照组,制马钱子组,制马钱子粉生地黄

122组,制马钱子粉生地黄127.7组,制马钱子粉生地黄133.4组,制马钱子粉熟地黄122组,制马钱子粉熟地黄127.7组,制马钱子粉熟地黄133.4组,共8组,每组10只。

2.3.2 给药剂量 对照组给予等容积蒸馏水,给药的剂量分别为制马钱子50 mg·kg-1,其余各配伍组中马钱子的含量也必须达到此含量,保证动物长期灌胃不死亡,同时发挥最大药效(为方便对比均写做50 mg·kg-1)。

2.3.3 给药的物理状态 按照即定比例配成制马钱子与生地黄浸膏、熟地黄浸膏的混悬液,统一以0.3 ml·(10g)-1给药,每天1次,连续灌胃给药5天,定时给药。

2.3.4 镇痛结果的获得 于末次给药后30 min、60 min、120 min、180 min分别测定小鼠痛阈值。

2.4 统计学方法 组间资料采用t检验,所用计量资料均用表示,所有数据采用SPASS17.0统计软件进行分析,以P<0.05为差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 制马钱子与生地黄配伍后的抗炎实验 各组与对照组比较,制马钱子组和各配伍组均能明显抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加,有显著性差异(P<0.05);各配伍组与制马钱子组比较,均无统计学意义,无明显增强抗炎作用(但生地黄有增强马钱子抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的趋势);各配伍组组间比较没有明显差别。

3.2 制马钱子与熟地黄配伍后的抗炎实验 各组与对照组相比P<0.05,具有显著性差异。其中熟地黄各配伍组与对照组相比P<0.01,具有极显著性差异;熟地黄各配伍组与制马钱子组相比P>0.05,没有显著性差异;各配伍组组间比较没有显著性差异。

3.3 制马钱子与生地黄配伍后的镇痛实验 各组与对照组比较,在给药60~120 min后制马钱子组和配伍组均能明显提高小鼠的痛阈值,有极显著性差异(P<0.01);与制马钱子组比较,制马钱子粉生地黄122与制马钱子粉生地黄127.7在给药30 min后能提高小鼠的痛阈值,有显著性差异(P<0.05);制马钱子配伍生地黄各比例组在给药60~180 min后没有提高小鼠痛阈值。

3.4 制马钱子与熟地黄配伍后的镇痛实验 ①各组和对照组相比,只有制马钱子熟地黄127.7在120 min时和对照组相比有显著性差异,其余各组均没有显著性差异;②各配伍组和制马钱子组相比,在所测的时间段内均没有显著性差异;③各配伍组组间比较,在所测定的时间段内均无显著性差异。

4 讨 论

从实验结果来看,含有制马钱子的各组均具有抗炎效果,但是各配伍组与制马钱子组比较,没有明显的差异,这样的配伍不能明显增强制马钱子的抗炎效果,也没有明显降低其抗炎作用。配伍中可能存在一个临界比例,之前是一种趋势,之后是另一种趋势,有待于继续将实验细化,配伍比例更均匀,现提出供参考。含有制马钱子的各组均没有明显的镇痛效果,仅有一组在特定时间才能发挥镇痛作用,并且没有规律可循。各配伍组和制马钱子组之间也没有明显增加其镇痛效果的趋势。

马钱子在风湿类疾病治疗中的效果,从过去到现在一直受到重视。本实验的结果并结合前期的实验结果[1]证明,这样的配伍可以显著地降低马钱子的毒性,且几乎不影响其抗炎、镇痛效果。在实验室条件下这样的配伍可以安全使用,供临床使用参考。

参考文献:

[1]苗根旺,娄玉钤,李朝阳,等.配伍生地黄、熟地黄对制马钱子毒性影响的实验研究[J].风湿病与关节炎,2012,1(5):19-22.

[2]白明,刘雅敏,娄玉钤,等.制马钱子粉急性毒性试验研究[J].风湿病与关节炎,2012,1(1):41.

论文作者:李影

论文发表刊物:《健康世界》2016年第24期

论文发表时间:2017/1/13

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