湖南省郴州市苏仙区街洞医院 423016
摘要：目的 探析西罗莫司对于抑制肾移植后AGE诱导动脉粥样硬化产生的临床机制。方法 选取我院8例接受肾移植后的动脉粥样硬化患者的第5代的主动脉平滑肌细胞（VSMC）为研究对象，将其分为四组，分别给予牛血清蛋白、西罗莫司&AGE、AGE和西罗莫司培养。对四组培养α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、骨桥蛋白（OPN）、增殖细胞核抗原（PCNA）的表达进行对比分析。结果 经AGE培养，α-SMA表达明显减少（P＜0.05）；OPN和PCNA的表达明显升高（P＜0.05）；观察组中的OPN和PCNA明显低于AGE组，且α-SMA高于AGE组（P＜0.05）。结论 西罗莫司对于抑制肾移植后AGE诱导动脉粥样硬化具有极其重要的临床作用。
关键词：西罗莫司；抑制肾移植后AGE诱导；动脉粥样硬化
动脉粥样硬化成为现阶段临床上导致心脑血管疾病患者死亡的主要原因，且经肾移植后患者的疾病年增长率逐渐上升，术后死亡率较高。通过对以往的医学文献和报道进行研究[1]，发现肾移植受体者体内的糖基化终末产物浓度可能对动脉粥样硬化的诱导造成一定影响。现选取我院8例接受肾移植后的动脉粥样硬化患者以及第5代的主动脉平滑肌细胞为研究对象，对其抑制情况进行评价，具体如下。
1资料与方法
1.1一般资料
1.1.1病历资料
选取2013年5月~2014年6月我院8例接受肾移植后的动脉粥样硬化患者。病例纳入标准[2]：第一，所有患者在确诊后均给予西罗莫司进行抗排斥反应治疗，治疗时间为1年；第二，所有患者确诊为动脉粥样硬化后和使用西罗莫司治疗前均行移植穿刺肾活检，且在治疗1年后再次进行活检；第三，所有患者的临床症状均符合动脉粥样硬化的临床诊断标准，且均在参与研究前签署知情同意书。
1.1.2实验动物及实验试剂资料
实验动物：本次研究中的动物研究对象为6周大的雄性大鼠，大鼠体重为0.2kg。
实验试剂：本次研究采用美国进口的增殖细胞核抗原抗体、α平滑肌肌动蛋白抗体和骨桥蛋白抗体的实验试剂。
1.2方法
1.2.1分组方法
以第5代的主动脉平滑肌细胞（VSMC）为研究对象，将其分为对照组（牛血清蛋白培养）、观察组（西罗莫司&AGE培养）、AGE组（AGE培养）以及西罗莫司组（西罗莫司培养）。
1.2.2大鼠主动脉平滑肌细胞的分离、培养、鉴定及检测方法
分离和培养：采用组织块贴壁法对大鼠的主动脉平滑肌细胞进行分离和培养，将处死后的大鼠放在无菌环境下，并将其主动脉剥离出来，而后将大鼠的主动脉平滑肌细胞移到DMEM培养液中，将分离出的血管平滑肌剪成1mm×1mm的碎片。将4块碎片接种在胎牛血清的37℃培养皿中，每2天更换一次培养皿中的液体。待培养皿中的细胞生长情况达到一定标准，则使用2.5g/L的胰酶进行消化和传代。
鉴定：选取培养至第5代的大鼠主动脉平滑肌细胞，使用α-SMA抗体间的免疫荧光染色法进行鉴定。使用磷酸盐缓冲液反复冲洗细胞爬片，每日3次，并将其放置在-20℃的甲醇中进行固定，固定时间为10分钟。而后加入含1/50的牛血清蛋白，并在室温下进行清洗，清洗时间为1小时，最后，使用辅助拍照工具将荧光显微镜中的检查结果进行记录。
检测：本次研究采用蛋白质印迹法对大鼠主动脉平滑肌细胞进行检测，在100℃的温度下将各种细胞收集在一起并加热5-10分钟，并取适量的SDS-聚丙烯酰胺凝胶与适量的蛋白混合。将含有检测抗体的50g/L脱脂牛奶溶液放置在4℃的是室温条件下，并在此环境下孵育2小时，若孵育效果较好，则可以适当缩短孵育时间。将大鼠主动脉平滑肌细胞充分洗涤，使用增强的化学发光系统检测标本膜上的信号进行检测，并通过X线片将试验结果记录下来。
1.3统计学方法
本研究所有数据均采用Image J及Graph Pad统计软件进行数据统计，计量资料用（+s）进行表示，采用t进行检验，技术资料用%表示，采用X2进行检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。
2结果
2.1 四组主动脉平滑肌细胞上PCNA的表达情况比较
AGE组和观察组主动脉平滑肌细胞中的PCNA表达量高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），且观察组主动脉平滑肌细胞中的PCNA表达量低于AGE组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。具体见图1。
3讨论
肾移植术后的远期影响中最为常见的并发症之一就是心脑血管疾病，对肾移植受者的生存质量造成严重威胁，甚至会造成患者死亡。通过对大量文献和报道的研究[3]，发现肾移植后病发动脉粥样硬化受者的AGE浓度较高，可促进主动脉平滑肌细胞发生转化和分型，从而导致患者出现动脉粥样硬化。西罗莫司作为一只动脉粥样硬化形成的有效药物，可以AGE为靶向点，通过与受体的结合抑制器官移植。此外，西罗莫司还可以在非肾移植受者体内形成抗体，但其临床效果尚不明确。
本次研究结果显示，正常培养SD大鼠在第2代和第5代的VSMC具有高度表达性，经AGE培养，α-SMA表达明显减少（P＜0.05）；OPN和PCNA的表达明显升高（P＜0.05）；观察组中的OPN和PCNA明显低于AGE组，且α-SMA高于AGE组（P＜0.05）。本次研究结果与相关结果相符[4]，从结果中可以看出，西罗莫司对于抑制肾移植后AGE诱导的机制作用较为显著，具有较好的临床研究价值。
综上所述，西罗莫司对于抑制肾移植后AGE诱导动脉粥样硬化具有极其重要的临床作用，可有效抑制主动脉平滑肌细胞的生长，因此，值得在临床上进一步推广和应用。
参考文献：
[1]刘绪忠，刘超，汪俊，等.西罗莫司抑制肾移植后AGE诱导动脉粥样硬化形成的作用及其机制[J].中华器官移植杂志，2014，35（4）：211-215.
[2]蔡明，许亮，王强，等.经腹膜后入路腹腔镜活体供肾切取术中肾动脉结扎方式的临床经验分析[J].中华器官移植杂志，2012，33（10）：605-608.
[3]赵大强，洪良庆，王长希.肾移植术后西罗莫司的应用方案选择[J].世界临床药物，2014，14（28）：156-158.
[4]乔良伟，梁韶峰，曲青山.西罗莫司在肾移植后近期应用中的疗效分析[J].河南外科学杂志，2013，19（36）：1-3.
论文作者:陈利
论文发表刊物:《健康世界》2016年3期
论文发表时间:2016/5/30
标签：平滑肌论文; 主动脉论文; 动脉论文; 肾移植论文; 细胞论文; 粥样论文; 诱导论文; 《健康世界》2016年3期论文;