谢振兴[1]2005年在《产蛋鸡TGE免疫和蛋黄抗体制备与ELISA的建立及其对白细胞介素-Ⅱ的影响》文中指出本文成功建立了检测猪传染性胃肠炎(TGE)蛋黄抗体的酶联免疫吸附分析方法(ELISA);并用TGE-PED(猪流行性腹泻)二联灭活苗、弱毒苗免疫伊莎蛋鸡来制备蛋黄抗体,及高免蛋黄粉;用间接ELISA方法检测血清及蛋黄液中抗体效价,以研究其消长规律,同时也测定了喷雾干燥后蛋黄粉的效价;最后,探讨了免疫鸡血清中甲状腺激素和白细胞介素-Ⅱ的变化。 1.检测猪传染性胃肠炎(TGE)蛋黄抗体的酶联免疫吸附分析方法(ELISA)的建立 用ELISA方法检测猪的抗TGE抗体的报道较多,但检测TGE蛋黄抗体的间接ELISA方法尚未见报道。本试验用TGE病毒颗粒作为抗原,用方阵试验确定抗原最佳包被浓度为82ng/ml,建立了检测TGE多克隆蛋黄抗体的间接ELISA方法,并对其稳定性进行了检验,结果表明,抗原包被浓度为82ng/ml时,检测鸡的阳性血清具有良好的特异性,而对阴性血清有较小的本底反应(效价在1:20以下),稳定性试验也表明,该方法具有较好的稳定性:如板间误差(n=3)为2.9%(阳性对照)、10.8%(阴性对照);板内误差(n=4)为5.3%(阳性对照)、3.2%(阴性对照)。 2.两种疫苗先后免疫后鸡血清和蛋黄抗体的变化及TGE蛋黄粉的制备 试验选用18只200日龄的健康产蛋鸡,按体重分为试验组、对照组,各9只,单笼饲养,饲养条件相同。先用猪TGE-PED二联灭活苗三次免疫试验组,琼脂扩散试验在试验鸡血清中未检测到抗体;改换猪TGE-PED二联弱毒苗三次免疫后,琼脂扩散试验已在5只鸡血清中监测到了抗体;分别于试验的第0、30、83、133、155、171、185、208和232天,对试验和对照组采集并分离血清,并于第171、179、185、195、199、208、232、266、295、326和361天收集蛋黄液,比较血清及蛋黄液中抗体效价动态变化及消长规律。结果表明:TGE-PED二联弱毒苗表现出比TGE-PED二联灭活
朱彤[2]2000年在《蛋黄抗体的基础与应用研究》文中研究说明IgY是一个低级的血清免疫球蛋白，能转运至蛋黄，使后代获得被动免疫保护。在功能上类似IgG。由于IgY具备与哺乳动物IgG不同的理化性质和生物学活性，因此IgY广泛应用于免疫检测制剂和免疫治疗制剂。 目前在蛋白质功能上仍未有证据证明免疫球蛋白进化中高度保守区的存在。为了证实免疫球蛋白在进化中存在高度保守的同源区域，本实验用鼠抗鸡IgY单克隆抗体和多克隆抗体，去识别不同种系动物的免疫球蛋白与IgY共有的抗原决定簇。在研究中采用dot-ELISA法检测出抗鸡IgY抗血清与鸟类免疫球蛋白样品（鸽、鹤鹑、鸭、鹅）发生阳性交叉反应，并通过间接ELISA试验验证了dot-ELISA的阳性检测结果。从制备的13株抗鸡IgY单克隆抗体中未能筛出识别三个种系以上的免疫球蛋白样品的McAb，提示常规免疫及细胞融合方法很难筛到识别IgY同源决定簇的McAb。进而采用鸡IgY分别与各种免疫球蛋白（虾、鱼、鳖、鸽、鸭、兔、马、人）作基础、强化免疫，Balb/c小鼠所产生的抗血清分别与上述各强化免疫样品作ELISA检测，结果显示我们设计的交替免疫方案能增加IgY同源决定簇的丰度，增强识别IgY同源决定簇的抗体分泌，所产生的多克隆抗体能同时与多种系免疫球蛋白样品发生交叉反应，并初步显示IgY同源决定簇可能存在于被测的各种系免疫球蛋白中，且至少鸡IgY与各禽类蛋黄抗体存在共同的抗原决定簇。在蛋黄抗体应用研究上，运用杂交瘤制备技术，筛选到两株鼠抗鸡IgY单克隆抗体，分别命名为DFF和DFA。经单克隆抗体相加试验和Western-Blot试验证实，它们分别识别IgY重链上的不同位点。其中高亲合力的DFF标记HRP，在国内率先建立了间接ELISA法检测特异性蛋黄抗体的技术平台。在抗传染性腹泻的多价鸡蛋黄抗体的研究中，采用自立的蛋黄抗体ELISA法检测技术，确立了霍乱弧菌致病性大肠杆菌基因工程疫苗免疫鸡，产生高滴度抗体的免疫规程，特异的IgY抗体显示识别、结合霍乱毒素的能力，为进人临床应用创立必要的技术条件。
王勇德[3]2004年在《抗人大肠杆菌免疫鸡蛋黄抗体的研究》文中研究说明高免蛋黄抗体具有生产过程简单、效率高等特点，已越来越多地应用于人类许多疾病的预防和治疗以及生物学的高度特异性检测等领域中，并取得显著成效。本文主要研究了以人致病性大肠杆菌为抗原，免疫母鸡，研究获得含有高效价蛋黄抗体的鸡蛋的最佳条件；建立快速、准确、定量的酶联免疫吸附试验(ELISA)测定蛋黄抗体(IgY)效价的技术；研究抗人大肠杆菌IgY分离纯化条件及其理化、生化特性；研究食品加工过程中的各种因素对大肠杆菌特异IgY生物活性的影响；探讨抗人大肠杆菌免疫鸡蛋抗体的功能及其机理；评估蛋黄抗体的安全性。主要获得如下结果： (1) 对获得含有高效价蛋黄抗体的鸡蛋的最佳条件研究发现： (a) 以大肠杆菌悬浮液对20周龄京白蛋鸡免疫时，若固定免疫抗原剂量为0.5ml，则当菌液浓度低于1×10~9 cfu／ml，免疫应答强度随免疫剂量的降低而降低，当菌液浓度高于1×10~9 cfu／ml时，免疫应答强度不会随免疫剂量的增加而得到明显加强。因此，确定最佳免疫剂量为每次0.5ml菌液浓度为1×10~9 cfu／ml的大肠杆菌悬浮液。 (b) 在大肠杆菌悬液中添加等量的福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂和白油佐剂能明显加强免疫应答强度，其中福氏完全佐剂对免疫应答加强的程度最高。 (c) 胸部皮下注射、翅下皮下注射、大腿皮下注射、颈背皮下注射、胸部肌肉注射、翅下肌肉注射、大腿肌肉注射和颈背肌肉注射8种不同免疫途径对免疫应答反应强度没有明显影响。 (d) 强化免疫程序能大大加强产蛋母鸡的免疫应答强度，其中初免后，每隔1周强化免疫一次，连续4次，此后每1月仅用佐剂抗原强化免疫1次的强化免疫程序既经济又有效。 (2) 采取热酚法提取E.coli LPS作为抗原，以酶标记的兔抗鸡IgY抗抗体(IgG)为二抗建立起来的间接ELISA技术检测特异蛋黄抗体IgY的抗体效价，以酶标二抗工作浓度为1：2000，LPS抗原包被浓度为1：20(10ug／ml)，可以检测到鸡特异IgY抗体效价为1：10240。用猪源EHEC和人源沙门氏菌的LPS抗原进行了交叉检测，表现出高度的特异性。 (3) 通过对蛋黄抗体(IgY)的分离纯化条件研究发现，乙醇沉淀抗体的最佳条件是粗提液：乙醇(V／V)为1：0.35；经DEAE-Sephrose fast-flow离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶排阻层析连续纯化后可得到电泳纯的抗人大肠杆菌IgY，其MW为186400Da(电泳法)或186500Da(凝胶过滤法)，该抗体由两个亚基构成，分子质量分别为65900Da和24600Da，其等电点为5.5。 (4) 通过稳定性研究发现： (a) 抗人大肠杆菌IgY抗体在高温下(≥75℃)容易发生热变性，其热变性的反应级数为1.5，其热变性温度点为75.0℃。西南农业大学博l:学位论文 (b)抗人大肠杆菌抗体在酸性环境容易发生变性，而在中性和弱碱性环境中能较好的保持稳定，其主要变性发生在pH2.5一3.0。 (c)胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶对抗人大肠杆菌抗体的活性保持均有不利的作用，但发现，经上述3种消化道蛋白质水解酶部分作用后形成的抗体水解物仍具有一定的抗体活性。进一步研究确定，在灌胃后lh内，小肠内抗体活性基本保持在最高水平，而在Zh之后，抗体活性大幅度下降，在灌胃后16h已经下降到了非常低的水平。 (d)将抗人大肠杆菌抗体贮存在O℃和4℃是比较合适的，若贮存在25℃以上的温度下，抗体活性损失随贮存期的延长而不断下降。 (e)加热处理、蛋白酶处理以及冷冻干燥处理对抗体的活性都有不利的影响，但一定浓度的乳糖、环糊精和糊精能加强抗体对热处理和蛋白酶处理的稳定性，而环糊精、乳糖、糊精、果糖、葡萄糖、甘氨酸和甘油都能不同程度的加强抗体在冷冻干燥过程中的稳定性。 (5)通过对抗人大肠杆菌免疫蛋黄抗体的功能及其机理探讨发现，抗人人肠杆菌卵黄抗体浓度大于sm留ml，可对大肠杆菌有明显的体外抑菌作用;抗人大肠杆菌IgY对大肠杆菌诱导的乳鼠肠道感染具有显著的预防和治疗作用;抗人大肠杆菌卵黄抗体可抑制大肠杆菌对肠上皮细胞粘附作用，随着大肠杆菌浓度的不断升高，粘附率不断增加，上皮细胞浓度的增加能提高ETEC对其的粘附率。 (6)研究发现，4.0 kGy的“。c。丫射线可使蛋中可能污染的微生物全部灭活，而不影响抗体活性;鸡抗人大肠杆菌抗体对临床检查、血液学、生化学、器官重量、系数及组织病理学等指标无明显影响，证明鸡蛋黄抗体IgY无急、‘漫性毒副作用:通过骨髓嗜染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验及Ames试验，结果证明鸡抗人大肠杆菌抗体无细胞毒，无致突变作用。关键词:蛋黄抗体制备分离提纯稳定性功能食品
孙钦伟[4]2003年在《肠产毒素大肠杆菌高免蛋黄粉抗体的吸收及若干因子对其活性影响的初步研究》文中认为抗大肠杆菌蛋黄抗体粉是目前用来有效治疗仔猪大肠杆菌性腹泻的生物制剂。本实验以抗大肠杆菌(K88、K99、987P)蛋黄抗体粉为研究材料，探索蛋黄抗体粉中的IgY能否通过仔猪的肠道粘膜到达全身作用；验证抗大肠杆菌(K88、K99、987P)蛋黄抗体粉对仔猪腹泻的治疗效果；研究蛋黄抗体粉中IgY对温度、pH、贮存时间及胃蛋白酶的稳定性。实验分四个系列： 实验系列一 两周龄内的哺乳仔猪19头、45日龄断奶仔猪6头及成年大鼠8只，分别口服蛋黄抗体粉悬液。于给予蛋黄抗体前后分别采血，用血凝抑制实验检测血清抗大肠杆菌(K88)免疫活性。发现部分哺乳仔猪外周血清抗大肠杆菌(K88)免疫活性升高，提示蛋黄抗体可通过哺乳仔猪(11-13日龄)胃肠道壁吸收入全身血液循环。 实验系列二 1)用5级不同的温度梯度(50℃-90℃)处理抗大肠杆菌(K88、K99、987P)蛋黄抗体粉，每30分钟取样，检测活性；2)用不同pH值(1.27-11)的溶液处理蛋黄抗体粉，检测抗体活性；3)5种蛋黄抗体粉于4℃存放不同的时间(2个月、4个月、6个月、10个月、16个月)，存放前后测定活性。结果表明，蛋黄粉中的IgY对温度的稳定性良好，70℃时活性开始丢失，90℃时活性迅速下降；pH小于4.0，IgY开始失活，pH1.27活性仅残余25％；于4℃存放2-4个月，活性基本保持不变，6个月以上活性开始丢失。 实验系列三 胃蛋白酶与蛋黄粉以3：100比例混合，混悬于37℃ pH4.0的缓冲液，测定样品中的抗大肠杆菌(K88)免疫活性。发现消化后一段时间内样品抗大肠杆菌(K88)活性升高。 实验系列四 口服抗大肠杆菌(K88、K99、987P)蛋黄抗体粉与肌肉注射抗生素比较，治疗本地猪场中发生黄痢和白痢的仔猪窝群，结果表明，蛋黄抗体粉与抗生素有相同的保护作用，保护率100％。
聂作明[5]2004年在《抗幽门螺杆菌蛋黄抗体的制备及其研究》文中提出本文研究了抗幽门螺杆菌蛋黄抗体IgY－HP的制备方法。幽门螺杆菌HP超声波粉碎离心后的上清液和HP尿素酶混合抗原物免疫蛋鸡，对蛋黄中的IgY－HP进行了分离纯化,并测定了IgY－HP的生物活性及功能性质。通过对幽门螺杆菌培养优化的研究，最终确定了培养基采用哥伦比亚加血培养基，培养条件为：5%O2、85%N2、10%CO2，并通过抽气换气法达到所需培养环境。经鉴定，HP单个菌体典型形状为螺旋弯曲状，有时有短杆和球状出现。快速尿素酶测试呈阳性反应，革兰氏染色证实其为革兰氏阴性菌。试验采用超声破壁法粗提了HP中的主要抗原物质—尿素酶。采用离子交换凝胶层析法纯化粗尿素酶样品，得到了较高纯度的尿素酶，酶蛋白总回收率为3.05％，所纯化尿素酶比酶活为81.491 U/mg；采用离子交换杂蛋白吸附法也可得到一定纯度的尿素酶，酶蛋白总回收率为3.88％，所纯化尿素酶比酶活为87.351U/mg。经SDS-PAGE鉴定，尿素酶A、B两种亚基分子量分别为64000和31000。应用幽门螺杆菌超声粉碎抗原和尿素酶抗原制成的混合抗原对蛋鸡进行免疫后，通过水稀释法结合超滤粗提蛋黄中的IgY－HP，得率为3.2％，然后通过硫酸铵沉淀和离子交换色谱分离纯化IgY－HP，其中硫酸铵沉淀后样品IgY纯度达到84.3％，离子交换层析后样品IgY纯度达到97.3％。经ELISA法测定，和一般IgY相比，IgY－HP的抗HP和抗尿素酶效价分别提高了32倍和16倍。对IgY的耐热、耐酸试验表明：pH对IgY－HP活性的影响和温度有关，温度越高，IgY－HP的耐酸能力越差。在37℃下，pH4.0时IgY－HP开始失活，当pH从4.0下降至3.0时，活性损失大约60%～80%，至pH2.0时，已基本全部失活。IgY－HP模拟胃消化的实验表明IgY－HP耐胃蛋白酶的能力与pH有关。当pH为2.0时，IgY－HP经胃蛋白酶作用后，活性几乎全部失活，而pH为4.0和6.0时，胃蛋白酶对IgY活性无显著性影响。IgY－HP口服所产生的被动免疫效果使得其有望应用于食品保健或各种HP相关胃病的抗菌免疫治疗中。
张国红, 于飞, 王刚, 吴忠伟, 杜国清[6]2004年在《蛋黄抗体制备与应用进展》文中研究表明目的介绍蛋黄抗体的制备与应用研究进展。方法分析、整理和归纳国内外关于蛋黄抗体的相关文献。蛄果综述了蛋黄抗体的来源、特性、IgG和IgY的区别、提取制备方法、精制IgY和粗制IgY的区别,以及蛋黄抗体在医学和兽医临床及其它领域的应用进展。结论利用家禽作为蛋黄抗体的生物反应器是一种非常有发展前景的生物制药方式,精制蛋黄抗体有着非常广阔的应用前景。
杨严俊, 徐榕榕[7]2003年在《抗龋齿蛋黄抗体的制备及功能性研究》文中进行了进一步梳理本论文系统地研究了抗龋齿蛋黄抗体的制备方法,并对其功能性进行了实验。实验结果显示经变异链球菌免疫后可得到高活性蛋黄抗体。体外模拟实验表明经变异链球菌免疫的蛋黄抗体确实具有抗牙菌斑形成的能力,从而具备防龋齿的功效。
盛剑俊[8]2004年在《抗龋齿蛋黄抗体的制备及其研究》文中进行了进一步梳理变形链球菌属是目前公认的致龋菌，其中与人类龋病发生关系密切的是变形链球菌和远缘链球菌。本文通过以远缘链球菌为抗原免疫母鸡使其产生特异性抗体，特异性抗体会从鸡血清中转移至蛋黄内。以这种蛋黄为原料对抗体进行分离提取，获得了具有较高效价的蛋黄抗体。 对远缘链球菌生长条件的研究表明：菌体的最适生长pH为7.0左右，以5％的蔗糖作为碳源时，能使菌体获得较好的生长，而且实验表明PABA有促进远缘链球菌生长的能力，其最佳浓度为10~(-4)g／L。 葡糖基转移酶是导致龋齿的主要毒力因子之一。实验通过超声破壁、硫酸铵沉淀、DEAE—Sepharose以及Superdex 200的分离提取后，GTF的比活力为原来的20.5倍，达到1.91u／mg。对提取的GTF性质研究表明：其反应的最适温度和最适pH值分别为37℃和6.8。 蛋鸡经免疫后，结果表明蛋黄中的抗体在一定时期内维持在较高的水平；通过对鸡产蛋率的监测，可知免疫对鸡总产蛋率影响不大，说明免疫程序合理。蛋黄中的抗体经过一系列提取纯化，最后得到纯度为95.7％的样品，其相对分子质量约为198000。 用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定蛋黄抗体的活性时，该特异性抗体抗远缘链球菌超声破壁液的效价比一般IgY提高了4个滴度，即16倍；而抗葡糖基转移酶的效价比一般IgY提高了2个滴度，即4倍。 抗远缘链球菌的粘附实验表明，蛋黄抗体能有效的抑制远缘链球菌的粘附作用。产酸抑制实验也表明了蛋黄抗体对菌体的产酸量有着明显的抑制作用。通过人体口腔抑菌实验发现，蛋黄抗体能有效的降低变形链球菌与远缘链球菌在口腔链球菌中的含量，从而达到防止龋齿的效果。
姜中其[9]2009年在《仔猪断奶腹泻性大肠杆菌的多重耐药性、毒力因子分布及特异性蛋黄抗体药效的研究》文中研究表明仔猪断奶腹泻(post-weaning diarrhea, PWD)是危害养猪业的重要疾病,主要表现为腹泻和体重增加减慢,严重时仔猪脱水、酸中毒甚至死亡。PWD是一种多因子参与的复杂病症,但大肠杆菌在一系列复杂的生物学过程中是决定性的环节。在不同国家和地区、不同年代,PWD病原性大肠杆菌毒力因子可有较大差异。准确诊断和辨别粘附素等毒力因子类型是有效免疫防治PWD的前提。分离纯化病原菌毛等毒力因子作为抗原免疫产蛋母鸡防治肠道感染是近年来国外学者研究的热点之一。国内在PWD病原性大肠杆菌多重耐药性、毒力因子流行病学和PWD模型建立及菌毛特异性IgY的药效评价及IgY的合理应用方案等方面的研究方面报道很少。本研究直肠棉拭采集浙江地区不同规模化猪场仔猪断奶腹泻病料,应用微生物学技术进行细菌分离培养鉴定,并采用大肠杆菌专属引物通过PCR体外扩增确认,进一步通过小鼠致病性试验得到75株病原性大肠杆菌。玻板凝集试验O抗原检测结果表明分离鉴定病原性大肠杆菌O抗原至少覆盖11种血清型,其中0149、0139、08为优势血清型。采用WHO推荐的Kirby-Bauer法,以大肠杆菌ATCC25922为质控菌,以CLSI的临界浓度为判断标准,对分离的病原性大肠杆菌开展常用抗菌药物的耐药性监测,并采用WHONET进行数据分析。结果表明,病原性大肠杆菌耐药性普遍,其中对氯霉素(100.0%)、复方新诺明(86.7%)、多西环素(82.3%)、链霉素(81.8%)的耐药性很高,对羧苄西林、多粘菌素B及庆大霉素、环丙沙星及诺氟沙星的耐药率也较高,其耐药率分别高达69.6%和66.7%、63.6%,56.4%和61.5%。66株大肠杆菌共有36种耐药谱型,绝大多数为多重耐药。对5种抗菌药物耐药的菌株占比例最大(18.18%),其次是对6种抗菌药物耐药(15.15%)和对9种抗菌药物耐药(12.12%)的菌株；链霉素与多类其他抗菌药存在一定的交叉耐药性。不同规模化猪场病原大肠杆菌菌株耐药性存在一定差异。结果提示,浙江地区规模猪场仔猪断奶腹泻大肠杆菌的耐药性以多重耐药为主,且对抗菌药物的耐药现象已相当严重,在临床选用药物进行治疗时,应充分考虑菌株的耐药性问题,以免延误病情造成治疗失败。采用PCR检测Ⅰ型、Ⅱ型整合酶和耐药基因盒并测序分析。结果表明,Ⅰ型整合酶阳性菌占检测菌株的88.0%(66/75),Ⅱ型整合酶阳性菌占检测菌株的17.3%(13/75)。所有Ⅰ型整合酶阳性菌株均对2种以上抗菌药物耐药,并且检测到Ⅱ型整合酶的菌株中有84.6%(11/13)也检测到Ⅰ型整合酶,提示1株细菌可同时携带多个整合子。Ⅰ型整合酶阳性细菌耐药基因盒检出率为46.7%(35/75),未检测到Ⅱ型整合子基因盒。随机取18株耐药基因盒阳性菌,体外扩增出产物经测序分析,结果表明,250bp、1.1Kb、1.6Kb、1.7Kb和2.0Kb等5种基因盒片段以7种组合方式存在,含有aadA基因和dfrA等耐药基因,分别编码对链霉素和磺胺类药物的耐药性,这与耐药表型检测中分离菌多对这两类药物耐药相符。研究提示,Ⅰ型整合子在介导规模化猪场PWD病原性大肠杆菌多重耐药中有重要作用。应用菌毛单因子血清对分离菌进行玻板凝集试验和多重PCR技术分析粘附素及肠毒素类型。结果表明,PWD病原性大肠杆菌中产肠毒素大肠杆菌(ETEC)占病原性大肠杆菌分离总数的67.92%(36/53)；粘附素F4和F18分别占总检测菌株数的24.53%(13/53)和28.30%(15/53)；肠毒素中产STa、STb、STa+STb、LT和SLT-2e分别占总检测菌株数的30.19%(16/53)、35.85%(19/53)、18.9%(10/53)、1.89%(1/53)和9.43%(5/53)。采用PCR对F4、F18亚型的进一步分析表明,大肠杆菌分离株F4ac占76.9%(10/13),F4ab占23.1%(3/10)；F18分离株均为F18ac(15/15)。研究表明,浙江地区PWD病原性大肠杆菌以产肠毒素型为主,主要毒力因子包括粘附素F4、F18和肠毒素STa、STb。以PWD病原性大肠杆菌优势菌F4菌毛蛋白为抗原,辅以弗氏佐剂,制备免疫原免疫产蛋母鸡生产特异性蛋黄抗体。结果表明,加强免疫后3w,弗氏佐剂组卵黄中效价可达4.41g,在弗氏佐剂的辅助下能维持时间长达9w。卵黄中效价稍低于血清,但在高水平维持时间较长,而PBS组无论卵黄中还是血清中抗体效价均低于弗氏佐剂组。研究还表明,以10μg/ml(1ml/只)剂量免疫蛋鸡,足以获得高效价的抗体。进一步采用喷雾干燥、冷冻干燥和沸腾干燥等方法成功制备高免全蛋粉,经小白鼠急性毒性试验表明属实际无毒物质。体外抑菌试验表明,抗体效价≥1：3000时,IgY能在37℃条件下8h内完全抑制F4+ETEC(菌液浓度为104cfu/ml)的生长繁殖。采用杜长大三元杂交断奶仔猪,通过经口灌服ETEC临床分离强毒株,诱导仔猪发生腹泻,建立PWD模型,并考察上述方法研制的特异性蛋黄抗体的药效。试验分二批进行。试验一,采用F4+和F18+ETEC混合攻毒,仔猪按体重窝别随机分为①IgY组②(IgY+头孢唑啉+大观霉素)组③阳性对照组。试验二,采用F4+ETEC攻毒。仔猪按体重窝别随机分为①IgY组②大观霉素组③阳性对照组。攻毒后每天采取新鲜粪样用平板菌落计数法测定大肠杆菌数。各样本随机取10个菌落采用三重PCR方法测定攻毒菌的比例。结果表明,混合感染两种ETEC后,第1-6d口服IgY试验组粪便评分(日平均)为0.43,显著(P<0.05)低于阳性对照组(1.43)和(IgY+头孢唑啉+大观霉素)组(1.36)。试验二中,F4+ETEC攻毒后第1-6d口服IgY试验组粪便评分(日平均)为0.86,显著(P<0.05)低于阳性对照组(1.57)和大观霉素组(1.50)：粪便中大肠杆菌总数及攻毒菌的排出量方面,无论是混合感染还是单独感染,IgY组仔猪均低于阳性对照组,且排毒持续时间短。本研究提示,无论标准株还是分离株,F4菌毛均具有良好的免疫原性,结合弗氏佐剂按一定程序免疫母鸡,能诱导产生高效价的抗体且能持续较长时间并转移至蛋黄中。本试验建立的PWD模型操作简便,重复性好,能用于深入研究PWD发生发展机理和评价抗仔猪断奶腹泻的药效。三重PCR具有特异性和较好的灵敏度,能快速检测攻毒菌在肠道的排出动态变化。特异性抗体均能有效地控制腹泻的发生发展,有效口服剂量为每次0.3g/kg.bw,3次/d,连续应用3-5d。宜与抗F18菌毛特异性抗体联合应用,但不宜与抗菌药物合用。以上结果为深入探索PWD病原性大肠杆菌的致病机理、耐药机理和耐药控制,特异性IgY被动免疫防治PWD的研究奠定了良好基础。
凌育, 郭予强, 杨连楷, 李健东, 罗映霞[10]1996年在《禽霍乱免疫母鸡血清抗体和蛋黄抗体消长规律及其相互关系的研究》文中研究说明通过对禽霍乱菌苗免疫产蛋母鸡的血清和蛋黄的抗体定时检测后发现，免疫母鸡的血清抗体和蛋黄抗体的升降趋势基本一致（ｒ＝０．９４），但后者较前者迟后３～６ｄ；血清抗体和蛋黄抗体的滴度分别在加强免疫后的１～３ｄ和３～６ｄ都有不同程度下降，加强免疫前的滴度越高，免疫后的滴度下降幅度越大；蛋黄抗体水平普遍比血清抗体水平低，两者间的差异极显著（Ｐ＜０．０１），这可能是与禽多杀性巴氏杆菌本身的主要抗原成分（ＴＩ抗原）在鸡体内主要产金ＩｇＭ有关。
参考文献：
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[10]. 禽霍乱免疫母鸡血清抗体和蛋黄抗体消长规律及其相互关系的研究[J]. 凌育, 郭予强, 杨连楷, 李健东, 罗映霞. 畜牧兽医学报. 1996
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